大肠癌红细胞生成素受体的表达

辽宁医学杂志 2003年第 17卷第 2期 大 肠 癌 红 细 胞 生 成 素 受 体 的 达 · 81· 中国医科大学附属第一 11 萎墓陈波路¨ 徐惠绵王舒宝 沈 阳 市 第 四 人 民 医 院 急 诊 科 陈广泉 【摘 要l 目的 检测大肠癌红细胞生成素受体(EpoR)的表达，探讨其临床意义。方法 用 Western印迹法检测 42例大肠癌组织及其相邻正常组织红细胞生成素受体的表达。结果 30．1％(13／42)大肠癌组织红细胞生成素受 体表达阳性，显著高于其相邻正常组织的红细胞生成素受体的表达率(8．6％，4／42，P<0．005)。结论 大肠癌组 织可有EpoR的表达，其意义有待于进一步探讨。 【关键词】 大肠癌 EpoR 我们检测了大肠癌临床标本 EpoR，探讨大肠癌 发生、发展过程中 EpoR表达的生物学意义。 1 材料和方法 1．1临床标本 、42例大肠癌标本 于 1997年 1月至 1998年 1月取材于中国医科大学附属第 一医院肿 瘤科 ，其中男 23例，女 19例。年龄26～75岁，平均 57．O5岁。结肠癌 26例 ，直肠癌 16例 。手术方式 为大肠癌根治术(日本大肠癌手术规约，1997年)， 所有患者术前均未经过化学治疗和生物治疗。所有 标本(肿瘤组织及距肿瘤边缘 ≥4cm 相邻正 常组 织)，均于术后 3O分钟内切取，一7O℃冻存，备用。 阳性对照为细胞系 K562。 1．2主要 试剂 抗 EpoR抗体 为 polyclonal anti— EpoR antibody(C20，affinity purified antibody，1： 1000 dilution；Santa Cruz Biotechnology，Inc．，Santa Cruz，CA)。抗 ERK2抗 体 (D一2，affinity purified polyclonal antibody，l：2000 dilution)亦 为 Santa Cruz，CA公 司产 品。细胞 裂解 液应 用 RB buffer (20mM TrisHC1，pH 7．6，150mM NaC1，0．5％ NP一 40，50mM NaF， 1mM p—glycerophosphate， 1mM Na3VO4，5mM Na4P2O7，5mM EDTA ，10ug／ml each of leupeptin and aprotinin)，含 有 Protease Inhibitor Cocktail(Roche，Diagnostics，Tokyo，Japan)。 1．3 Western印迹法 肿瘤组织及相邻正常组织经 RB buffer裂解，提取蛋白质，蛋白质定量后，分别取 100ul进行 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)。再 分别用一、二抗标记，ECL显像于 x线胶片上。 1．4统计学 数据分析采用 x 检验。 2 结 果 大肠癌组织中 13例(30．1％)表现出红细胞生 成素受体表达阳性，4例相邻正常组织的红细胞生 成素受体表达阳性，表达率为 8．6％(见表 1)。大 肠癌组织红细胞生成素受体以弱表达为主，部分相 邻正常组织也表现出红细胞生成素受体弱表达。1 例患者其相邻正常组织的红细胞生成素受体的表达 阳性 ，但是其原发肿瘤组织表达阴性；其他 3例相邻 正常组织的红细胞生成素受体 的表达阳性 ，均伴有 原发肿瘤组织表达。 表 1 红细胞生成素受体(EpoR)在大肠癌组织中的表达 3 讨 论 红细胞生成素(Epo)与幼红细胞表面 Epo受体 (EpoR)结合 后，EpoR形 成 二聚体 ，再 通 过 JAK／ STAT 和 Ras／MAP激酶 等信号传导途径调节 红系的增殖和分化。大量的研究表明，在血管内皮 细胞 J、神经 细胞 J、B淋 巴细胞 有 E1)oR的表 达。本课题组曾经检测了白血病细胞系 E1)oR的表 达 J，其结果表明 B淋巴细胞 白血病细胞系和非淋 巴细胞白血病细胞系中均发现 了 E1)oR的表达 ，部 分白血病细胞系能被 Epo刺激而增殖。 关于实体瘤 E1)oR的表达，Geza Acs-8 考察了乳 腺癌临床标本发现乳腺癌标本可 以高水平表达 Epo、EpoR，其表达与乳腺癌细胞 的恶性表型及肿瘤 的血管形成有关，但与正常乳腺组织、乳腺良性肿瘤 和纤维囊性组织无关 ，从而得出结论 ：乏氧内环境可 以通过 Epo的作用导致人类肿瘤的发展。本课题组 的研究结果表明，乳腺癌确有 EpoR表达 ，相邻正常 维普资讯 http://www.cqvip.com · 82 · 组织却少有表达 ，表 明其与乳腺癌的发生、发展有 关 ；78．2％浸润性乳腺癌组织表达 EpoR，表明其表 达可能与乳 腺癌的浸润特性 关系密切 (结果待 发 表)。Fatouros MS等‘9 报道红细胞生成素可以通过 增加纤维数量和促进新生血管的形成而增强大肠组 织的愈合能力，本实验结果表明，EpoR在大肠癌组 织中确有表达 ，其表达水平显著高于相邻正常组织。 尽管已经有大量报道证 明 EpoR在肿瘤 组织 中表 达 ，但没有证据表明外源性 rHuEpo能够促进肿瘤 细胞增殖。某些特殊细胞表面受体提供了良好的肿 瘤治疗靶点 ，有可能成为新 的肿瘤治疗手段。信号 传导通道可能存在可以操作 的治疗靶点。Epo可以 激活两条信号通道 ：JAK2／STAT5和 ERK信号传导 通道。JAK2／STAT5信号通道在从红细胞前体诱导 的过程中是关键蛋白，然而当 Epo刺激血管平滑肌 细胞时 ，表现出高水平的 ERK激活 ，不伴有 JAK2／ STAT5磷酸化的改变-】 。EpoR在大肠癌组织中表 达临床意义有待进一步研究。 4 参考文献 1 Sawyer ST。Kalyani Association of JAK2 and STAT5 with erythro— poietin receptors．J Biol Chem。1996；271：3243 2 Oda A，Sawada K，Druker BJ，et a1．Erythrepoietin induces tyrosine phosphorylation of JAK2，STAT5A，and STAT5B in primary cultured 辽宁医学杂志 2o03年第 17卷第 2期 human erythroid precursors． Blood，1998；92：443 3 Miura Y．Miura 0，Ihle JN，et a1．Activation of the Mitogen activated protein kinase pathway by the erythrepoietin receptor．J Biol Chem． 1994；269：29962 4 Anagnostou A，Lee ES，Kessimian N．et a1．Erythrepoietin has a mito— genie and positive chemotactic effect on endothelial cells．Proo Nail Acad Sci U S A，1990；87：5978 5 Juul SE．Anderson DK，Li Y，et a1．Erythrepoietin and erythrepoietin receptor in the developing human central nervous system．Ped ia Res， 1998；43：40 6 Kimata H，Yoshida A，lshioka C，et a1． Human recombinant erythro— poietin directly stimulates B cell immunoglobin production and prelif- eration in ser1．1m —free med ium． Clin Exp lmmuno1．1991；85：151 7 樊华，杉 田完尔 ，翟明，等 ．红细胞生成素受体介导的白血病细胞 系增殖信号传导的研究 ．中华血液学杂志，2000；21：295 8 Geza Acs，Peter Aes，Susan M ，et a1．Erythrepoietin and erythrepoie— tin receptor expression in human Cance~Can cer Research，2001； 61：3561 9 Fatoures MS，Vekinis G，Bourantas KL，et a1．Influence of growth factors erythropoietin an d granulocyte maerophage colony stimulating factor on mechan ical strength an d healing of colonic an astomoses in rats．Eur J Surg，1999：165：986 10 Ammarguellat F，Llovera M ，Kelly PA et a1．Low doses of EPO aeti— vate MAP klnases but not JAK2一STAT5 in rat vascular smooth mRs— cle cells．Biochem Biophys Res Commun 2001；284：103 1 马 凡 氏 综 合 征 1 例 报 告 沈 阳市第 四人民医院眼科(110031) 张未来 乔 光 1 病历摘要 女患，40岁。双眼视力下降 6年，加重 l周，于2002年 8 月 16日来我院就诊，以双眼晶体半脱位收住院。入院检查： 一 般状态良好，智力正常，身高 180cm，身材瘦长，四肢手足 指(趾)长而细，关节正常。双侧桡动脉搏动对称，双侧腕征 阳性。心界叩诊向左扩大，心率 90次／分，律齐，未闻及杂 音。腭弓明显增高，眼部情况：Vd：0．3，Vs：0．5(矫正)。双眼 角结膜未见异常，前房深浅不一，虹膜震颤，纹理清，瞳孔圆， 大小及光反射正常。瞳孔区可见部分晶体，右眼透明晶体向 下方脱位，左眼向颞侧脱位，散瞳后见晶体赤道边缘和疏稀 的悬韧带。眼底正常。心脏彩超提示：主动脉增宽，左心室 偏大，二尖瓣 返 流(微-少量 )，左 心功 能正常 。胸部 MR扫 描：动脉窦瘤样改变。诊断：马凡氏综合征，双眼晶体半脱 位 。于 2002年 8月 19日，于局麻下行右眼 白内障囊 内摘除 +人工晶体缝袢+虹膜根切术，术中顺利，术后视力：0．6，人 (本文编辑 佟 昕) 工晶体位置正，眼压 10mmHg，术后 l周左眼因经济问题未行 手术出院。 2 讨 论 马凡氏综合征是一种染色体异常的遗传性结缔组织疾 病 ，临床表现主要累及心血管 、眼、骨骼 、神经系统。患者多 以视力下降到眼科首次就诊，多数病例晶状体脱位移向鼻上 方，少数可向颞侧移位。患者有时因晶状体悬韧带发育不良 偶遇震荡自行断离，而使晶状体脱臼或全脱臼向前脱人前 房，或向后落到玻璃体脱中引起继发青光眼。 近年来随着现代白内障人工晶体植入术的开展，大部分 此类病人可安全承受眼科手术 ，患者术后视力恢复好 ，术后 可继续从事正常工作、学习、生活，少数心血管异常明显者 ， 全身治疗后仍可行眼科手术。 (本文编辑 佟 昕 ) 维普资讯 http://www.cqvip.com