枸杞多糖对人前列腺癌细胞生长影响

3 基金项目 : 湖北省科技厅重点攻关课题 (2001AA307B) ;达能膳食营 养研究与宣教基金 (200305) 　作者单位 : 武汉大学公共卫生学院营养与食品卫生学系 , 武汉 430071 　作者简介 : 李卓能 (1980 - ) ,男 ,湖北潜江人 ,硕士在读 ,研究方向 : 营养因素与慢性疾病控制。 　通讯作者 : 罗琼 文章编号 : 100120580 (2006) 0320311202 　　中图分类号 : R 15112 ;R 97911 　　文献标识码 : A 【论 　　著】 枸杞多糖对人前列腺癌细胞生长影响 3 李卓能 ,罗琼 ,杨明亮 ,闫俊 ,庞雅琴 ,姜鸣 　　摘 　要 : 目的 　观察枸杞多糖对体外培养的雄激素非依赖型人前列腺癌 PC - 3 细胞存活率、细胞周期及其凋亡 的影响。方法 　用四甲基偶氮噻唑蓝 (MTT)法检测枸杞多糖对 PC - 3 细胞作用的时间效应和剂量效应 ,并计算细胞 生长抑制率 ;流式细胞仪观察枸杞多糖处理 PC - 3 细胞后细胞周期以及细胞凋亡的改变。结果 　枸杞多糖对 PC - 3 细胞的增殖有明显的抑制作用 ,抑制率可达 87184 % ,且呈剂量 - 效应和时间 - 效应关系 ;流式细胞仪分析显示 ,枸杞 多糖可影响该细胞周期并引起细胞凋亡 ,凋亡率高达 40 %。结论 　枸杞多糖对人前列腺癌 PC - 3 细胞的生长有明显 抑制作用 ,其机制可能是通过诱导人前列腺癌细胞凋亡和影响其生长周期而实现。 关键词 : 枸杞多糖 ;人前列腺癌细胞 ;细胞凋亡 ;细胞周期 Effect of lycium barbarum polysaccharides on human prostatic cancer cell growth 　LI Zhuoneng , LUO Qiong , YANG Min2 gliang , et al . Department of Hygiene , School of Public Health , Wuhan University ( Wuhan 430070 , China) . Abstract : Objective 　To investigate the influence of lycium barbarum polysaccharides(LBP)on human prostatic cancer cell line PC - 3. Methods 　Time and dose effects of LBP were examined by using trypan blue exclusion staining ;the influence on the cell cy2 cle and the apoptosis were observed with flow cytometry. Single cell gel electrophoresis assay was applied to determine the DNA dam2 age of PC - 3 cell. Results 　LBP could inhibit the growth of PC - 3 cell line with a dose - effect and time - effect relationship. LBP could influence the cell cycle of PC - 3 and induce apoptosis. The apoptosis rate was 40 %. The breakage of DNA strand of PC - 3 cell was observed. Conclusion 　LBP inhibits PC - 3 cell line independent of androgen in vitro ,and the mechanism may be related to its influence on the cell cycle and inducing of apoptosis. Key words : lycium barbarum polysaccharides ;human prostatic cancer cell ;apoptosis ;cell cycle 　　随着经济水平的提高 ,生活方式的改变和人均寿命的延 长 ,前列腺癌发病有日益增多趋势〔1〕,在美国其发病率已超过 肺癌而占男性恶性肿瘤的第 1 位〔2〕,我国前列腺癌的发病率 约为 2141/ 10 万男性人口〔3〕。枸杞多糖 (Lycium barbarum polysaccharides ,LBP)具有抗肿瘤功能〔4〕,本文探讨枸杞多糖对 人前列腺癌 PC - 3 细胞生长的影响及其可能机制。结果 如下。 1 　与方法 111 　试品及试剂 　(1)枸杞多糖 :由本实验室制备。(2) 细胞 株及培养 :雄激素非依赖型人前列腺癌细胞株 PC - 3 由华中 科技大学同济医学院提供 ,置于含体积分数 10 %的小牛血清 中 ,加入双抗的 F12 培养液 ( Gibco) ,37°C ,5 %CO2 培养。 112 　方法 11212 　分组 　设 1 个空白对照组和 5 个不同浓度实验组 ,分 别为 LBP含量 011 ,012 ,014 ,018 和 1 mg/ L。取对数生长期的 PC - 3 细胞 1 ×104 个/ ml 接种于 25 ml 的培养瓶培养 ,24 h 后 加入前述不同浓度的 LBP ,作用 48 h 后 ,胰酶消化离心 ,将细 胞悬浮于 PBS中 ,调整浓度为 1 ×105 个/ ml 细胞悬液 ,备用。 11213 　四甲基偶氮噻唑蓝 (MTT) 法 　收集对数生长期约 1 × 105/ 孔细胞接种 96 孔培养板 ,常规条件下培养 24 h 后 ,用不 同浓度的枸杞多糖处理 ,每天更换培养基。每个浓度设 8 个 平行孔 ,48 h 后每孔加入 MTT溶液 (5 mg/ ml) 20μl ,37°C 继续 孵育 4 h ,终止培养 ,小心吸弃孔内培养上清液。每孔加入 150 μl 二甲基亚砜 (DMSO) ,振荡 10 min ,使结晶物充分溶解。选 择 570 nm波长 ,在酶联免疫检测仪上测定各孔吸光度 ( A) 值 , 取平均值 ,计算公式 :抑制率 = (实验组 A - 对照组 A) / 对照 组 A ×100 %。 11214 　流式细胞仪测定 　细胞悬液用 70 %的冷乙醇固定过 夜 ,核糖核酸酶 A (RNaseA) 作用 36°C 水浴 30 min ,800μl 碘化 丙碇 (propidium iodide ,PI)作用 30 min ,200 目尼龙网过滤 ,流式 细胞仪作 DNA 细胞周期及凋亡分析。 113 　统计分析 　数据用 €x ±s 示 ,采用 SPSS 软件分析数 据 ,各组间指数的比较采用单因素方差分析和 t 检验。 2 　结 　果 211 　枸杞多糖对人前列腺癌 PC - 3 细胞生长的抑制作用 　 不同浓度的枸杞多糖对体外培养的 PC - 3 细胞有抑制作用 , 并随剂量的增加其抑制作用加强 , 最大抑制率可达到 87184 %。与对照组比较 ,各组差异均有统计学意义 ( P < 0105 , P < 0101) ,见表 1。 表 1 　枸杞多糖对人前列腺癌细胞 PC - 3 细胞增殖的抑制作用 ( …x ±s , n = 8) 组别 (mg/ L) 吸光度 ( A) 抑制率 ( %) 对照 01330 ±01083 - LBP 　011 01266 ±01055 3 25109 012 01265 ±01047 3 25149 014 01183 ±01088 3 3 57164 018 01163 ±01063 3 3 65149 1 01106 ±01043 3 3 87184 212 　枸杞多糖对人前列腺癌 PC - 3 细胞凋亡的影响 　枸杞 113中国公共卫生 2006 年 3 月第 22 卷第 3 期　　Chin J Public Health Mar 2006 Vol . 22 No. 3 多糖作用人前列腺癌 PC - 3 细胞 48 h ,PI 染色可见 ,在 G1 期 峰前出现一个亚二倍体峰 ,枸杞多糖可以引起 PC - 3 细 胞的凋亡 ,并具有剂量 - 效应关系 ,凋亡率最高可达 40 %。 各组凋亡率分别为 117 % ,618 % ,1313 % ,2712 % ,4010 % ,与对 照组 (110 %)相比 ,差异均有统计学意义 ( P < 0101) 。各实验 组凋亡率两两比较 ,差异也有统计学意义 ( P < 0105) 。倒置显 微镜下观察显示 ,细胞体积小且呈棱形 ,透明度下降。 3 　讨 　论 前列腺癌近年来在我国的发病率呈上升趋势 ,已成为最 常见的男性恶性肿瘤〔5〕。近 10 年来 ,国内外学者的大量研究 证实 ,多糖可影响肿瘤的发生与发展 ,具有抗癌、抗突变作 用〔6〕。甘璐等发现 ,枸杞多糖对 S180实体瘤生长的抑制作用 明显 ,有强烈的抗肿瘤作用〔7〕。植物制剂抗肿瘤的作用机制 之一即为诱导肿瘤细胞凋亡。本文结果表明 ,枸杞多糖能诱 导人前列腺癌 PC - 3 细胞的凋亡 ,对其细胞的增殖有明显的 抑制效应 ,其机制可能是通过诱导人前列腺癌细胞凋亡 ,影响 其生长周期或通过对原癌基因如 c - myc、bc1 - 2 及促凋亡基 因 Bax 的调控而实现。LBP对凋亡相关基因表达和信号传导 通路的影响有待进一步研究。 参考文献 〔1〕　Purohit RS ,Shinohara K,Meng MV ,et al . Imaging clinically localized prostate cancer[J ] . Urol Clin North AM ,2003 ,30 :279 - 93. 〔2〕　Greenlee RT ,Murray Y,Bolden S ,et al . Cancer statistics 2000[J ] . Can2 cer J Clin ,2000 ,50 :733. 〔3〕　孙颖浩. 我国前列腺癌的研究现状 [J ] . 中华泌尿外科杂志 , 2004 ,25 (2) :77 - 80. 〔4〕　甘璐 ,张声华. 枸杞多糖的抗肿瘤活性和对免疫功能的影响[J ] . 营养学报 ,2003 ,25 (2) :200 - 202. 〔5〕　Suzuki K,Koike H ,Nhtsui H ,et al . Cenistein ,a soy isoflavone ,induces glutathione peroxidase in the human prostate cancer cell lines LNCaP and PG3[J ] . Int J Cancer ,2002 ,99 (6) :846 - 852. 〔6〕　吴梧桐 ,高美凤 ,吴文俊. 多糖的抗肿瘤作用研究进展 [J ] . 中国 天然药物 ,2003 ,1 (3) :182 - 186. 〔7〕　郑敏 ,王亚平. 中药多糖抗肿瘤的药理学研究进展[J ] . 国外医学 中医中药 ,2000 ,5 :259 - 263. 收稿日期 : 2005206225 (孔繁学编校) 作者单位 : 11 沈阳市疾病预防控制中心 ,110031 ; 21 沈阳市卫生监督 所 ; 31 沈阳预防医学研究所 作者简介 : 栾颖 (1965 - ) ,女 ,沈阳人 ,主管技师 ,大专 ,主要从事微生 物检验工作。 文章编号 : 100120580 (2006) 0320312201 　　中图分类号 : R 51216 　　文献标识码 : B 【基层公共卫生】 沈阳市不同人群 HBV和 HCV感染状况分析 栾颖1 ,刘瑾1 ,张晓冬2 ,陶黎明2 ,周桂芳3 ,闫奇3 ,胡桂华3 ,李勤1 　　病毒性乙型肝炎 (HBV) 和丙型肝炎 (HCV) 在一些特殊人 群 (静脉药瘾人群、性乱人群)中的感染率很高 ,本文对沈阳市 上述人群 HBV、HCV 的相关标志物 HBsAg、抗2HCV 进行检测 , 分析感染状况。 对象与方法 　(1)对象 :沈阳市康复中心静脉药瘾者 100 名 ,平均年龄 2514 岁 ;沈阳市劳动教养院性乱者 100 名 ,平均 年龄 2215 岁 ;沈阳市疾病预防控制中心健康体检门诊正常人 群 100 名 ,平均年龄 2313 岁。3 组人群均为男性 60 人 ,女性 40 人。(2)方法 :采用 ELISA 方法对 300 份血清样品进行 HB2 sAg、抗2HCV 检测。ELISA 试剂盒由上海科华实业科技生物公 司生产。检验方法按试剂盒使用说明书进行。 结　果 　(1) 静脉药瘾人群 HBsAg、抗2HCV 检测阳性例 数分别为 18 ,75 例 ,阳性率分别为 18 % ,75 % ;性乱人群 HB2 sAg、抗2HCV 检则阳性例数分别为 9 ,13 例 ,阳性率分别为 9 % ,13 % ;正常人群 HBsAg、抗2HCV 检测阳性例数分别为 5 ,2 例 ,阳性率分别为 5 % ,2 % ;静脉药瘾人群、性乱人群及正常 人群 HBsAg、抗2HCV 重叠阳性例数分别为 13 ,4 ,2 例 ,阳性率 分别为 13 % ,4 % ,2 %。(2) 静脉药瘾人群 HBsAg、抗2HCV 阳 性率明显高于正常人群 ( P < 0101) ;性乱人群的抗2HCV 阳性 率明显高于正常人群 ( P < 0105) ,而 HBsAg 检测与正常人群相比差异无统计学意义 ;静脉药瘾人群抗2HCV 阳性率明显高于性乱人群 ( P < 0101) ,而两者 HBsAg 阳性率差异无统计学意义 ;静脉药瘾人群 HBsAg、抗2HCV 重叠阳性率显著高于性乱人群和正常人群 ( P < 0101) ,而性乱人群 HBsAg、抗2HCV 重叠阳性率与正常人群差异无统计学意义。静脉药瘾人群、性乱人群及正常人群 2 项检测指标的性别比较差异无统计学意义。讨 　论 　本文分析表明 ,静脉药瘾人群、性乱人群 HBV、HCV 感染不同程度高于正常人群。静脉药瘾人群尤为突出 ,HBV 感染率 (18 %)显著高于正常人群 (5 %) ,亦高于文献报道的非吸毒毒者感染率 (515 %)〔1〕。本文静脉药瘾人群 HCV 感染率 (75 %)显著高于正常人群 (2 %) ,并显著高于文献报道的志愿献血者人群感染率 (018 %)〔2〕。HBV、HCV 重叠感染严重 ,感染率 (13 %)显著高于正常人群。结果提示 ,应重点加强特殊人群相关疾病的监测及宣传教育。参考文献〔1〕　郭永炼 ,吴统健 ,孙林渥 ,等. 厦门地区吸毒者乙肝、梅毒及艾滋病毒感染调查[J ] . 现代预防医学 ,2004 ,31 (1) :100 - 101. 〔2〕　张　 ,李鹏. 医院患者人群中 HCV2Ab 阳性率调查[J ] . 现代预防 医学 ,2004 ,31 (4) :385. 收稿日期 : 2005206213 (宋艳萍编辑　孔繁学校对) 213 中国公共卫生 2006 年 3 月第 22 卷第 3 期　　Chin J Public Health Mar 2006 Vol . 22 No. 3