枸杞多糖与丹参酮延缓小鼠皮肤衰老的实验研究

枸杞多糖与丹参酮延缓小鼠皮肤衰老的 实验研究 梁杰 　李响 【摘要 】　目的 　比较枸杞多糖与丹参酮对衰老小鼠皮肤的抗衰老作用。方法　60只雌性昆明种小 鼠 ,随机分为 4组 ( n = 15) :正常对照组皮下注射生理盐水 ;其余 3组每日颈背部皮下注射 D2半乳糖 [ 1000 mg/ ( kg·d) ] 造成小鼠衰老模型 ,同时各组分别灌胃生理盐水 (衰老模型组 )、枸杞多糖 [ 200 mg/ ( kg·d) ]、丹参酮 [ 1 500 mg/ ( kg·d) ]。42 d后 ,测定小鼠背部皮肤组织匀浆中超氧化物歧化酶 ( SOD ) 活力、过氧化脂质代谢产物丙二醛 (MDA)含量和皮肤羟脯氨酸 ( Hyp )含量。结果 　枸杞多糖可使衰老 模型小鼠皮肤中 MDA含量显著降低 ,较丹参酮组明显 ; 但 SOD活力显著升高 ,不及丹参酮组改变显著 ; 枸杞多糖和丹参酮均可使羟脯氨酸含量升高 ,且效果相当。结论 　枸杞多糖与丹参酮都有显著的抗小 鼠皮肤衰老作用 ,枸杞多糖清除皮肤中脂质过氧化代谢产物方面较丹参酮明显 ,而提高皮肤抗氧化酶活 力则不及丹参酮显著 ,在增强成纤维细胞活性方面两者效果相当。 【关键词 】　皮肤衰老 ;枸杞多糖 ;丹参酮 Exper im en ta l research on the sk in ag ing function of tan sh inone and lyc ium barbarum polysacchar ides　 L IANG J ie, L I X iang. D epartm en t of P lastic Surgery, A ff ilia ted Hospita l of Guangdong M edica l College, Zhan2 jiang, Guangdong 524001, China 【Abstract】　O bjective　To compare the anti2aging effects of Lycium barbarum polysaccharides and Tan2 shinone on the skin of D2galactose2induced m ice aging model. M ethods　60 female m ice were random ly divided into 4 group s ( n = 15) :M ice in normal control group received subcutaneous injection of normal saline and m ice in the other 3 group s received cervicodorsal injection of D2galactose[ 1000 mg/ ( kg1·d) ] for 42 d to establish subacute aging model. The experimental group s included aging model group (without further treatment) , Lycium barbarum polysaccharides [ 200 mg/ ( kg·d) group, Tanshinone [ 1 500 mg/ ( kg·d) ] group. Forty two days later, the dorsal skin samp leswere collected to determ ine SOD activities、MDA and hydroxyp roline contents. Re2 sults　The effect of Lycium barbarum polysaccharides is better than Tanshinone significantly in decrease the content ofMDA , but in increase the SOD activity Tanshinone have better effection. Both of them can increaseing the hydroxyp roline contents, but these is no different. Conclusion　Both Lycium barbarum polysaccharides and Tanshinone have noticeable anti2skin aging effects, Lycium barbarum polysaccharides is better than Tanshinone in clearing skin lip id peroxidation metabolites aspects, but Tanshinone have better effection in enhancingOxidase activity, they have no different effection in enhanceing fibroblasts. 【Key words】　Skin aging; Lycium barbarum polysaccharides; Tanshinone 　　基金项目 :广东省中药局基金资助项目 (项目编号 : 2008169) 作者单位 : 524001 广东医学院附属医院整形外科 　　当今社会由于老龄化的加速到来以及人们对美的强烈追 求 ,希望借助医学手段延缓衰老 ,永保青春。枸杞为茄科植物 枸杞成熟果实 ,明朝李时珍在《本草纲目 》中记载 :枸杞有“久 服 ,坚筋骨 ,轻身不老 , ⋯⋯,令人长寿 ”等功效。枸杞多糖 ( lycium barbarum poysaccharides, LBP) 是枸杞子的主要活性 成分之一 ,有抗氧化延缓皮肤衰老的作用。丹参酮是唇形科 植物 ( salvia m iltorrhiza Bge)的有效成分 ,有明显抗衰老作 用 [ 1 ]。笔者在 D2半乳糖所致小鼠衰老模型基础上分别灌服 枸杞多糖或丹参酮 ,比较二者对衰老小鼠皮肤中某些抗衰老 指标的影响。 1　材料与方法 111　动物 　3月龄清洁级雌性昆明种小鼠 60只 ,平均体质 量 (25 ±2) g购自广东医学院实验动物中心 ,随机分为 4组 , 正常对照组、D2半乳糖衰老模型组、枸杞多糖组、丹参酮组 ,每 组 15只。 112　方法 11211　实验步骤 　灌胃、皮下注射均按无菌操作进行。42 d 后 ,小鼠断颈处死 ,背部皮肤取下后迅速冰冻保存 ,拟作皮肤 组织匀浆及测定皮肤抗衰老指标用。正常对照组 :每日颈背 部皮下注射生理盐水 0. 2 m l,同时灌服生理盐水 (0. 1 m l /10 g) ; D2半乳糖 (衰老模型 )组 :每日颈背部皮下注射 D2半乳糖 [ 1000 mg/ ( kg·d) ] ,同时灌服生理盐水 ( 011 m l / 10 g) ;枸 杞多糖组 :每日颈背部皮下注射 D2半乳糖 [ (1000 mg/ ( kg· ·5·中国实用医药 2009年 3月第 4卷第 9期　China Prac Med,Mar 2009, Vol. 4, No. 9 d) ] ,同时灌服枸杞多糖 [ 200 mg/ ( kg· d) ]; 丹参酮组 :每日 颈背部皮下注射 D2半乳糖 [ 1000 mg/ ( kg·d) ] ,同时灌服丹 参酮 [ 1 500 mg/ ( kg·d) ]。 11212　10%皮肤匀浆的制备 　取脱毛后背部皮肤组织 015 g 左右 ,经预冷生理盐水漂洗 ,除去皮下脂肪和其他结缔组织 , 滤纸拭干 ,称重 ,量筒量取该组织块 9倍重量预冷生理盐水 , 先取 2 /3量倒入装有组织块烧杯中 ,剪碎组织块后倒入匀浆 管中 ,将剩余 1 /3生理盐水冲洗烧杯壁 ,一起倒入匀浆器中进 行匀浆 ,上下转动研磨数 10次 (10～15 m in) ,充分研磨 ,使组 织浆液化。再将制备好的 10%匀浆用低温低速离心机以转 速 3000转 /m in离心 15 m in,取上清液备用。 11213　皮肤 SOD活力测定 　参照南京建成生物工程公司 SOD试剂盒方法测定 SOD活力 ,单位以 U / m l表示。 11214　皮肤 MDA含量测定 　硫代巴比妥酸 ( TBA )法测定 MDA含量 [ 2 ]。 组织中 MDA (μmol/g) = (测定管吸光度 2测定空白管 吸光度 ) / (管吸光度 2标准空白管吸光度 ) ×标准品浓度 (10μmol/L) /蛋白含量 ( g / L) 11215　皮肤羟脯氨酸含量测定参见文献 [ 3 ]。 113　统计学方法 　采用 SPSS 1110统计软件 ,计量资料均以均数 ±标准差 x ±s表示 ,多个样本均数的比较用方差齐性检验 ,当总体方差齐同时选择 LDS法分析 ;方差不齐时选择 Dunnet C法分析。P < 0105差异有统计学意义。2　结果小鼠皮肤 SOD活力及 MDA含量检测结果见表 1。小鼠皮下注射 D2半乳糖 42 d后皮肤 SOD活力较正常对照组显著降低 ( P < 0101 ) , MDA 含量较正常对照组显著升高 ( P <0101) ,提示造模成功 ;与半乳糖组相比 ,枸杞多糖组和丹参酮组小鼠皮肤组织匀浆中 SOD含量均明显升高 ,丹参酮组升高尤为明显 ( P < 0101) ,超过正常组水平 ,提示丹参酮可明显增强皮肤抗氧化和清除自由基的能力 ,其作用较枸杞多糖显著 ;两组小鼠皮肤组织匀浆中 MDA含量较 D2半乳糖组显著降低 ,且枸杞多糖组降低较丹参酮组更为显著 ( P < 0101) ,提示枸杞多糖清除过氧化脂质 (LPO )能力较 VE更强 ;两组小鼠皮肤组织匀浆中 Hyp含量均明显升高 ,且两组之间没有统计学意义 ( P > 0105) ,说明枸杞多糖和丹参酮均能增强成纤维细胞活性 ,促进皮肤胶原蛋白合成。 表 1　小鼠皮肤生化指标检测结果 ( x ±s) 组别 动物数 ( n) Hyp ( g/ kg) SOD (U /m l) MDA (μmol/g) 正常组 15 0174 ±0115△ 154162 ±6156△ 6173 ±0172△ 衰老模型组 15 0157 ±0112 126126 ±11169 8179 ±0187 丹参酮组 15 0171 ±0113## 170154 ±4195# 6140 ±1111# 枸杞多糖组 15 0174 ±0111# 155162 ±9143#3 4156 ±0151#3 　　注 :与半乳糖组相比 3 P < 0101, ## P < 0105;枸杞多糖组与丹参酮组相比 3 P < 0101 3　讨论 皮肤是最早反应机体衰老的组织 ,已经引起众多学者对 皮肤皱纹、弹性及营养变化等的防治研究 [ 4 ] ,因此预防和延 缓皮肤衰老已成为医学和美容的研究热点 [ 5 ]。本实验结果 证实 ,枸杞多糖和丹参酮均有显著的抗皮肤衰老作用 ,但枸杞 多糖提高 D2半乳糖所致衰老模型小鼠皮肤中 SOD活力作用 不及丹参酮显著。SOD作为体内天然的抗氧化酶之一 ,有清 除自由基的作用 ,其活力的提高有益于机体抗氧化能力 的 [ 6, 7 ] ,其机制可能为丹参酮有明显扩张小血管、抑制血小板 聚集、降低血粘度、改善微循环的作用 ,从而使毛细血管网开 放 ,血流加速 ,动脉血氧分压和血氧饱和度升高 ,组织新陈代 谢增强 , ATP合成增加 ,促进抗氧化酶类合成 ,皮肤中 SOD活 力增强 ,提高细胞清除 H2O2 和 2O2 能力 ,保护细胞免受自由 基损伤 ,而延缓衰老进程 ;丹参酮又有 Ca2 +拮抗剂作用 ,可阻 止 Ca2 +进入细胞内 ,抑制黄嘌呤脱氢酶向黄嘌呤氧化酶转 变 ,减少自由基产生 ;另外 ,丹参酮又有轻微雌激素作用 ,对皮 肤衰老亦有改善作用。枸杞多糖降低 D2半乳糖所致衰老模 型小鼠皮肤中 MDA含量作用却较丹参酮显著 ,其机制可能为 枸杞多糖有很强的抗氧化作用 ,能保护细胞内抗氧化酶类活 性 ,从而阻止多价不饱和脂肪酸的过氧化反应 ,抑制过氧化脂 质生成 ,维持生物膜正常脂质结构和生理功能而发挥抗衰老 作用。枸杞多糖和丹参酮均可使成纤维细胞活性增强 ,胶原 蛋白合成增加 ,而延缓衰老进程。总之 ,枸杞多糖和丹参酮均 有显著抗皮肤衰老作用 ,但二者侧重点不同。 参 　考 　文　献 [ 1 ]　王红丽 ,吴铁 ,陈垦 ,等. 丹参酮抗 D2半乳糖所致小鼠皮肤衰老 作用. 中国医院药学杂志 , 2005, 25 (2) : 1302132. 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