枸杞多糖对小鼠坐骨神经损伤功能恢复的影响

文章编号 :1005 - 8486 (2007) 02 - 0118 - 03 ·论著· 枸杞多糖对小鼠坐骨神经损伤功能恢复的影响 刘宏鹏 , 　周 　旭 , 　李光华 (宁夏医学院基础学院生理学教研室 ,银川 　750004) 摘要 :目的 　观察枸杞多糖 (Lycium barbarum polysaccharides ,LBP) 在坐骨神经损伤恢复中的作用。 　雄性 ICR 小鼠 100 只 ,随机分为空白对照组、假手术组、模型组、枸杞多糖组 (10mg/ kg)和运动训练组 ,每组 20 只 ,采 用右侧坐骨神经卡压模型 ,观察灌服枸杞多糖和运动对小鼠爬网漏脚率和坐骨神经运动传导速度的影响。结 果 　术后 3 周 ,枸杞多糖组和运动训练组爬网漏脚率均低于模型组 ( P < 0101) ,坐骨神经运动传导速度均高于 模型组 ( P < 0105 , P < 0101) ;术后 4 周 ,运动组坐骨神经运动传导速度高于模型组 ( P < 0105) 。结论 　枸杞多 糖可促进坐骨神经损伤的恢复。 关键词 :枸杞多糖 ;运动疗法 ;坐骨神经损伤 中图分类号 :R338 　　　文献标识码 :A 收稿日期 :2006 - 08 - 25 基金项目 :宁夏自然科学基金 (编号 :cc00) 作者简介 :刘宏鹏 (1981 - ) ,女 ,黑龙江人 ,在读硕士研究生 ,从事运 动生理学研究。 通讯作者 :李光华 (1965 - ) ,男 ,副教授 ,硕士 ,硕士生导师 ,从事运 动生理学科学研究和生理学教学工作。 　　周围神经卡压疾病临床上比较常见 ,多与该神经穿越 特殊的解剖结构有关 ,特别是穿越骨 - 纤维管道时更容易 产生卡压。根据卡压性质可分为急性卡压和慢性卡压。急 性卡压可造成神经内外血流的阻断而影响神经功能 ;慢性 卡压致神经局部慢性缺血缺氧 ,神经瓦勒变性 ,严重影响神 经功能[1 ] 。本实验采用坐骨神经卡压模型通过灌服枸杞多 糖和有氧运动训练观察两种方法对神经损伤恢复的影响 , 为枸杞多糖在临床上的合理应用提供实验依据。 1 　材料与方法 111 　实验动物 　雄性 ICR 小鼠 100 只 ,体重 14～16g ,由宁 夏医学院实验动物中心提供。 112 　仪器与试剂 　枸杞多糖由宁夏启元药业有限公司提 供 (批号 :040603) ,戊巴比妥钠 (批号 :910601)购自广州化学 试剂厂。XSC - 小鼠恒温游泳池 (安徽省淮北正华生物仪 器设备有限公司生产) 。BL - 410 生物机能换能系统 (成都 泰盟科技有限公司研制) 。 113 　方法 11311 　试验分组 :动物适应喂养 3d 后 ,将 100 只小鼠随机 分为 5 组 ,分别为 ①空白对照组 ; ②假手术组 ; ③模型组 ; ④ 损伤 + 枸杞多糖组 ; ⑤损伤 + 运动组 ,每组 20 只。 11312 　模型制备 :腹腔注射戊巴比妥钠 (40mg/ kg) 麻醉小 鼠 ,俯卧位固定于手术板。右股后部皮肤消毒后用剪刀剪 一长约 1cm的纵行切口 ,沿股骨用玻璃分针钝性分离肌肉 , 暴露并游离坐骨神经。在腓神经和胫神经分叉处用止血钳 (齿部用橡胶带缠绕) 夹闭 (3 扣 20s) 后缝合皮肤[2 ] 。右下 肢瘫痪和给刺激 (10V)后无动作电位出现为模型成功的标 志[3 ] 。 空白对照组不做手术 ,假手术组暴露并游离神经后不 夹闭 ,直接缝合皮肤。其他 3 组按上述方法制备模型。 11313 　实验处理 : 术后第 2 天 ,枸杞多糖组每只鼠按 10mg/ kg剂量灌胃给予枸杞多糖 ,其他 4 组灌服同等容量的 生理盐水。运动组在术后第 6 天开始游泳训练 ,水深 34cm ,直径 4115cm ,水温 33 ℃。第 1 天游泳 10min ,第 2 天 20min ,第 3 天 30min ,以后每天游泳 30min ,每周三周日休 息。分别于术后 3、4 周测定患侧爬网漏脚率和坐骨神经传 导速度。 11314 　爬网漏脚率 :为神经功能恢复的指标。在测定神经 传导速度的前一天 ,将小鼠置于 34cm ×47cm (网格 1cm × 6cm)的鼠笼网罩上 ,观察并记录小鼠 5min 爬网漏脚次 数[4 ] 。 11315 　坐骨神经运动传导速度 :用成都泰盟科技有限公司 生产的 BL - 410 生物机能换能系统做在体神经传导速度测 定。麻醉、暴露坐骨神经 (方法同造模) ,用胶带固定两钩状 刺激电极 ,钩于坐骨神经 (损伤部位位于两刺激电极间) ,记 录电极连于两针灸针 (刺于腓肠肌) ,地线接鼠尾。分别接 两刺激电极 ,给予强度为 11000V 电刺激 ,产生两个动作电 位。测量刺激电极间距离、两次动作电位潜伏期之差 ,按下 列公式计算出传导速度 : MCV = 两刺激点间距离 (m) / 潜伏 期之差 (s) [1 ] 。测定小鼠患侧坐骨神经运动传导速度。 114 　统计学方法 　用 SPSS 1115 统计软件行统计学处理 , 采用随机区组设计的方差分析。 2 　结果 　(表 1) ·811· 宁夏医学院学报 Journal of Ningxia Medical College 第 29 卷 　2 期 　2007 年 4 月 表 1 　枸杞多糖与运动疗法对坐骨神经损伤小鼠爬网漏脚率及神经运动传导速度的影响 ( n = 20 , €x ±s) 组别 漏脚率 ( %) 术后 3 周 术后 4 周 坐骨神经运动传导速度 (m/ s) 术后 3 周 术后 4 周 空白对照组 0115 ±01337 0120 ±01350 12137 ±219211 111842 ±31607 假手术组 0120 ±01422 0120 ±01422 11182 ±31570 10169 ±31616 模型组 1014 ±91092 3 3 2100 ±11130 3 3 1149 ±11990 3 3 2172 ±11113 3 枸杞多糖组 1175 ±01717 △△ 1115 ±11395 3184 ±11181 △3 5139 ±31420 3 运动训练组 1100 ±01782 △△ 1110 ±11370 5152 ±21788 △△3 6146 ±31977 △3 　与空白对照组和假手术组比较 3 P < 0105 , 3 3 P < 0101 ;与模型组比较 , △P < 0105 , △△P < 0101 3 　讨论 本实验结果显示 ,模型组与对照组术后 3、4 周漏脚率 及术后 3 周坐骨神经传导速度比较 , P < 0101 ,术后 4 周坐 骨神经传导速度比较 , P < 0105 ,造模成功。 与模型组比较 ,运动训练组可降低坐骨神经损伤小鼠 术后 3 周漏网率 ,加快术后 3、4 周神经传导速度 ,这一结果 与运动训练的效应明确显现一般需要 2 周训练的积累 [5 ]的 观点是符合的。与对照组比较 ,运动训练组术后 3、4 周漏 脚率 P > 0105 ,神经传导速度 P < 0105 ,即运动训练组神经 损伤小鼠在术后 3 周时行为功能 (漏脚率) 上已经基本恢 复 ,而神经传导速度到术后 4 周还未恢复到原来水平。提 示神经传导速度的恢复慢于漏脚率的恢复 ,临床上当患者 行为看起来无碍的情况下仍然需要进行辅助治疗 ,直到神 经传导速度恢复为止。周围神经正常的功能依赖于神经内 血流当中的氧供应 [1 ] 。在安静状态下 ,肌肉的血流量很低 , 这主要由于骨骼肌中血管平滑肌有较高的内在张力 ,许多 毛细血管处于闭合状态。运动开始数秒内 ,因植物神经作 用 ,血管张力很快降低 ,血管扩张。运动引起的血液重新分 配结果可使工作肌获得较安静时高 50～75 倍的氧摄取量。 所以运动疗法的治疗作用主要包括 :改善运动组织的血液 循环、代谢 ,促进肌肉功能 ,提高肌力、耐力等 [5 ] 。神经的修 复与再生离不开血液供应 ,运动训练改善了神经的血供和 氧的含量 ,促进了组织代谢 ,进而加快了神经恢复。 与模型组比较 ,灌服枸杞多糖组术后 3 周时可降低坐 骨神经损伤小鼠漏网率 ,可加快坐骨神经损伤小鼠的神经 传导速度 ,术后 4 周时无差异 ,提示枸杞多糖术后 3 周时对 损伤神经的恢复有促进作用。与对照组比较枸杞多糖组 , 术后 3、4 周漏脚率 P > 0105 ,神经传导速度 P < 0105 ,结果 和运动训练组一样在术后 3 周时行为功能 (漏脚率)上已经 基本恢复 ,而神经传导速度到术后 4 周还未恢复到原来水 平。王琳[6 ]等报道枸杞多糖 (10mg/ kg) 可抑制坐骨神经离 断模型的恢复。相同剂量不同结果的原因可能与模型的损 伤程度有关。王琳等的神经损伤模型是离断性神经损伤模 型 ,该模型导致较多神经性抗原外漏 ,这样会加重损伤神经 局部的免疫反应。枸杞多糖是免疫增强剂 ,用于此种模型 更加重了神经局部的免疫反应从而抑制神经的恢复。本实 验是卡压性神经损伤模型 ,损伤程度较轻。外漏神经抗原 较少 ,枸杞多糖不但没有加重免疫反应 ,反而发挥了免疫调 节作用 ,提高了小鼠体质 ,促进神经恢复。 参考文献 : [1 ] 　陈德松 ,曹光富 1 周围神经卡压性疾病 [M]1 上海 :上 海医科大学出版社 ,199913 - 71 [2 ] 　崔松彪 ,赵和荣 ,朴虎男 ,等 1 运动训练对周围神经损 伤大白鼠神经功能恢复的影响 [J ]1 中国临床康复 , 2004 ,8 (34) :7705 - 77071 [3 ] 　石关桐 ,石印玉 ,李义凯 1 补阳还五汤对周围神经损 伤恢复的实验研究[J ]1 中国中医骨伤科杂志 ,1997 ,5 (5) :11 [4 ] 　李光华 ,余建强 ,刘红梅 ,等 1 龙骨对小鼠抗坐骨神经 损伤及单核细胞吞噬廓清率的观察 [J ]1 宁夏医学院 学报 ,2004 ,26 (4) :2531 [5 ] 　曲绵域 ,于长隆 1 实用运动医学[M]1 北京 :北京大学 医学出版社 ,20031965 - 9671 [6 ] 　王琳 ,马玉林 1 枸杞多糖对大鼠坐骨神经损伤修复后 影响的实验研究 [J ] 1 宁夏医学杂志 ,2004 ,26 (5) : 264 - 2661 (责任编辑 :任义芳) ·911·2 期 刘宏鹏 ,等. 枸杞多糖对小鼠坐骨神经损伤功能恢复的影响 Eff ects of Exe rcis e The rap y a n d LB P on Fu nction Recove ry i n Pe rip he ral Ne rve I nj u ry LIU Hong2peng , ZHOU Xu , LI Guang2hua (Dept . of Physiology , Ningxia Med. Coll . , Yinchuan 750004) A bs t ract : Objective 　To explore the effects of LBP and exercise therapy on functional recovery in peripheral nerve injury. M et hods 　Mouse right sciatic nerve compression model was employed to observe the rate of foot2 slip down from the net and the effect on the Motor Nerve Conduction Velocity (MNCV) in the exercise group and the LBP group which was administrated LBP for 3 weeks and 4 weeks . Res ults 　The rate of foot2slip down from the net in the LBP group and exercise group were significant lower than that in model group at the 3rd week after surgery ( P < 0. 01) . The MNCV were faster in the exercise group and LBP group than that in the model group ( P < 0. 05 , P < 0. 01) at the 3rd week post2operation ; MNCV was faster in the exercise group than that in the model group ( P < 0. 05) at the 4th week post2operation. Concl usion 　Administrating LBP and aerobic ex2 ercise can improve the recovery of sciatic nerve injury. Key wor ds : LBP; exercise therapy ; nerve injury (上接第 114 页) [11 ] 　DaRoeha WD ,Otsu K,Teixeira SM ,et al1Tests of cytoplas2 mic RNA interference (RNAi) and construction of a tetra2 cyclineinducible T7 promotor stem in Trypanosomecm [J ]1Mol Biochem Parasitol ,2004 ,133 (2) :175 - 1861 [12 ] 　Sui G,Soohoo C , Affarel B ,et al1A DNA vector - basedRNAi technology to suppress gene expression in mam2malian cells[J ] 1Proc Natl Acad Sci USA ,2002 ,99 (8) :5515 - 55201 (责任编辑 :路锦绣) Const r uction a n d I de ntif ica t ion of Ra b25 si RNA Exp ression Vect or FAN Yang1 , XIN Xiao2yan1 , CHEN Bi2liang1 , MA Xiang2dong1 , WANG Long2 (1. Dept . of Obstetrics and Gynecology , Xiinng Hospital Fourth Military Med. Univ. , Xi’an 710032 ; 2. Dept . of Stomatology ,Ningxia Med. Coll . , Yinchuan 750004) A bs t ract : Objective 　To construct Rab25 siRNA expression vector in order to explore the new method of o2 varian cancer gene therapy. M et hods 　According to Rab25 mRNA sequence in the Genebank , a pair of 642nt oligonucleotides ,each containing the sites of restriction endonuclease at both ends ,were designed and synthesized. Oligonucleotides were annealed and ligated with linearized pSUPER by T4DNA ligase . The recombinants (named pSUPER / Rab25 siRNA ) were finally sequenced and identified by enzyme cutting and sequencing. Res ults 　 Rab25 siRNA expression vector was successfully constructed and identified by double endonuclease digestion. Se2 quence analysis of inserted fragment revealed the same sequence as synthesized siRNA oligonucleotides . Concl u2 sion 　Rab25 siRNA expression vector has been successfully constructed , which will facilitate further studies of Rab25 function and its application in the treatment of ovarian cancer. Key wor ds : Rab25 ; siRNA ; genetic vector ; gene treatment ·021· 宁夏医学院学报 29 卷