越桔原花青素对大鼠心肌纤维化作用的影响

越桔原花青素对大鼠心肌纤维化作用的影响 范红艳 1 ,王艳春 1 ,任 　旷 1 ,顾饶胜 1 ,沈 　楠 2 ,刘 　微 1 ,钟　越 3 (吉林医药学院 1. 基础医学院药理学教研室、2. 实验中心机能实验室、3. 科研学术处 , 吉林省 吉林市 　132013) 收稿日期 : 2008 - 12 - 06,修回日期 : 2009 - 02 - 10 基金项目 :吉林省教育厅“十一五科技计划 ”项目资助课题 ( No 2007172) 作者简介 :范红艳 (1975 - ) ,女 ,硕士 ,讲师 ,研究方向 :心血管药理 学 , E2mail : fanhongyan1975@ yahoo. com. cn; 王艳春 (1972 - ) ,女 ,博士 ,副教授 ,研究方向 :心肌纤维 化的分子机制 , 通讯作者 , E2mail : wangyanchun1972 @ 163. com 中国图分类号 : R2332; R 28411; R 322111; R 329124; R 542120212; R 5421205; R 97716 文献标识码 : A 文章编号 : 1001 - 1978 (2009) 05 - 0626 - 05 摘要 :目的 　探讨越桔原花青素 ( p rocyanidin from Vaccini2 um, PC)对大鼠心肌纤维化作用的影响及其机制。方法 　体 内实验以异丙肾上腺素 ( isop renaline, Iso) 5 mg·kg- 1 ·d - 1 背部皮下注射 ,构建大鼠心肌纤维化模型 ,同时以灌胃方式 给予 PC 100、200、400 mg·kg- 1 ·d - 1 ,分光光度法检测左心 室心肌组织中羟脯氨酸 ( hydroxyp roline, Hyp)、丙二醛 (ma2 londialdehyde, MDA)含量和超氧化物歧化酶 ( superoxide dis2 mutase, SOD)活性 ;电镜观察心肌超微结构变化。体外实验 采用细胞培养技术以血管紧张素 Ⅱ ( angiotensinⅡ, AngⅡ) 建立新生大鼠心肌成纤维细胞 ( cardiac fibroblast, CFb)增殖 模型 , 给予 25、50和 100 mmol·L - 1的 PC干预。采用四唑 盐 (MTT)比色法测定细胞增殖 ; EL ISA法测定 Ⅰ、Ⅲ胶原及 转化生长因子β1 ( TGF2β1 )蛋白的含量。结果 　PC可剂量 依赖性地降低心肌组织中 Hyp、MDA含量、增强 SOD活性 , 同 Iso组比较差异有统计学意义 ( P < 0105或 P < 0101) ,电 镜结果显示 : PC可缓解 Iso所导致的心肌损伤。体外实验部 分 PC (25、50和 100 mg·L - 1 )可抑制 AngⅡ诱导的 CFb增 殖、胶原合成增加及 TGF2β1 蛋白含量增多 ,与 AngⅡ组比较 差异具有统计学意义 ( P < 0105或 P < 0101)。结论 　PC可 通过抗氧化作用 ,抑制 CFb的增殖及胶原的合成 ,进而抑制 大鼠心肌纤维化 ,对心肌具有一定的保护作用。 关键词 :原花青素 ;心肌纤维化 ;心肌成纤维细胞 　　越桔 (Vaccinium vitis)又称蓝莓 (B lueberry) ,其 中笃斯越桔是我国野生越桔的主要品种 ,在东北地 区资源丰富。越桔富含原花青素 (p rocyanidin, PC) , 原花青素属于生物类黄酮 ,是一种多酚类化合物 ,在 天然植物中如葡萄、山楂、银杏等也广泛存在。近年 研究发现 PC具有抗肿瘤、抗炎症、抗氧化、抗衰老 及抗动脉硬化等作用 [ 1～4 ]。本研究采用异丙肾上腺 素 ( isop renaline, Iso)建立体内大鼠心肌纤维化模 型 ,采用血管紧张素 Ⅱ ( angiotensinⅡ, AngⅡ)建立 体外大鼠心肌成纤维细胞增殖模型 ,观察 PC对大 鼠心肌纤维化的抑制作用 ,并在细胞水平探讨其作 用机制。 1　材料与方法 1. 1　材料 1. 1. 1　动物 　W istar大鼠 ,清洁级 , ♀♂兼用 ,由吉 林大学基础医学部实验动物中心提供。 1. 1. 2　药品试剂 　越桔原花青素 ,南京苏朗医药科 技开发有限公司 ;异丙肾上腺素 ,济南科汇药业有限 公司 ; AngⅡ和 MTT, Sigma公司 ; IMDM和血清 , Gib2 co公司 ;胰蛋白酶 ,宝泰克生物科技公司 ;羟脯氨酸 试剂盒、SOD试剂盒和 MDA试剂盒 ,南京建成生物 工程公司 ; Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TGF2β1 EL ISA试剂 盒 ,晶美生物工程有限公司。 1. 2　方法 1. 2. 1　体内实验 1. 2. 1. 1　实验分组和给药 　W istar系大鼠 60只 , 体重 180～220 g,随机分为 5组 :正常组、模型组 ( Iso组 )、PC各剂量组 ( 100、200、400 mg·kg- 1 · d - 1 ) ,每组 12只。除正常组 ,各组均背部皮下注射 Iso 5 mg·kg- 1 ·d - 1 ,连续 7 d, PC组自 2 d开始灌 胃给药 14 d,每日 1次 ,正常组和模型组每日给予相 同体积的 015%羧甲基纤维素钠溶液。 1. 2. 1. 2　心肌组织羟脯氨酸 ( hydroxyp roline, Hyp ) 含量的测定 　心脏组织用冰生理盐水冲洗后 ,取 150 mg左心室心肌组织用碱水解法 ,严格按照试剂 盒说明在 550 nm波长处用分光光度法测定心肌组 织 Hyp的含量。 1. 2. 1. 3　心肌组织丙二醛 (MDA )含量和超氧化物 歧化酶 ( SOD )活性的测定 　取约 150 mg左心室心 肌组织 ,用生理盐水在冰浴下制成 5%组织匀浆 , 4℃, 4 000 r·m in - 1 ,离心 15 m in,取上清液严格按 试剂盒说明 (采用硫代巴比妥酸法 )测定 MDA 含 量 ;取 5%组织匀浆离心上清液稀释 ,制成 1%组织 匀浆上清液 ,严格按 SOD试剂盒说明 (采用黄嘌呤 氧化酶法 )测定其活性。 1. 2. 1. 4　心肌超微结构观察 　取大鼠新鲜心尖部 ·626· 中国药理学通报 　Chinese Pharm acologica l B ulletin　2009 May; 25 (5) : 626～30 分组织 ,以 215%戊二醛固定 115 h, 1%锇酸固定 60 m in,经 50%、70%、80%、90%、100%丙酮逐级脱 水 ,逐步渗透 ,以包埋剂环氧树脂 812包埋聚合 ,超 薄切片 ,醋酸双氧铀 - 柠檬酸铅双重染色后 ,在 JEM 21200EX电子显微镜下进行心肌细胞超微结构 观察。 1. 2. 2　体外实验 1. 2. 2. 1　心肌成纤维细胞 (CFb)的分离、培养 　取 出生后 1～3 d的 W istar大鼠 ,无菌开胸取心肌 , D2 Hank′s液清洗 ,剪成 1 mm3 大小的碎片 , 01125%胰 蛋白酶反复消化 (37℃水浴 , 8 m in /次 ) ,分别收集各 次消化上清液 ,离心 ( 1 000 r·m in - 1 , 5 m in)弃上 清 ,用含 10%血清的 IMDM培养基重悬沉淀制成细 胞悬液 ,接种培养瓶中 ,置 37℃、5% CO2 培养箱内 培养。用差速贴壁法去除内皮细胞及心肌细胞。实 验采用第 3～5代细胞。 1. 2. 2. 2　实验分组和给药 　CFb细胞分为 :对照 组、模型组、PC药物治疗组。各组细胞无血清培育 24 h后 ,除对照组均给予终浓度为 10 - 7 mol·L - 1的 AngⅡ,药物治疗组同时给予 PC,终浓度分别为 25、 50、100 mg·L - 1 ,对照组给予 1%血清的 IMDM 培 养基。 1. 2. 2. 3　细胞生长繁殖实验 (MTT法 ) 　将处于对 数生长期的 CFb制成细胞悬液 ,以 1 ×108 cells· L - 1浓度接种于 96孔板 ,每孔 200μl。分别给予不 同的处理因素作用 48 h。每孔加入 MTT溶液 ( 5 g ·L - 1 ) 20μl, 37℃继续培养 4 h,终止培养 ,每孔加 入 150μl DMSO,震荡 10 m in后酶标仪上测光密度 (OD)值 ,测定波长 490 nm,以 (各实验组 OD值 /对 照组 OD值 ) ×100%表示细胞增殖率。 1. 2. 2. 4　Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及 TGF2β1 蛋白的测定 ( EL ISA法 ) 　取第 3代 CFb制成细胞悬液 ,以 215 ×108 cells·L - 1浓度接种于 24孔板 ,每孔 1 m l。各 因素处理后 ,分别在培养的 24 h、48 h吸取细胞上清 液按照试剂盒说明检测 Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量及 TGF2β1 蛋白含量。 1. 2. 3　统计学分析 　实验所有数据以 珋x ±s表示 , 组间比较采用方差分析及 q检验进行。 2　结果 2. 1　体内实验 2. 1. 1　PC对 Iso所致心肌纤维化大鼠心肌 Hyp含 量、MDA含量和 SOD活性的影响 　结果表明 ,与模 型组比较 , PC小、中、大剂量组大鼠心肌中 Hyp含 量降低、MDA含量减少、SOD活性增强 ,且随剂量增 加作用依次增强。PC的作用与模型组比较差异具 有统计学意义 ( P < 0105或 P < 0101) ,见 Tab 1。 Tab 1　Effects of procyan id in on concen tra tion of hydroxyproline, MDA and SOD activ ity of left ven tr icle in m yocard ia l f ibrosis induced by Iso in ra ts(珋x ±s, n = 12) Group Dose /mg ·kg - 1·d - 1 Hyp /mg·g - 1 MDA /mmol ·g - 1 Pro SOD /U·mg - 1 Pro Control 0. 36 ±0. 03　　 0. 44 ±0. 03 50. 93 ±3. 56 Model 0. 48 ±0. 043 3 0. 68 ±0. 053 3 39. 06 ±2. 493 3 PC 100 0. 42 ±0. 04# 0. 57 ±0. 04# 41. 64 ±2. 31# 200 0. 38 ±0. 02## 0. 51 ±0. 04## 43. 99 ±2. 49## 400 0. 35 ±0. 01## 0. 45 ±0. 02## 50. 18 ±3. 99## 　　3 3 P < 0101 vs control group; # P < 0105, ## P < 0101 vs model group 2. 1. 2　心肌超微结构观察 　电镜下可见对照组心 肌肌节清晰、排列规则 ,心肌细胞无水肿 ,肌原纤维 间线粒体排列规则 ,线粒体无肿胀 ,被膜完好 ,嵴无 断裂 ,细胞核无变化。皮下注射 Iso模型组肌节紊 乱、断裂、溶解 ,肌丝部分溶解 ,肌膜破损 ,心肌细胞 排列混乱 ,线粒体肿胀、部分嵴出现断裂、呈现出空 泡样变化 ,线粒体间糖原颗粒消失 ,细胞核肿胀空 亮 ,核染色质欠均匀。与模型组相比 , PC给药组肌 丝相对完整 ,明暗带清晰 ,有少许心肌肌丝撕裂 ,局 部溶解 ,细胞水肿不明显 ,线粒体轻度肿胀 ,线粒体 膜较完整、嵴较清晰可见 ,大部分细胞器结构完整 , 见 Fig 1。 F ig 1　Effect of procyan id in on ultra structure changes in ra ts by subcutaneous in jection of isoprel under electron m icroscope ( ×10 000) 　　A: Control; B: Model; C: PC 200 mg·kg - 1 ·d - 1 2. 2　体外实验 2. 2. 1　PC对体外培养 CFb形态的影响 　倒置显微 镜下观察 :正常组细胞胞质丰富 ,成梭型 ,细胞间连 接丰富 ;模型组细胞增生活跃 ,呈火焰状 ; PC 50 mg ·L - 1组细胞数明显较稀疏 ,细胞间连接减少 ,见 Fig 2。 2. 2. 2　PC对 CFb增殖的影响 　MTT结果表明 : ·726·中国药理学通报 　Chinese Pharm acolog ica l B u lletin　2009 May; 25 (5) Tab 2　Effect of procyan id in on the prolifera tion, collagen m etabolism and TGF2β1 concen tra tion of cultured neona ta l ra t card iac f ibrobla st stim ula ted by AngⅡ (珋x ±s, n = 8) Group Dose /mg·L - 1 Cell p roliferation / % PⅠNP /ng·L - 1 PⅢCP /ng·L - 1 TGF2β1 / ng·L - 1 Control 100. 04 ±8. 10 67. 23 ±5. 12 11. 27 ±0. 43 802. 51 ±10. 42 AngⅡ 149. 69 ±16. 333 3 540. 39 ±40. 323 3 36. 14 ±2. 213 1237. 95 ±23. 483 3 PC 25 129. 05 ±8. 21 462. 26 ±52. 16 32. 16 ±7. 01 1153. 20 ±9. 65# 50 134. 33 ±6. 81## 254. 17 ±19. 82## 24. 21 ±2. 38# 1016. 64 ±3. 06## 100 140. 26 ±16. 68## 127. 42 ±11. 36## 16. 52 ±0. 19## 895. 25 ±15. 95## 　　3 P < 0105, 3 3 P < 0101 vs control group ; # P < 0105, ## P < 0101 vs model group F ig 2　Effect of procyan id in on CFb m orphology under m icroscope ( ×100) 　　A: Control; B:Model; C: PC 50 mg·L - 1 AngⅡ模型组细胞增殖率明显高于对照组 ( P < 0101) , 经 PC (25、50、100 mg·L - 1 )作用 48 h后 ,细 胞增殖率降低 ,与 AngⅡ模型组相比差异有统计学 意义 ( P < 0105或 P < 0101) ,且随剂量增加抑制作 用逐渐增强 ,见 Tab 2。 2. 2. 3　PC对 CFb分泌 Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的影响 　 各处理因素作用 48 h后 , AngⅡ模型组细胞 Ⅰ、Ⅲ型 胶原含量明显高于对照组 ( P < 0101)。PC在 25～ 100 mg·L - 1范围内可抑制 AngⅡ诱导的 Ⅰ、Ⅲ型胶 原合成增加 ( P < 0105或 P < 0101) ,见 Tab 2。 2. 2. 4　PC对 TGF2β1 的影响 　AngⅡ作用 24 h即 可明显升高 TGF2β1 的含量 ,与正常对照组比较差 异有统计学意义 ( P < 0101) , PC可以抑制 AngⅡ对 于 TGF2β1 的诱导作用 ,各剂量组均可降低 TGF2β1 的蛋白含量 ( P < 0105或 P < 0101) ,见 Tab 2。 3　讨论 　　心肌纤维化是以心脏间质 CFb过度增殖和胶 原纤维蛋白基因的过量表达为特征的心脏间质重 构 [ 5, 6 ]。心肌纤维化导致心脏的功能发生障碍 ,是 心功能由代偿向失代偿期转变的重要病理过程 ,而 CFb增殖在心肌纤维化中起重要作用 [ 7 ]。 Iso能激 动心脏β1 受体 ,对心脏有正性变时和变力作用 ,过 量的 Iso可引起心率加快、心肌收缩力增强 ,心肌耗 氧量增加 ,心脏负荷加重 ,致使心肌相对和绝对缺 血 ;还可引起细胞内钙离子浓度增高 ,使三磷酸腺苷 分解致线粒体出现不可逆性损伤 ,终使心肌纤维化 的发生。已有资料表明 ,连续用 Iso刺激大鼠可引 起大鼠心肌纤维化的发生。心肌发生纤维化时最主 要的病理改变为细胞外基质 ( extracellular matrix, ECM )的大量积聚 ,心脏中 ECM 含量最多的是胶 原 ,而胶原具有特异性 Hyp,因而 Hyp含量的高低在 心肌纤维化的评估中具有重要意义。正常状态下 Hyp在胶原蛋白中占 1314% ,测定心肌 Hyp的含量 可反映心肌胶原蛋白的含量 ,从而判断心肌间质细 胞增殖和纤维组织增生的程度。本研究所采用的 PC是越桔中的主要成分 ,也是其重要的生物活性物 质。目前国内的研究集中在 PC对于缺血心肌的保 护作用 [ 8 ]。有关 PC对于心肌纤维化的作用尚未见 文献报道。 　　本研究体内实验采用 Iso诱发大鼠心肌纤维化 模型 ,表现为左心室心肌组织 Hyp含量明显增加 , 同时观察到 MDA 含量减少、SOD 活性增强 ( P < 0101)。电镜观察进一步显示 :间质中成纤维细胞、 胶原纤维明显增生且胶原纤维排列紊乱 ,表明心肌 纤维化模型成立。在构建动物模型的同时 ,采用 PC 灌胃 14 d,在 100～400 mg·kg- 1 ·d - 1剂量范围内 可见大鼠左心室心肌组织的 Hyp含量降低、MDA含 量减少、SOD活性增强 ;电镜结果显示 : PC可明显缓 解 Iso所导致的心肌损伤。 　　研究表明 AngⅡ是促心肌纤维化发生的因 素 [ 9 ] ,转化生长因子 2β1 ( TGF2β1 )是器官纤维化的 治疗靶标 [ 10, 11 ]。AngⅡ可通过刺激 CFb分泌 TGF2 β1 而促进胶原生成。本实验以 AngⅡ作用于 CFb 构建心肌纤维化的细胞模型 ,发现 48 h后细胞增殖 明显 ,细胞培养液中 Ⅰ及 Ⅲ型胶原含量增多 ;细胞培 养液中 TGF2β1 在 24 h即有明显增加 ,与对照组比 较差异具有统计学意义 ( P < 0105或 P < 0101)。与 文献报道一致 [ 12 ] ,即说明心肌纤维化细胞模型成 立。实验结果显示 PC可降低 AngⅡ诱导的 CFb增 ·826· 中国药理学通报 　Chinese Pharm acolog ica l B u lletin　2009 May; 25 (5) 殖、Ⅰ、Ⅲ型胶原含量增多及 TGF2β1 增加 ,表明 PC 在抑制 CFb增殖的同时也能降低 TGF2β1 增加 ,进 而抑制心肌间质胶原含量的增多。 　　近年来 ,已有研究显示大量氧自由基生成及脂 质过氧化反应也是促进心肌纤维化发展的重要参与 因素。超氧化物歧化酶 ( superoxide dismutase, SOD ) 是氧自由基的特异性降解酶 , SOD活性及含量的变 化直接反映氧自由基的消长情况。在心肌发生纤维 化时 ,氧自由基生成增加 ,而氧自由基清除酶 SOD 活性降低 ,使氧自由基堆积 ,后者转化为羟自由基后 可对心肌细胞膜产生脂质过氧化作用 ,导致心肌损 伤。丙二醛 (malondialdehyde, MDA )是脂质过氧化 产物 ,其含量的变化可直接反映心肌细胞膜过氧化 的速度 ,在一定程度上也能间接反映氧自由基的生 成情况。在体内部分实验中发现 :经治疗 , PC组左 心室心肌组织 SOD活性明显增加 ,增强了内源性氧 自由基清除系统的功能 ,MDA含量明显降低 ,以上 两参数与模型组相比 , PC 100、200 、400 mg·kg- 1 · d - 1组差异均有统计学意义 ( P < 0105或 P < 0101)。 在异丙肾上腺素构建的心肌损伤模型中 ,心肌超微 结构明显被破坏 ,若大鼠在注射 Iso后 ,同时灌胃 PC,心肌超微结构变化介于对照组和 Iso组之间 ,可 见 PC对 Iso所致心肌超微结构的损伤有明显的保 护作用 ,从而说明 PC通过抗脂质过氧化作用、加强 自由基的清除而抑制心肌纤维化 ,其在临床心肌纤 维化疾病预防和治疗中具有一定的研究开发价值 , 但有关 PC抗氧化作用与抑制 CFb增殖之间的具体 作用机制还需进一步探讨。 参考文献 : [ 1 ]　Schm idt B M, Erdman J W Jr, L ila M A. 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Effects of procyan id in from vacc in ium on the m yocard ia l f ibrosis in ra ts FAN Hong2yan1 ,WANG Yan2chun1 , REN Kuang1 , GU Rao2sheng1 , SHEN Nan2 , L IU W ei1 , ZHONG Yue3 (1. D ept of Pharm acology, B asic M edicine of J ilin M edica l College; 2. D ept of Functiona l Experim ental Science, Experim en ta l Cen ter; 3. D ept of Technicality, J ilin M edica l College, J ilin J ilin　132013, Ch ina) Abstract: A im 　To exp lore the effect of Procyanidin from Vaccinium ( PC) on the myocardial fibrosis and its mechanism. M ethods　The model of myocardial fi2 brosis in ratswas built by subcutaneous injection of iso2 p renaline ( Iso) for 5 mg·kg- 1 ·d - 1 in vivo. Mean2 while, rats were treated with PC 100, 200 and 400 mg ·kg- 1 · d - 1 by gastrointestinal adm inistration. The contents of hydroxyp roline ( Hyp ) , malondialdehyde (MDA ) and the activity of superoxide dismutase ( SOD ) in left ventricle were assayed with spectropho2 tometry respectively. Changes of myocardial ultrastruc2 ture were observed by electronic m icroscope. The cultu2 ·926·中国药理学通报 　Chinese Pharm acolog ica l B u lletin　2009 May; 25 (5) red neonatal rat CFb was isolated by tryp sin digestion method. The p roliferation of CFb was induced by An2 giotensin Ⅱ and assessed by thiazolyl blue (MTT) as2 say. PC was added in different dosage (25, 50 and 100 mmol·L - 1 ) . Ⅰ, Ⅲ collagen quantification and TGF2 β1 levels were determ ined by the EL ISA. Results　 In vivo, compared with model group, the contents of hydroxyp roline and malondialdehyde of left ventricle were significantly reduced and the activity of superox2 ide dismutasein left ventricle wasmarkedly enhanced in PC three group s( P < 0105 or P < 0101). The results of electron m icroscope showed that PC could relieve myo2cardial damage induced by Iso. In vitro among the doseof 25, 50, 100 mg·L - 1 , PC p revented the p roliferationof the CFb, decreased the quantification of Ⅰ、Ⅲ col2lagen and the exp ression of TGF2β1 ( P < 0105 or P <0101). Conclusion　PC can inhibit cardiac fibroblastp roliferation and collagen synthesis through antioxida2tion, then inhibit myocardial fibrosis and p rotect myo2cardium in rats.Key words:p rocyanidin ; myocardial fibrosis; cardiacfibroblast 双氢青蒿素保护刀豆蛋白 A诱导的小鼠肝损伤及机制探讨 李 　敏 ,金晓琨 ,李卫东 (北京大学医学部基础医学院药理系 ,北京 　100191) 中国图书分类号 : R2332; R 28411; R 329124; R 392112; R 5751022; R 575105311; R 97713; R 97716 文献标识码 : A　文章编号 : 1001 - 1978 (2009) 05 - 0630 - 04 摘要 :目的 　研究双氢青蒿素 ( dihydroqinghaosu, DQHS)对刀 豆蛋白 A ( concanavalin A, ConA )诱导的小鼠免疫性肝损伤 的保护作用及可能机制。方法 　小鼠尾静脉注射 ConA建 立肝损伤模型 ;改良赖式法和 EL ISA法分别测定 DQHS预给 药对该模型小鼠血浆转氨酶和 TNF2α水平的影响 ; MTT法 检测 DQHS对 ConA诱导体外小鼠脾淋巴细胞增殖的影响 ; RT2PCR检测 DQHS对 LPS刺激的 RAW 26417巨噬细胞 IL2 1β和 TNF2αmRNA表达水平的影响。结果 　与模型组比 较 , DQHS 40μg·g- 1给药组可降低 ConA诱导的肝损伤小 鼠血浆转氨酶水平 ,各 DQHS组均可降低该小鼠血浆 TNF2α 水平 ; DQHS 40μmol·L - 1和 100μmol·L - 1处理组能抑制 ConA诱导的体外脾淋巴细胞增殖 ,减少 LPS刺激的巨噬细 胞炎症因子 IL21β和 TNF2αmRNA的表达。结论 　DQHS对 ConA诱导的小鼠免疫性肝损伤有保护作用 ,该作用可能通 过抑制脾淋巴细胞增殖和巨噬细胞相关炎症细胞因子表达 来实现。 关键词 : 双氢青蒿素 ; 刀豆蛋白 A; 肝损伤 ; 淋巴细胞 ; RAW 26417细胞 收稿日期 : 2008 - 11 - 19,修回日期 : 2009 - 02 - 23 作者简介 :李　敏 (1983 - ) ,女 ,硕士生 ,研究方向 :免疫性肝损伤 , Tel: 010282801473, E2mail: m inli0123@bjmu. edu. cn; 李卫东 (1957 - ) ,女 ,博士 ,副教授 ,研究方向 :抗炎和免 疫药 理 学 , 通 讯 作 者 , Tel: 010282802798, Fax: 0102 82801686, E2mail: lwdpharma@126. com 　　肝损伤是人类最常见的疾病之一。动物肝损伤 模型种类较多 ,包括化学性肝损伤、药物性肝损伤、 酒精性肝损伤、免疫性肝损伤等 [ 1, 2 ] ,这些模型为我 们探究肝病机制提供了重要工具。其中 ConA诱导 的免疫性肝损伤模型较好地模拟人类肝脏自身免疫 性疾病和病毒性肝炎免疫性肝损害的发病机制 ,它 与淋巴细胞的增殖和巨噬细胞的活化关系密切 [ 3 ]。 　　青蒿素是从菊科蒿属植物青蒿中提取的一种具 有过氧桥的新型倍半萜内酯类化合物 ,是一种高效 低毒的抗疟药物。近年来研究发现 ,青蒿素及其衍 生物同时具有明显的免疫抑制、免疫调节作用 ,对系 统性红斑狼疮 [ 4 ]、类风湿性关节炎 [ 5 ]、炎症性肠 病 [ 6 ]和多种皮炎都表现出治疗作用 ,但在免疫性肝 损伤方面却鲜有报道。鉴于目前糖皮质激素和免疫 抑制剂为主的免疫性肝炎治疗药物在治疗时常发生 出血、感染等副作用 ,我们研究青蒿素衍生物双氢青 蒿素 ( dihydroqinghaosu, DQHS)对 ConA诱导的免疫 性肝损伤的治疗作用及相关机制 ,为扩大 DQHS适 应症提供实验依据。 1　材料与方法 1. 1　药品、动物及试剂 　DQHS由昆明制药厂提 供 ,体内实验用生理盐水充分混悬后灌胃 ,体外实验 用终浓度低于 12180 mmol·L - 1的二甲基亚砜 (DM2 SO )超声助溶 ,配成 100μmol·L - 1母液 ,临用时稀 释至所需浓度 ; ConA Ⅳ型 :美国 Sigma公司 ;地塞米 松磷酸盐注射液 :天津市氨基酸公司人民制药厂 ; ·036· 中国药理学通报 　Chinese Pharm acological B u lletin　2009 May; 25 (5) : 630～3