环磷酰胺对大鼠的致畸性和染毒程序的探讨

癌变 · 畸变 · 突变 1 , 9 4年第6 卷第6 期 环磷酞胺对大鼠的致畸性和染毒程序的探讨 章晓玲 项 华 氛振华 杭州市卫生防疼站毒理科 杭州 3 1 0 。。6 摘 要 本义对环磷酞胺 (C r )的致畸性相染毒程序 J川于探讨 。 用 10 。盯蚝剂量分 d , ,和 d , 。 、 山 1两组进行腹 腔注射 , 使孕鼠体重增长受抑 、 少匕胎 , 吸收胎增加、 并出现大量畸胎 , 表明d 」(l( ip )lom : 组环磷酞胺具有母 体毒性 , 胚胎毒性和致畸性 。 阴步确定 , 孕鼠妊冷刮 , (l , 一 次注射 lom g庄、Ci l溶液是较为合i查的染毒时间和 玫畸剂量 。 关键词 环磷 队肛 ; 效fll.b 忆 ; 染毒涅序 ST U D Y O N T H E T E R AT O G E N !C E FFE CT S O F CYCLOPH O SPH AMID E W IT H V AR !OU S D OSAG E SC H E D ULE S IN R AT S Z h a n g X la o lin g , X ia n g H u a , Y u a n Z h en h u a T 几e D e夕a r t lzze n t o f T o x iC o 乙0 9夕 Il a ,: g 名}: o u 11夕g ic 7z“ a )ld A , : ti一 cPid o zz zie S z a tio n , H a 护29 艺几o u 3 1 0 0 0 6 A b str a e t T h e I n v es t ig a tio n o f te r a to g e n ie ity e ff e e t o f C y elo Ph o 5 Ph a m id e w a s ev a ]u a te d w ith v a r io u s d o sa g e 、e h ed u le 、 in r a t、 . C ye ] o Ph o 5 Ph a m id e w a s a d m in is te r e d ip 1 0 m g / k g a t th e 1 0 th d a y a lld 1 0 一 1 1 th d a y a f te r g e s ta tio n . T h e r e s u lts sh o w ed th a t th e b o d y w eig h t g a in s o f P r e g n a n t r a ts d e e r e a 、ed , d e a d a n d a b 、o rb ed f e t u se s in e r ea se d a n d f o u n d m a n y te r a to g e n y s . lt sh o w ed C y elo Ph o 5 Ph a m id e p o ss e s m a t e r n a l t o x ic ity , e m b ry o to x ic ity a n d t e r a to g en ie ity . W e ha d d efin ed th a t C ye lo p h o o p h a m id 1 0 m g / k g o n e e a d m in i、te r ed b y ip , a t 1 0 th d a y in g e s ta tio n o f r a ts w a 、 a PP r o P ri a te te r a t o g e n ie d o se a n d e x P o s in g fim e . K e y w o r d s C y c lo p h o s p h a m id ; t e r a to g e n ic ity ; d o s a e seh e d u les . 自六十年代初反应停事件发生以 末, 药 物和环境化学物的致畸性研究至今已取得了 许多重要进展 , 但到 目前为止 , 传统的致畸 试验尚无明确可靠的致畸 !种胜对照物 , 囚 内 过去常用的 阳性对照物敌枯双目前 己禁止生 产 。 因此 , 当务之急 , 是要寻找 一 种 可 靠 的 , 相对安全的阳性致畸物 。 有关环磷酚胺 (c yc lo p h o s p a m id e , C p )对大鼠的致畸性 , 国外 虽报道较多 , 但国内尚无系统的专题报 导 。 鉴于国产的 C P 与国外同类产品在品质 和作川上可能存在差异 , 实验动物的种类和 沉:系 也不尽相同 , 加上 C P 的致畸 带 又 很 窄 , 因此 , 有必要对 C P 对大鼠的致畸剂童 和染毒程序作深入的探讨 , 以便加以推广应 )l! 。 . 2 7 . 和 ]. 材料 : 受试样品环磷酞胺 (C P ) , 为 白色 颗粒状晶体 , 溶于水 , 由上海第十二制药厂 生产 , 批 号1 9 8 1第 0 3 64 号一 (十二 )。 实验动 物为 浙江医科大学实验动物中心提供的 s D 大鼠。 2 . 方法 ; 选用健康性成 熟 的 s D 大 鼠 以 雌 : 雄 一 2 : 1同笼 , 次 日晨开始检查阴道涂 片 , 以查出精 子的当天为零天 (d 0) , 染 毒 程序 , 参照 M a n沁 的方法和国 外 其 它 报 道 (‘)分成 A 、 B两组 , A 组于d ; 。腹腔注射一 e p 洛液 , B 组则分别于 d : 。 和 d , , 腹胜注射 cP 溶液 。 两组的剂量均为 10 m g / k g 。 另设阴性 对照组 。 孕 鼠 d 3 、 d 。、 d 。、 d , z 、 d , 5 、 d l。 和 d Z 。称重 。 于d Z 。解剖 , 记录每窝胎鼠数 、 身 长 、 体重 、 死胎和吸收胎数及外观畸形 , 然 后将 2 / 3 胎鼠剥皮去内脏 , 茜素红液染色 , 观察骨骼畸形 、 1/ 3 浸入波氏液中 , 作徒手 切片‘ , 检查 内脏 。 结 果 1 . C P对孕 鼠体重的影响 表 1 环磷欲胺对孕双体重的影响 孕 组别 鼠 数 体重增长 (g ) 平 均 增重 (万 上名) 一JU一d一 目 d一‘d一JU一JU一1曰 2 1 1 。 0 2 0 1 。 0 2 0 4 . 2 1 0 。 7 6 。 3 1 3 。 2 3 。 1 5 。 8 2 。 2 7 。 6 0 。 9 3 1 。 9 2 6 9 . 7 4 7 。 2 7 士 2 1 。 9 8 奋 1 。 9 3 5 。 1 0 上 2 8 。 3 2 ’ 3 0 . 1 1 0 9 。 3 0 上 」8 。 9 0 5771.6.8. ,土月上件」1止J土1A 组 B 组 阴性刘照 组 · (P < 0 。 0 1 ) 从表川“ 可见 , A 、 B 两组的 孕鼠体重增 重都明显低于 !渺川抓寸照组 (尸< 0 . 01 ) 。 在 本 次实验中观察到 , 一旦孕 鼠注射 C P , 其体 重增 一长明显减 慢 , 具 体 表 现 在 d 。一d : 。 , B 组 、 A组和 阴性对照组的体重增 一民值分别为 1 7 . 1 9 、 1 9 . 29 和8 6 . 7 9 多愁总的平均增重也 , ,飞 现一定的剂量一反应关系所以 C P 对母体的 毒性是很明显 的 。 2 . C P对孕 鼠生殖和胚胎发育的影响 表 2 环磷酞胺对孕鼠生殖的影响 组别 窝平 均 吸收胎 数 (% ) 总着床数孕鼠数 阴性刘照 组 5 。 1 8 (5 9 。 3 8 ) 0 1 0 。 0 8 ( 9 7 。 0 4 ) 1 。 0 9 (1 2 。 5 ) 帝 3 。 7 3 (4 7 。 6 7 ) 帝 0 。 2 3 (2 . 2 2 ) 2 。 4 5 (2 8 。 13 ) ’ 4 。 0 9 (5 2 。 3 3 ) ’ 0 。 0 8 (0 。 74 ) 7 (6 3 。 6 4 ) . 9(8 1 . 8 2 ) 1 (7 。 6 ()) J护七J卜目J‘OJ48 门1 J土,一,注j土组组AB , P < O 。 0 1 表 3 环磷既胺对孕鼠胚胎发育的影响 组别 身长气C l】l j 多住气C l ll夕 堡再气g 声 仕 别比(五J/ F ) 孕鼠数 3 。 0 2 土O 。 3 2 ’ 1 。1 9 上 0 。 1 3 . 2 . 4 9 上 0 . 5 8 . 命 1 。 0 4701111组组AB 阴性刘 照组 3 . 6 1 上 O 。1 3 1 。 3 8 0 . 1 1 3 . 5 , 止O 。3上 1 , 1 5 。仍 , . 2 8 . 从表 2 、 3 中可以看出 , B 组引起了相当 效量的死胎和吸收胎而无活胎幸存 , 显示了 较高的胚胎毒性 。 A 组也有 一定的死胎和吸 收胎出现 , 几 A 、 B 两组的窝平均死胎数明 显高于阴性对照组 (P< 0 . 01 ) , 并呈剂量反 应关 系 ‘。 吸收胎与阴性对照组之间也有显著 性 差异和刘最反应关系 , 并 且 B 组 高 于 A 组 。 A 组幸存的活胎中 , 其身长 、 尾长 、 体 重均明显低于 阴性对照组 (p < 。. 0 1 ) , 其它 指标 与对照组无明显差异 。 3 . C P对胎鼠生长发育的影响 A 组的活胎中 , 主要的外观畸形表现 为 脑膨出与脑外露 , 小头 , 腹部水肿 、 短肢 、 脚内(外 )翻 、 短卷尾 , 缺趾和并趾等 。 骨骼 的畸形最为明显 (见表4 ) , A 组所有种类的骨 骼畸形率与阴性对照组相比 , 均有 一作常显著 表 4 环磷酞胺对胎限生长 发育的影 响 组 别 受检胎 鼠数 头 顶骨 畸形 (% ) 头顶 间骨畸形 (% ) 枕 骨 畸形 (% ) 舌骨缺少 (% ) 第 1 3 肋短缺 (% ) A 组 弓7 2 9 . 73 今 弓4 一0 5 8 9 . 1 9 ’ 1 3 . 熨 弓 8 1 。0 8 . B 组 O 一 一 一 一 一 阴性对照组 2 。3 8 续表 4 胸骨 缺少 (% ) 锁骨缺少 (% ) 骨 化迟缓胎 鼠数 (% ) 脑水 积水 (% ) 皮下 水 肿 (% ) 颅腔 淤 瓜 (% ) 8 。 1 1 . 72 。 9 7 . 3弓。1 4 ’ 6 5 . 0 . 4 0 。 0 . 1 5 。 0 ’ 6 1 。 9 0 0 0 5 。 9弓 0 0 0 尸< 0 . 0 1 的差异 (p < 0 . 0 1 ) 。 除表中所列的之外 , 骨 骼畸形表现还有 : 波状肋 , 第 9 一 12 肋 骨 缺 少 , 尾椎缺少 , 脊椎缺骨化中心并弯曲不整 齐 , 脓骨 , 尺挠骨和掌骨缺少等 。 骨化迟缓 的比率也明显高于阴性对照组 。 徒手切片内 脏检查 , 除有脑内部积水 , 淤血和皮下水肿 以及个别有 肾萎缩外 , A 组和对照组均未发 现 明显 的内脏畸形现象 , 但脑部组织的畸形 率明显高干阴性对照组 (p < 0 . 0 1) 。 讨 论 环磷酞胺 (C P )是一种烷化剂 , 属 杭 有 丝分裂药物 , 根据 M irk e “ 的观点(“), 神经 上皮和间质组织对 C P 的细胞毒作用 最 敏 感 , 外胚层(骨骼起源于此 )次之 , 而心脏等 内脏器官则有完全的耐受 廿性 , 这些与水实验 的结果基木相吻合 。 E P A 规定 以轻度母体体重下降或增 重 受抑及死亡率< 1 0 % 作 为 母 体 毒 性 的 指 标、3 ) , 体重增加受抑的原 因除了药物影响胎 鼠发育迟缓外 , 还可能因为引起较多的吸收 胎和死胎 。本实验结果表明 , 环磷酞胺在致畸 试验中表现 出明显的孕鼠母体毒性及胚胎毒 性效应 , 并随着给药次数的增加 , 母体毒性 与死胎率也增加 , 因此 , 化学物所引起 的胎 儿畸形和胚胎 一胎儿死亡 , 多数是母体 毒 性 木身的后果(’) 。 据此 可 以 认 为 环 磷 酞 胺 ( ]0 m g / k g) 具有 明显的母体毒性 。 本次实验中 , 母鼠妊娠第 10 天注 射 10 m g / kg C P 即引起相当数量 的畸胎 , 同时又 产生了吸收胎 , 随着给药次数的增加 , 吸收 胎也增加 , 而畸胎率则下降 , 这 与一般药物 生殖毒性与剂量关系相符 。 A 组中胎鼠的长 度 , 体重均明显低于阴性对照组 , 表现为胚 胎生长迟缓 . 它与畸胎 、 吸收胎 的 大 量 出 现 , 都 10 m g / k g c P 也具有明显的胚胎 毒性 J 在木实验条件下 , 畸胎常与死胎 、 吸 收胎同时 出现 , 似乎丧明了同类性质损害的 不同程度的反应咬弓)。 每种致畸物都有在某器官的最敏感期 内 引起畸形 , 根据国内外的有关资料 (“)和本实 验结果 , 可 以认为 10 m g / k g 是 C P 的最小 致畸剂量 , 同时 , 由于 C P 的致畸带非常狭 窄 , 稍低于或高于该值 , 都可能得不致畸结 果(“), 因此 , 10 m g / k g 是比较适合的致畸剂 )贡惬。 在胚胎器官形成期这一致畸敏感期内给 药日期不 同 , 产生的胎鼠各器官的致畸敏感 期也不 同 。 W il s o n 认为 (5 )第 9 一 n 天为脑和 神经器官的致畸敏感期 , 其中第 10 天为最敏 感期 , 骨骼为 1 0 一 12 天 , 心脏和主动脉弓为 1 0 一 ]2 天 , 而泌尿生殖系统则为 1垂一 16 天 。 在 本 次实验仔, , B组 ( 1 0 、 1 1 两天连续给药 ) , 出现 一 ]-’大 l西的吸收胎和死胎 , 而 无 活 胎 幸 存 。 可能是两次给药剂量使受损伤的细胞大 幅度增加 , 导致胚胎死亡 , 从而掩盖了致畸 作用的显现 。 A 组亦出现部分死 胎 和 吸 收 胎 , 但多数胚胎仍存活 , 并伴有各种畸形产 生 , 主要表现为脑部组织和骨骼的畸形及胎 鼠的发育迟缓 , 这 与 W il只On 等的文献报道 是 一致的 。 参考文献 1 . M a n s o n JM , e t a l 。 T er a to g y T e , t M o t h o d o f I a b o r :‘t o r y A n i m a ls . Jn : H a y e s A W , 。t a 1 e d o . Pr in eip le s a n 〔1 M e tho d o o f T o x ie o lo ‘y . R a v e牡 Pr e ss , 1 9 8 2 ; 1 4 t 一 1 8 4 . 2 . M ir ke r FE . 介 r a to g 叮 : : C a r c ‘”o 刀e ,, M : ‘ta 刀e , : , 1 9 8 弓, 5 (2 ) , 7 5 . 3 . Se }i a r (lein JL . A p l) r o : 、。h e勺 t o ‘I‘fin o tl: e f e la tio n sh iP o f rn a tc r n a l ;、n ‘1 olc、 。! o p m e n t tu x ie it y . Te r a to g e n C a r f f月o g e l亡 M 泣才ta 口尸六 - 1 9 3 7 ; 7 , 2 5 5 一 2 7 1 . 4 . K h e r d K S . M a to r n a l t o x io ity : 人 . 1 , 。。。ibl。 。 tio lo g io a l fa 一t o r in e rn br y o 一 f。之a l ; !。a t l一, : 、n 一l f。 、 t a l n l: 、lfo r : n a l io 卫 , o f r u (1。幻 t一 r a 卜卜it 、P ‘、、10 5 . T 尸r a to 丁。夕y , 1 98 5 , 3 1 , 1 2 9 一 15 3 . 5 . 李寿棋 . 卫生 毒理学基 本原 理和方法 . 四 川 科一 学 技术 出版 社 , 19 8 7 : 1 71 , 1 7弓. 兴兴狱丫狱兴只兴兴兴兴兴兴只兴兴兴兴兴兴兴兴兴兴兴兴兴兴丫兴兴兴兴兴兴兴兴兴兴兴 癌变 · 畸变 · 突变 1 9 94 年第 6 卷第6期 兴安升麻总皂试对丝裂霉素C诱发人外周血淋巴细胞 S C E 频 率的影响 林 新 蔡有余’ 肖培根 中国医学科,学院药用植物资源开发研究所 1 0 0 0 2 ] 化京 1。。。9 违 ’中国医学科学院实验动物研究所 北京 摘 要 选择正常健康人为对象 , 研究兴安升麻总 皂试对丝裂霉素C( MMc) 诱发人外周血淋巴细胞姐妹染 色单体互换 (S is t e r Ch r o 过a ti d E x eh 。二 g e , SCE )频率的影响 。实验分为 1 0 . 9 4“g / m l 、 4 3 . 7 5卜g / m l 、 1 7 5 . 0“g / m 1 3 个升麻剂量组 , D MSO 溶剂对照组 , MM C 阳性对照组和空白对照组 , 比较不同浓度兴安升麻剂量组 , 对 MMC 诱发体外人外周 血细胞 S C E 频 率的羊异 。 结果表明 , M M C 加兴安升麻组SC E频率 与对照组比较 . . 3 0 .