制首乌_北沙参_紫丹参预防白内障的实验研究

地增加血容量、降低HCT、降低全血黏度, 可改善小儿体外循环 平均动脉压, 从而增强组织灌注, 改善微循环, 防止手术后并 发症。 参考文献 1 � 付建峰, 满昭熙. 体外循环对先心病患儿肺顺应性的影响. 河北医 药, 2007, 29: 660. 2 � 马洪亮,吴振华,宋子贤. 6%中分子羟乙基淀粉用于体外循环时温 度对脑电双频指数的影响.河北医药, 2007, 29: 698�699. 3 � Wrbb AR, Tighe D, Moss RF, et al. Advantages of an arrow range medium molecuar weight hydroxyethyl starch for volume maintenan ceinaprocine model of fecalperitonit is. Crit Care Med, 1991, 19: 409. 4 � Zkiria BA, Subbarao Ch, Oz MC, et al .Hydroxyethyl starch macro molecules reduce myocardial reperfusion injury. Arch Surg, 1990, 25: 930. 5 � Blaicher AM, Reiter WJ, Blaicher W, et al. The effect of hydroxyethyl starch on platelet aggregation in vitro. Anesth Analg, 1998, 86: 1318. 6 � Treib J, Haass A,Piclur G, et al. Bleeding complicat ion scan be avoided using hydroxyethyl starch w ith alow MW in vivo. Intensive Care Medicine, 1999, 23: 60. (收稿日期: 2008- 08- 22) �论著� 制首乌、北沙参、紫丹参预防白内障的 实验研究 赵平 � 周忠友 � 李慎乐 � 白瑜 项目来源: 河北省卫生厅中医药管理局资助项目(编号: 200133) 作者单位: 050051� 石家庄市,河北医科大学第三医院眼科 � � 摘要! � 目的 � 研究制首乌、北沙参、紫丹参通过保肝抗衰老,预防白内障的作用。方法 � 用 D�半乳 糖将2 个月龄大鼠制成衰老模型, 然后用制首乌、北沙参、紫丹参三味药灌胃, 40 d 后检测衰老大鼠晶状体 组织中谷胱甘肽过氧化物酶( glutathione perox idase, GSH�Px)、超氧化物歧化酶( superox ide dismutase, SOD)、丙 二醛( maleic dialdchyde, MDA)的活力和含量,并借助电子显微镜观察肝细胞凋亡的形态学变化。结果 � 中 药治疗组晶状体中 GSH�Px、SOD的活力较衰老模型组明显增加( P < 0. 01) , MDA 的含量较衰老模型组明 显降低( P < 0. 01)。且通过对肝细胞超微结构的观察表明: 此三味中药能明显抑制肝细胞的凋亡。结论 � 制首乌、北沙参、紫丹参三味药联和应用具有改善肝细胞活性, 抗衰老,延缓白内障发生的作用。 关键词! � 制首乌;北沙参; 紫丹参;白内障; 脂质过氧化;肝细胞 中图分类号! � R 776. 1;R 282� � 文献标识码! � B � � 文章编号! � 1002- 7386( 2009) 01- 0023- 03 Experimental study on the preventive effect of Radix polygoni multiflori preparata, Coastal glehnia root and Radix salviae miltiorrhizae on cataract � ZHAO Ping , ZHOU Zhongyou, LI Shenle, et al . Department of Ophthalmology , The Third Hospital of H ebei Medical University , Shijiazhuang 050051 Abstract! � Objective � To observe the preventive effect of Radix polygoni multiflori preparata, Coastal glehnia root and Radix salviae miltiorrhizae on cataract by protecting liver and anti�aging.Methods� Aging models of rats were made by hypodermicly injecting D�galactose into 2�month�old rats∀ back of neck. The rats were given the decoction of Radix polygoni multiflori preparata, Coastal glehnia root and Radix salviae miltiorrhizae by gastric infusion. The activities of glutathione peroxidase ( GSH�Px ) , superoxide dismutase ( SOD) and maleic dialdehyde ( MDA) in the aging rats∀ lens were detected, and the morphological changes in liver cells were observed by transmission electronic microscope after 40 days. Results� The activities of GSH�Px and SOD in TCM group were increased significantly, as compared with those in aging model group( P< 0. 01) , and the content of MDA in TCM group was decreased significantly, as compared with that in ag ing model group( P< 0. 01) . The observation results of ultrastructure of liver cells showed that Chinese herbs could inhibit apoptosis of aging rats∀ liver. Conclusion � The combined application of Radix polygoni multiflori preparata, Coastal glehnia root and Radix salviae miltiorrhizae plays an important role in improving the activity of liver cells, anti�aging and delaying process of cataract. Key words! � Radix polygoni multiflori preparata; Coastal glehnia root; Radix salviae miltiorrhizae; cataract; lipid perox ide; liver cell � � 白内障是全球第一位的致盲眼病, 随着我国人口的老龄 化,白内障的发病率在不断上升。越来越多的实验证实白内障 的发生与晶状体中自由基增多所致的脂质过氧化反应增强和 抗氧化功能下降关系密切[1]。因此,寻找终止或抑制晶状体脂 23河北医药 2009年 1 月 第 31 卷 第 1 期 � Hebei Medical Journal, 2009, Vol 31 Jan, No . 1 质过氧化反应的方法,将有利于延缓和预防白内障的发生和发 展。此外, 从中医的角度来看, 白内障属肝肾阴虚, 精血不足, 不能上荣于目所致[2]。大量中西医研究证实,制首乌、北沙参、 紫丹参三味中药不仅具有滋补肝肾, 养血明目之功效, 而且是 抗脂质过氧化的良药, 本实验将三者配伍, 通过观察其保护肝 细胞、抑制晶状体脂质过氧化的作用, 进一步分析和验证其预 防白内障的机理和功效。 1 � 材料与方法 1.1 � 材料 � 采用 2 个月龄Wistar雄性大鼠 30 只, 体重 149~ 152 g, 由河北医科大学实验动物中心提供。许可证号: SCXK (冀) 2003�1�003。中药由制首乌、北沙参和紫丹参三味药组成, 由河北医科大学第三医院制剂室制成口服液。谷胱甘肽过氧 化物酶( GSH�Px)、超氧化物歧化酶( SOD)、丙二醛( MDA)试剂盒 均由南京建成生物公司提供。D�半乳糖由上海试剂二厂生产, 批号: 051075�01。实验仪器: 722 分光光度计(上海精密仪器厂 生产) ; 日立H600型透射电镜(日本日立公司生产)。 1. 2� 方法 1. 2. 1 � 动物的分组与模型制备: 将实验动物随机分为 3 组, 每 组10只。正常对照组: 正常大鼠; 衰老模型组: 大鼠每日颈背 部皮下注射D�半乳糖 100 g�kg 体重,连续注射 40 d, 形成糖代谢 紊乱所致的亚急性衰老模型;中药治疗组: 上述造模的同时, 每 日 2次给予制首乌、北沙参、紫丹参三味药制成的口服液(以下 简称中药)灌胃 4 ml�次,持续 40 d。40 d 后处死所有实验动物, 测定观察指标。 1. 2. 2 � 取材和标本的处理: 各大鼠于 40 d 后股动脉放血处死, 迅速取出晶状体和肝脏组织。将取出的晶状体组织去除血液, 滤纸拭干, 称重,放入 5~ 10 ml 的小烧杯内。取 9 倍于组织重 量的生理盐水倒入组织烧杯,用组织捣碎机研磨成 10%组织匀 浆, 1 000~ 2 000 r�min离心 10 min, 取上清液进行 GSH�PX、SOD 活力和 MDA含量的测定(具体步骤和计算方法严格按照试剂 盒说明书进行)。 将肝脏组织切成 1 mm3 大小的组织块, 固定于 4% 戊二醛 磷酸缓冲溶液中, 4# , 保存 1 h; PBS 冲洗; 1% 锇酸, 4# ,后固定 1 h; PBS 冲洗; 50%、70%、80%、90%、100% 乙醇梯度脱水; 100%丙酮浸透 15~ 30 min; 包埋剂包埋; 分别在 37 # 、45# 、 60 # ,各 24 h 聚合; 用超薄切片机切成 50 nm 的超薄切片;醋酸 铀和枸椽酸铅双重电子染色;透射电镜观察照相。 1. 3� 统计学分析 � 应用 SPSS 12. 0 统计软件包进行统计学处 理,计量以 �x ∃ s 表示,采用 t 检验, P < 0. 05 为差异有统 计学意义。 2 � 结果 2. 1� 中药对大鼠晶状体自由基代谢的影响 � 注射半乳糖后衰 老模型组大鼠与正常对照组比较晶状体中 SOD、GSH�Px 活力明 显降低( P < 0. 01) , MDA 含量明显升高( P < 0. 01)。中药治 疗组大鼠晶状体 SOD、GSH�Px 活力与正常对照组比较差异无统 计学意义( P > 0. 05) ,较衰老模型组明显升高( P < 0. 01) ; 而 MDA含量较正常组和衰老模型组均有明显降低( P < 0. 01) , 见 表 1。 表 1� 3组大鼠晶状体中GSH�Px( U�mg prot )、SOD(U�mg prot)、 MDA( nmol�mg prot )活力和含量的比较 n = 10, �x ∃ s � � 组别 GSH�Px(U�mg ) SOD(U�mg) MDA( nmol�mg ) 正常对照组 � � 7. 6∃ 0. 4 � � 2. 0∃ 0. 1 � � � 0. 05∃ 0. 01# 衰老模型组 6. 9∃ 0. 2* # 1. 2∃ 0. 1* # 0. 06∃ 0. 01* # 中药治疗组 7. 4∃ 0. 3 2. 0∃ 0. 2 0. 03∃ 0. 02* � � 注: 与正常对照组比较, * P < 0. 01; 与中药治疗组比较, # P < 0. 01 2. 2� 中药对大鼠肝组织超微结构的影响 � 正常对照组: 肝细 胞体积大小正常, 细胞核染色质均匀分布, 核膜完整, 无变形 (图 1) ;细胞质内有大量的线粒体、粗面内质网、游离核糖体, 线 粒体嵴较完整(图 2) ,粗面内质网无脱颗粒现象(图 3)。衰老 模型组: 肝细胞体积缩小, 细胞核染色质浓缩, 电子密度增加, 边集于核膜下,厚薄不均, 有的部分形成半月,部分核膜不整形 (图 3) ; 细胞质中线粒体体积缩小、数量减少,部分和大部分嵴 融合消失(图 4) ,粗面内质网有轻度脱颗粒现象(图 4) , 糖元数 量基本正常。中药治疗组: 肝细胞体积正常, 细胞核染色质较 均匀分布,部分核膜不整形(图 5) ; 细胞质中各细胞器无明显变 化,线粒体和粗面内质网体积数量均正常 (图 6) , 可见初级溶 酶体。 3 � 讨论 白内障成因尚不十分清楚,但现代研究认为白内障的产生 与氧自由基和脂质过氧化物在晶状体内的堆积密切相关[ 3]。 自由基是生物体正常代谢过程中不断产生的,损害自身的毒性 产物。其中氧自由基可以引发脂类发生过氧化反应, 产生的脂 质过氧化物导致细胞膜的老化和多种疾病的发生。但由于正 常机体中存在着天然的自由基清除剂和抗氧化系统, 使自由基 的产生和清除处于动态平衡,保持机体不受自由基的损害。 眼同其他需氧组织一样,在生理代谢过程中能产生氧自由 基等活性氧类物质, 同时眼组织中也存在抗氧化防御系统, 如 SOD、GSH�Px、过氧化氢酶( catalase, CAT)、过氧化物酶 ( peroxi� dase, POD)等。这些抗氧化物质在维持晶状体的透明, 延缓白 内障的发生发展过程中起重要作用。如果 SOD含量减少,晶状 体内一些小分子可溶性�蛋白在堆积的超氧化物作用下,其巯 基发生氧化, 继而引起分子间以二硫键方式聚合[4] , 使晶状体 蛋白发生混浊。而 MDA是脂质过氧化的中间产物, 可与晶状 体蛋白的氨基及磷脂中某些基因发生相互交联作用, 导致晶状 体光散作用增加, 产生混浊。因此, 提高机体抗氧化物质 (如 SOD、GSH�Px)的含量,降低过氧化产物如 MDA 的水平, 可以延 缓和预防白内障的发生。 北沙参为伞形科植物珊瑚菜( Glehnia littoralis Fr. Schmidt ex Miquel. )的干燥根% 具有养阴润肺, 益胃生津的功效, 主治肺热 燥咳, 虚劳久咳等证, 并常应用在抗衰老和癌症化疗后恢复体 质的中药方剂中& [ 5] , 现代化学及药理研究表明北沙参的主要 有效成分香豆素类(尿内酯类)具有明显的抗氧化活性[6]。袁 旭等[7]研究滨蒿内酯平喘机制之一,即是它可以通过清除氧自 由基来控制炎症的迁移和加重。Kaneko 等[8]通过试验证明七 叶内酯可保护细胞不受亚麻酸氧化物引起的细胞毒性作用。 香豆素分子结构中所含的酚羟基是其具有抗氧化活性的主要 成分。紫丹参为唇形科植物云南鼠尾( Salvia yunnanensis C. H. 24 河北医药 2009 年 1 月 第 31 卷 第 1 期 � Hebei Medical Journal, 2009, Vol 31 Jan, No. 1 图 1 � 正常对照组肝细胞核 ∋ 3 500 图 2 � 正常对照组肝细胞器 ∋ 20 000 图 3 � 衰老模型组肝细胞核染色 质边集呈新月形 ∋ 3500 图 4 � 衰老模型组线粒体嵴大部分消 失、粗面内质网脱颗粒 ∋ 20 000 图 5 � 中药治疗组核膜稍 不整形 ∋ 4 000 图 6 � 中药治疗组线粒体、粗 面内质网无明显变化 ∋ 20 000 Wright)的干燥根及根茎,功效为祛痰生新、活血调经、清心除烦。 它的主要有效成分为总丹参酮类及总酚酸类。总丹参酮类可与 脂质中碳中心自由基( R�)复合成稳定自由基 ( AH�R� ) , 从而抑 制或阻止脂质的氧化[ 9]。何首乌为蓼科植物何首乌 ( Polygonum multiflorum Thunb)的块根, 因炮制方法不同, 有生首乌与制首乌 之分。制首乌是取何首乌干燥块根,按照蒸法, 清蒸至内外均呈 棕褐色,再切片干燥而成, 是乌须发、悦颜色、补肝肾、养精血、抗 衰老的良药。其主要成分为蒽醌衍生物、二苯乙烯苷类、磷脂类 及Cu,Mn 及Na等元素。它能保护SOD, 抑制脑中单胺氧化酶的 活性,调节免疫系统的功能。有实验结果表明, 制首乌可明显降 低老年小鼠血中 SOD、CAT、GSH�Px含量, 降低脑匀浆、肝匀浆中 脂质过氧化物( LPO)水平, 从而消除自由基对机体的损伤[10]。 可见以上三味中药均有明显的清除自由基、抗氧化、抗脂质 过氧化损伤的作用。本实验将它们用于治疗年龄相关性白内障 中,观察到晶状体里 SOD、GSH�Px 2 种抗氧化物质活性明显升 高,而脂质过氧化产物 MDA 含量明显降低, 说明这三味中药对 于年龄相关性白内障具有良好的预防作用。从中医观点来看, 年龄相关性白内障与年老体衰、肝肾功能不足有关[11]。% 肝开 窍于目&、%肝病则目未能辨五色矣&。本实验通过对肝细胞超微 结构的观察表明: 此三味中药能明显改善衰老大鼠肝细胞的超 微结构, 使其恢复或接近正常状态。 总之, 本实验分别从滋补肝脏、抗氧化损伤两方面对年龄相 关性白内障进行辨证论治。本方三味药, 分别入心、肝、肾及肺、 胃经。具有补肾、健脾(胃)、强心之功效。肾为先天之本 ,脾为 后天之本, 心为君主之官。本方寒温并用,益阴升阳, 甘苦兼施。 可以活血通脉, 益脾胃而生津,补肾填精。从而达到祛病、抗衰、 明目、延年之目的。 参考文献 1� 胡建幸. 自由基与白内障的关系研究进展. 国外医学眼科学分册, 2003, 27: 45�49. 2� 赵宏岩.中草药治疗老年性初发期白内障的临床研究. 中国中医药, 2005, 5: 26�28. 3� 芦斌,高继美,刘俊茹,等.白内障超声乳化人工晶状体植入术联合小 梁切除效果观察.河北医药, 2007, 29: 571�572. 4� 赵伟康,徐品初,金国琴,等. 941方对衰老大鼠晶状体浊度、自由基代 谢及醛糖还原酶活力的影响.中药药理与临床, 1997, 13: 35�37. 5� 江苏新医学院主编. 中药大辞典. 第 1 版.上海: 上海人民出版社, 1977. 380, 1683. 6� 林吉吉,赵来,原忠.北沙参的化学成分及药理作用研究进展.中国中医 药信息杂志, 2007, 14: 91�93. 7� 袁旭,李智,刘洪瑞,等.滨蒿内酯对哮喘豚鼠气道炎症的抑制及其清 除氧自由基作用.中国医科大学学报, 2002, 31: 404�406. 8� Kaneko T, Baba N, Matsuo M . 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