腺苷钴胺的光解研究

{ 中 国 药 科 大 学 学 撤 Journal of China Pharmaceutical University ]997，28 腺 苷 钴 胺 的 光 解 研 究 封淑华 李力更， 王丽萍 尺 _7· z (河北省药品捡验所，石家庄0500Ij； 河北医科大学药学院，石家庄05∞17 尺 君尹 7．2 ／ 摘 要 甩HPLC和uV方法研究了腺苷钻胺在不同物理状态和不同pH溶剂中受不同光强度 照射后的光解情况，结果表明在相同光强下本品固体状态较液体状态稳定得多，在酸性鹱冲漉中 (pH 2．0)降解较中性埋冲液(口H 7．0)、水(pH 5．5)慢 ，在相同物理状态下光强度越大则光解速度越 快，提示本品原料应避光保存，而溶液由于降解较快，应避光操作井尽快测定。 关键词 ；兰竺 # 缉13- 壁 笤 晰 腺苷钴胺是维生紊 B- 在体内的活性形 式 ]，其结构的区别在于腺苷钴胺是以 5'-脱 氧腺苷基取代维生索 B- 分子中的氰基．而且 是以 5 一脱氧核糖中的--CH：直接与 co原子 相连．形成有机金属键，即 co—c键，由于烷 基的强烈斥电子作用使co—c键减弱．所以 腺苷钴胺性质不稳定．对光敏感．曝光后降解 生成 vit B。 和 5一、8脱氧腺苷．进一步反应生 成羟钴胺索 ．反应式(简写)如下 囱 蜜 Co~ mk％ V J~min 日 Hyd~ lalldn 本文用 HPLC和 UV方法分别研究了腺 苷钴胺在不同物理状态和不同pH溶剂中受 不同光强度照射后的光解情况。 l 仪器与试药 SP，8800高效液相色谱仪(美国 sP公 司)，SP，200检测器．CR一3A积分仪．YWG— C． 柱；UV，365紫外分光光度计(日本岛津)． 腺苷钴胺由华北射药厂提供；乙腈、磷酸为优 级纯。其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2．1 HPLC分析方法 将本品加水制成每 l ml中含1．0 mg的 收幡日期 1996 10 O3 供试品溶液，照文献 有关物质项下试验． C- 柱，乙腈一0，05 mol／L磷酸二氢钾 (17： 83)并用磷酸调pH至 3，2为流动相． 为 260 nm．液相色谱图见图 1．图中t-4．872 min峰 为腺苷钴胺峰．其余为降解物峰，说明在该色 谱条件下腺苷钴胺与降解物可得到很好的分 离。本品在 1000～10．g／ml范围内呈良好的 线性关系，回归方程为 一32522X+207268 一 0．9995)，式 中 y为峰 面积． 为浓度 ( ／ )。 2．1．1 固体状态 下的 光解 取本 品约 25 mg．平铺于小称量瓶中，分别置避光、室内弱 光(照度 5O～60 Lx。室内仅 40W 日光灯距样 品 2 m照射)、室内强光(照度 3000～4000 Lx．避免阳光直射．为文献 规定的光强)下 放置 0．1，2，4．6 h，照“2．1 项下。从“将本 品加水⋯”起操作．计算剩余含量( )．结果 见表 1。 Tab 1． The photo]ysis of o口hlmami un ~oJid gq 2．1．2 液体状态下的光解 取本品加水制 成每 1 ml中含 1．0 mg的供试品溶液，分别 维普资讯 http://www.cqvip.com l84 中 国 药 科 大 学 学 报 28卷 置于“2．1．1 项下所述的光强下照射，井从 “放置0，1，2⋯ 起操作，计算剩余含量( )， 结果见表 2。 1． Tab 2 r The砷 of~almlmlde哪der1 uⅪ stale 2．2 uV分析方法 2．2．1 pH对雎苷钻胺光解的影响 腺苷钴 胺水溶液在pH大于 3．5时为红色，小于 3．5 时为黄色，据认为这是由于 5．6一二甲苯骈咪 唑基从co原子上解离的结果 ]，为此配制 了一系列 pH分别为 1．O，2．0，3．0，4．0、水 (pH 5．5)、pH 7．0的腺苷钴胺水溶液(浓度 为 50岵／m1)'分别置于。2．1．1 项下所述的 光强下照射，在 0，1，2，3 h测定，结果在光解 前后，pH为1．0、2．0溶液的颜色和吸收光谱 的变化完全一致．但不同于 pH大于 3．5的 三个溶液，pH 4．0、水、pH7．0的溶液的颜色 和吸收光谱的变化完全一致(参见图 2、图 3)．而pH为 3．0的溶液光解前为黄色，吸收 光谱与pil1．0、pH2．0的溶液很相近，但光解 后溶液颜色和吸收光谱转变为与 pH大干 3．5的三个溶液一致。 g 2·UV sp睇口um of cobamlm／de ln~=uffel(pH 7．0)and (口H 5．5)Ul~,el,蜘ntl‘Jl曲l (--)O h一(⋯)1 h，(一--Z)h，(一 ·一)3 h F 3．UV s~c,[ru~／1 of cobamlmide In buffer(DH2．0)under 柏Hu li|hl (一 )O h．t⋯ )l h．(一一2)h．(一 ·一 )3 b 2—2．2 在二种缓冲液中的光解 根据腺苷 钴胺水溶液在pH大于和小于 3．5对吸收光 维普资讯 http://www.cqvip.com 2期 封赦华等：腺昔钻胺的光解研究 185 谱不同，文献 采用差示分光光度法测定本 品的含量。并且该方法收载于中国药典1995 年版。照文献[”分别配制本品的二种缓冲液 和水溶液，分别置“2．1．1”项下所述的光强 下，在 0，1，2，3 h分别测定。绘制吸收光谱 ， 结果见图2、图3。 0． O． 2．2．3 盖示吸收光谱的变化 照文献[ 以 本品的pH7．0缓冲液溶液为空白，以pH2·0 缓冲液溶液为测定液，置于“2．1．1”项下所述 的光强下，在 0，1，2，3 h分别测定，绘制差示 吸收光谱，结果见图4。 F 4．The dlfferenticld ∞trm of cobamamide under two Jdnds of light intelUSit~ t-)welk li~mt‘tb)stlron<~f．t (一 )0 h．(⋯ )1 h—t一一 2)h，t一 ·一)3 h 3 讨 论 1)从表 1、表 2可以看到本品在相同光 强下固态较液态相对稳定的多}在相同物理 状态下．光解速度随光强度增加而加快，尤其 是液体 ，强光照射 1 b即降解完全，而弱光照 射下光解反应为一级反应(r；一0．998)，f·n 为21 h。 2)腺苷钴胺水溶液在pH为3．5时存在 5，6-二甲苯骈眯唑基从 cD原子上解离的平 衡过程，pH小于 3．5与pH大于 3．5的溶液 颜色和吸收光谱不同，但 pH小于3．5的 pH 1．0、pH 2．0溶液则吸收光谱相同。光解情况 相同，pH大于 3．5的pH4．0、水(pH 5．5)、pH 7．0溶液吸收光谱相同，光解情况相同，而 pH为 3．0的溶液由于 pH值处于解离平衡的 边缘．光解后较 pH 1．0、pH 2．0溶液更易转 ， 化，吸收光谱与 pH大于 3．5的溶液吸收光 谱一致。 3)图2、图3说明在强光下本品在不同 pH缓冲液中光解程度不一致，在 pH 7．0缓 冲液中由于强光照射其吸收图谱迅速发生变 化，1 b即在3．51 nm出现强吸收峰(此峰为羟 钴胺索的特征吸收峰)，并且直到 3 h此峰不 再变化，说明光解反应在1 h即完全，本品水 溶液(pH 5．5)的吸收光谱同 pH 7．0缓冲液 的变化一致(这与HPLC方法研究本品水溶 液强光下光解的结果一致，即 1 h降解完 全)，也说明缓冲液中离子对对光解反应无影 响；而 pH2．0缓冲液溶液曝光后，在 261 nlTI 的吸收度逐渐降低，305 nrl'l处的吸收峰消 失，形成最小吸收，并不断下降．到 3 b降到 与 pH 7．0溶液的吸收一致；在 3．51 nm出现 的吸收峰不断增强，3 h增强到与pH 7．0溶 维普资讯 http://www.cqvip.com l86 中 国 药 科 大 学 学 报 28卷 液的吸收一致。另以pH为 2．0的盐酸溶液、 磷酸盐缓冲液代替上述 pH2．0的氯化钾缓 冲液同法操作，光解情况相同，说明缓冲液中 离子对对光解反应无影响。在上述曝光条件 下。pH 7．0溶液和水溶液无明显的颜色变 化，为红色溶液，而 pH2．0溶液 由原来的黄 色，曝光 1 h变为橙红色。2 h变为红略带橙 色，3 h变为与 pH 7．0溶液相同的颜色—一 红色溶液．但溶液的 pH值仍为2．0。在弱光 下本品在三种溶剂中的光解速度均较强光下 减慢，在避光下本品在三种溶剂中相对稳定， 吸收光谱几无变化。 4)由于本品在pH 7．0和pH 2．0缓冲液 中吸收光谱变化情况不同，其差示吸收光谱 也发生明显的变化，在强光下差示吸收光谱 发生急尉的变化，在弱光下差示吸收光谱在 25O～340 13111波长范国内变化较小，其中在 含量测定波长 304．55：0．5 nm处 AA增加了 约 4 ，差示峰红移了约 l nm，因此为保证含 量测定的准确性，溶液应在避光条件下尽快 完成测定。 参 考 文 献 i Metzlcr DE．Ⅸd 咖 一 ％ ]3~mg C'NLv,Academic Press，1877．502～ 504 2 F~orey K．^ 枷 帅 S=~,mces,Academic press，Vo1．10．2{8～ 255 3 中华人民共和国药典委员会编 ．中华^民岳和目药鼻： 二都．1995．1029 4 卫生部新药(西药)临卓甘研究指导原 惦．1993．30 5 The M~c,t 妇． I版．1989．382 6 束代舜，封数华．差示分光光度法捌定隙苷辅毫维生素 B 的古量 ．中圜压荷工正杂志．1989，20(5)；213 Study on Photolysis of Cobamamide Fcng Shuhua，Li ILigeng。，W ang Liping He~e／Institute~or D 硅 ，蕊 050011；。Hebei [， ，胧 抽 D5DDj7 Abstract The paper studied the Dhotolysis of cobamamlde under different light intensites．The result showed that the soIid state of Cobarnamide wss more stable than the Hquid state，and the photolysls of cobamamide in acid buffer(pH2．0)was slower than that in neutral buffer and water(pH 5．5)under the same light intensity． In the same physlcal state，the more light intensity，the more Dhotolysis speed．Th e test indicated that the solid state must be protected from li曲t，and the soludon must be mea— sured 8s quickly as possibIe under the conditions protected from I．堰ht． Key words Cobamamide；Photolysis 维普资讯 http://www.cqvip.com