实验5.药敏试验

null药 敏 试 验药 敏 试 验 临床病原生物学教研室 目的要求目的要求了解药物敏感试验的方法和实际意义 掌握纸片扩散法和肉汤试管稀释法的原理、操作方法及结果判读方法方法纸片扩散法 肉汤试管稀释法纸片扩散法纸片扩散法原理原理含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。试验程序试验程序材料材料普通平皿培养基,大肠杆菌6h液体培养物,葡萄球菌6h液体培养物。 含抗生素的干燥滤纸片（直径6mm，每个纸片的药物含量：青霉素2U/片，链霉素、氯霉素、庆大霉素均为10μg/片） 无菌镊子、量尺方法方法取琼脂平皿培养基两个，分别在其底部中央位置标注“大肠杆菌”和“葡萄球菌”字样，同步进行如下操作。方法方法标记分区 密涂接种 贴片 培养 结果观察1.标记分区1.标记分区底部观2.密涂接种2.密涂接种 分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转60度二次密涂接种，然后同方向旋转60度后再次密涂接种。顶部观3.贴片3.贴片顶部观4.培养4.培养置37℃温箱， 倒置培养18h5.结果观察5.结果观察抑菌圈直径≥15mm 高度敏感 抑菌圈直径10-15mm 中度敏感 抑菌圈直径≤10mm 低度敏感 无抑菌圈 不敏感或耐药注意事项注意事项接种时均匀密涂 贴片时，用无菌镊子轻轻触压药物纸片使之与培养基充分接触 贴片后不能再更改纸片位置 镊取药物纸片时一旦掉到培养基面，则继续保持其位置，切勿镊起重新放置，以防不同抗生素交叉影响 整个贴片过程应在15min内完成肉汤试管稀释法肉汤试管稀释法原理原理以肉汤液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后接入待检菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度（MIC）。材料材料肉汤试管培养基1ml×10管 大肠杆菌菌液 40U/ml青霉素溶液、40μg/ml庆大霉素溶液 移液管2支方法方法菌液准备：大肠杆菌浓度200亿/ml 抗菌药物稀释：对倍稀释1-10号管 接种：0.1ml/管，接种至1-10号管 培养：置37℃温箱，培养24h 结果判读：肉眼观察，以不出现肉眼可见生长的最低药物浓度为该药对测试菌的MIC菌液准备菌液准备大肠杆菌菌液 用比浊法调菌液浓度为200亿/ml抗菌药物对倍稀释抗菌药物对倍稀释培养培养置37℃温箱， 培养24h结果判读结果判读结果判读：肉眼观察，以不出现肉眼可见生长（混浊现象）的最低药物浓度为该药对测试菌的MIC注意事项注意事项对倍稀释时最后的1ml弃液不能随意丢弃,注意环境卫生 接种后培养前不能忘记加盖试管塞意义意义 可预测抗菌治疗的效果 指导抗菌药物的临床应用 发现细菌耐药机制的存在,有助于临床选药 评价新抗菌药物抗菌谱和抗菌活性 对细菌耐药谱进行分析和分型有助于某些菌种的 鉴定