枸杞多糖对人宫颈癌细胞生长及细胞凋亡影响

3 基金项目 : 湖北省科技厅重点攻关课题 (2001AA307B) ; 达能膳食 营养研究与宣教基金 (200305) 　作者单位 : 武汉大学公共卫生学院营养与食品卫生学系 ,武汉 430071 　作者简介 : 崔晓燕 (1980 - ) ,女 ,河南郑州人 ,硕士在读 ,研究方向 : 营养因素与慢性病控制。 文章编号 : 100120580 (2006) 1221411202 　　中图分类号 : R 15112 　　文献标志码 : A 【专题报道】 枸杞多糖对人宫颈癌细胞生长及细胞凋亡影响 3 崔晓燕 ,罗琼 ,杨明亮 ,王丽红 ,李丹丹 ,梁成振 ,闫俊 ,李卓能 　　摘 　要 : 目的 　观察枸杞多糖对体外培养的人宫颈癌 Hela 细胞生长及其细胞凋亡的影响。方法 　不同剂量的 枸杞多糖作用于体外培养的宫颈癌 Hela 细胞 ,用苔盼蓝染色、四甲基偶氮噻唑蓝 (MTT) 法及流式细胞仪检测人宫颈 癌 Hela 细胞存活率、抑制率及细胞凋亡等指标。结果 　枸杞多糖可明显抑制人宫颈癌 Hela 细胞的生长 ,抑制率可达 96185 % ,并呈剂量效应关系 ,细胞凋亡率可达 3618 %。结论 　枸杞多糖对人宫颈癌 Hela 细胞生长具有抑制作用 ,其 抑制机制可能是通过影响人宫颈癌细胞的生长周期和诱导其凋亡而实现。 关键词 : 枸杞多糖 ;人宫颈癌 Hela 细胞 ;生长抑制率 ;细胞凋亡 Effect of Lycium barbarum polysaccharides on growth of human cervical carcinoma Hela cell and cell apoptosis 　CU I Xi2 aoyan , L UO Qiong , YA N G Mingliang , et al . Depart ment of N ut rient and Food Hygene , School of Public Health , W uhan U niversity ( W uhan 430071 , China) Abstract : Objective 　To investigate the cell growth and cell apoptosis of Lycium barbarum polysaccharides (LBP) treated on human cevical carcinoma Hela cell cultured in vit ro. Methods 　Hela cells were treated with different doses of LBP ,the rate of cell growth was detected by using trypan blue exclusion staining ,and taking MTT assay to analyze the inhi2 bition of cell growth ,then the rate of cell apoptosis was measured by flow cytometry. Results 　LBP could increasingly inhibit the growth of cervical carcinoma Hela cell line with dose2effect . The biggest inhibition rate was up to 96185 % in those treated with LBP ,and the apoptosis rate was 3618 %. Conclusion 　LBP could inhibit the growth of Hela cell line in vit ro ,and the mechanism might be related to the influence of LBP in the cell cycle and the cell apoptosis induced by LBP. Key words : lycium barbarum polysaccharides ;human cervical carcinoma Hela cell ;growth inhibiting ratio ;cell apoptosis 　　据 WHO 报道 ,世界每年宫颈癌新发病例约有 50 万 ,其 中我国有 1315 万〔1〕,宫颈癌发病率和病死率约占世界的 1/ 3〔2〕。研究证明 ,枸杞子主要生物活性成分枸杞多糖 (LBP) 具有增强机体免疫力〔3〕、抗疲劳〔4〕、抗肿瘤〔5〕等药理作用。 近年来 ,随着对枸杞多糖研究的不断深入 ,其在抗肿瘤方面的 生物学功效越来越成为研究的热点。本研究旨在探讨 LBP 对人宫颈癌 Hela 细胞的生长抑制作用及其可能的机制。 1 　材料与方法 111 　材料 　 11111 　细胞 　雌激素不依赖型人宫颈癌细胞株 Hela ,在含体 积分数为 10 %的小牛血清中加入双抗的 F12 培养液 (美国 Gibco 公司) ,37 ℃、5 %CO2 的恒温箱中培养。 11112 　枸杞多糖 　从宁夏自治区产的枸杞中分离提取 ,由本 实验室制备。 112 　方法 　 11211 　实验分组及处理 　实验设 1 个空白对照组和 5 个不 同浓度实验组 ,分别为 LBP100 ,200 ,400 ,800 和 1 000μg/ ml。 取对数生长期 Hela 细胞 1 ×104 个/ ml 接种于 25 ml 培养瓶培 养 ,24 h 后加入前述不同浓度的 LBP ,作用 48 h 后 ,胰酶消化 离心 ,将细胞悬浮于 PBS 中 ,调浓度为 1 ×105 个/ ml 细胞悬 液 ,备用。 11212 　细胞生长曲线测定 　Hela 细胞以每孔 1 ×105 个/ ml 个接种于 24 孔板中 ,于 CO2 培养箱中常规培养 24 h。次日细 胞贴壁后 ,每天分别换含不同浓度枸杞多糖的 F12 培养液 , 对照组用含 015 %无钙镁磷酸盐缓冲液 ( PBS)的 F12 培养液 , 连续 96 h ,每天各剂量组取 3 个平行孔按常规方法消化 ,苔盼 蓝染色计数。以每天活细胞均值绘制生长曲线 ,并计算枸杞 多糖对 Hela 细胞生长的存活率。 11213 　四甲基偶氮噻唑蓝 (MTT) 法测定 　收集对数生长期 约 1 ×105/ 孔细胞接种 96 孔培养板 ,常规条件下培养 24 h 后 ,用不同浓度的枸杞多糖处理 ,每天更换培养基。每个浓度 设 8 个平行孔 ,48 h 后每孔加入 MTT 溶液 (5 mg/ ml) 20μl , 37 ℃继续孵育 4 h ,终止培养 ,小心吸弃孔内培养上清液。每 孔加入 150μl 二甲基亚矾 (DMSO) ,振荡 10 min ,使结晶物充 分溶解。选择 490 nm 波长 ,在酶联免疫检测仪上测定各孔吸 光度 ( A )值 ,取平均值 ,根据公式计算抑制率 = (实验组 A - 对照组 A ) / 对照组 A ×100 %。 11214 　流式细胞仪测定 　将人宫颈癌 Hela 细胞接种于 50 ml 培养瓶中 ,24 h 后 ,加入不同浓度的枸杞多糖 ,处理 48 h 后 ,胰酶消化 ,PBS漂洗 ,调细胞浓度为 1 ×106个/ ml。用体积 分数为 70 %的酒精固定 ,RNase A 作用 ,810μl 碘化丙啶 ( PI) 作用 15 min 以上 , 200 目尼龙网过滤 ,于流式细胞仪上作 DNA 细胞周期及凋亡分析。 113 　统计分析 　采用 SPSS 1310 软件进行分析 ,组间比较采 用方差分析。 2 　结 　果 211 　枸杞多糖对人宫颈癌 Hela 细胞生长的影响 (表 1) 　不 同浓度枸杞多糖对体外培养的人宫颈癌 Hela 细胞生长存活 率有明显影响 ,随剂量增加和时间延长其存活率降低。MTT 结果也表明 ,不同浓度的枸杞多糖对体外培养的 Hela 细胞有 明显抑制作用 ,且呈剂量效应和时间效应关系 ,最大抑制率可 达到 96185 %。剂量组和对照组度吸光值比较 ,差异有统计 学意义 ( P < 0101) 。 1141中国公共卫生 2006 年 12 月第 22 卷第 12 期　　Chin J Public Health Dec 2006 V ol . 22 No. 12 表 1 　枸杞多糖作用下不同时间人宫颈癌 Hela 细胞生长的存活率( %) 组别 (μg/ ml) 24 h 48 h 72 h 96 h 对照组 枸杞多糖 100 93110 87167 77138 75134 　　　　200 86111 61164 50100 46158 　　　　400 70183 42147 39129 32119 　　　　800 47122 30114 28157 48149 　　　1 000 37150 24166 17186 6116 212 　枸杞多糖对人宫颈癌 Hela 细胞凋亡的影响 　流式细胞 仪对细胞凋亡峰的定量分析显示 ,人宫颈癌 Hela 细胞经不同 浓度 LBP 作用 48 h 后 ,PI 染色可见在 G1 期峰前出现 1 个亚 二倍体峰 ,说明枸杞多糖可以引起 Hela 细胞凋亡 ,并具有剂 量/ 效应关系 ,凋亡率最高可达 3618 %。显微镜下观察表明 , 细胞体积变小呈梭形 ,透明度下降。 3 　讨 　论 宫颈癌是发展中国家发病率最高的恶性肿瘤之一 ,也是 癌症造成妇女死亡的第二位死因 ,近年来年轻妇女宫颈癌发 病率有逐渐升高的趋势。宫颈癌的病因复杂 ,年龄、遗传因素 以及自身的免疫力等都可影响其发生。至今对宫颈癌尚未有 有效的根治方法 ,而同时多糖类抗肿瘤作用引起了广泛注意。 研究证实 ,枸杞多糖在抗肿瘤方面有着强烈的抑制作用〔6 ,7〕。 枸杞多糖天然化合物 ,具有无毒、高效的特点 ,其发挥抗肿瘤 作用时不伴有明显的副作用 ,因而不同于常用细胞毒类抗肿 瘤药。本研究表明 ,枸杞多糖能诱导雌激素不依赖型人宫颈 癌 Hela 细胞的凋亡 ,明显抑制细胞增长 ,其抑制率可高达 96185 % ,显微镜下细胞出现染色体凝聚、核碎裂凋亡特征 改 变。这为天然食物干预宫颈癌的发生、发展提供了参考依据。 枸杞多糖作为 1 种高效、低毒的抗肿瘤药物 ,其作用机制可能 通过诱导 Hela 细胞凋亡从而抑制其生长。 参考文献 〔1〕　Parkin DM ,Stjerna Waurd J ,Muir CS. Estimates of the worldwide frequency of tweleve major cancers [J ] . Bull WHO ,1984 ,62 (2) : 65. 〔2〕　曹志毅. 中华妇产科学[ M ] . 北京 :人民卫生出版社 ,1997 :1747. 〔3〕　Qi CH , Zhang XY , Zhao XN ,et al. Immunoactivity of the crude polysaccharides from the fruit of Lycium barbarum L [J ] . Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology ,2001 ,15 (3) :180 - 184. 〔4〕　罗琼 ,阎俊 ,李瑾玮 ,等. 枸杞多糖粗品与纯品抗疲劳作用比较 [J ] . 营养学报 ,1999 ,21 (3) :310 - 317. 〔5〕　甘璐 ,王建华 ,罗琼 ,等. 枸杞多糖对人白血病细胞株凋亡的影响 [J ] . 营养学报 ,2001 ,23 (3) :220 - 224. 〔6〕　顾树南 ,焦克智. 枸杞多糖综合治疗原发性肝癌 20 例分析 [J ] . 中国药理及临床 ,1996 ,6 :38 - 38. 〔7〕　曹广文 ,杜平. 枸杞多糖和白细胞介素22 对 12 月龄小鼠两种 LA K细胞抗肿瘤活性调节作用 [J ] . 中华微生物学和免疫学杂 志 ,1992 ,12 :390 - 392. 收稿日期 : 2006203212 (文涛编辑　刘铁校对) 3 基金项目 : 江苏省卫生厅医学科技发展基金重大课题项目 (z200316) 　作者单位 : 南京医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系 ,南京 210029 ; 21 江苏省海安县疾病预防控制中心 　作者简介 : 吉华萍 (1958 - ) ,女 ,江苏淮阴人 ,副教授 ,学士 ,主要从事社会医学与健康教育工作。 文章编号 : 100120580 (2006) 1221412202 　　中图分类号 : R 193 　　文献标志码 : A 【专题报道】 海安县南莫乡恶性肿瘤健康教育效果评价 3 吉华萍1 ,王玉邦1 ,尤华1 ,周春锋2 ,顾更生2 ,王坚2 ,李林2 　　摘 　要 : 目的 　评价海安县肿瘤高发乡南莫镇近年来开展社区恶性肿瘤健康教育后居民在防治肿瘤的知识 和行为方面的变化。为进一步改进健康教育与健康促进措施提供依据。方法 　随机抽取海安南莫镇社区居民 1 141 人 ,进行肿瘤知识、信念行为方面的调查并与 1998 年的基础调查资料进行比较。结果 　在海安县肿瘤防制重点南莫 乡开展的一系列肿瘤健康教育措施 ,使居民的防制肿瘤相关知识水平有了显著提高 ;肿瘤相关行为发生了明显改变。 结论 　健康教育可以提高居民肿瘤防制的知识水平 ,并改变他们的不健康行为。 关键词 : 恶性肿瘤 ;健康教育 ;干预 ;评价 Effect assessment of health education on cancer prevention in Haian county 　J I Huaping , W A N G Yubang , YOU Hua , et al . The School of Public Health , N anjing Medical U niversity ( N anjing 210029 , China) Abstract : Objective 　To evaluate the improvement of knowledge and behaviors on cancer prevention after health educa2 tion intervention ; To provide the basic information for evaluation of cancer health education. Methods 　1 141 residents were randomly sampled from a high cancer incidence rural area of Haian County. The K - A - P Questionnaire was given to the in2 vestigators. The results were compared with those of the investigation conducted in 1998. Results 　After the intervention , residents gained more knowledge about cancer prevention and ameliorated cancer related behaviors. Conclusion 　Cancer health education can improve the knowledge level of cancer prevention and change the unhealthy behavior. Key words : malignancy ;health education ;intervention ;evaluation 2141 中国公共卫生 2006 年 12 月第 22 卷第 12 期　　Chin J Public Health Dec 2006 V ol . 22 No. 12