中草药对大肠杆菌体外抑菌试验

中草药对大肠杆菌体外抑菌试验＊ 路振香 时维静 杨用光 （安徽技术师范学院，安徽凤阳，233100） 选用 27 种不同的中草药制剂（煎剂、挥发油、蒸馏液，以平板稀释法和纸片法对一株 肉鸡源的大肠杆菌进行体外抑菌试验。结果表明，有 14 种中药对此株大肠杆菌有不同程度 的抑制作用。试验还表明中药制剂的配方工艺不同，其抑菌的效果亦有不同。 关键词：中药； 大肠杆菌; 抑菌作用 中兽医学有着悠久的历史和丰富的应用经验，在抗生素使用以前，对保障家畜健康起着 重要作用。随着科学技术的不断发展，西药以其方便快捷的优势逐渐在临床应用中占据主导 地位，但由于西药抗生素类的广泛使用，使得病原菌的抗药性日趋增强[1]，中草药作为替代 抗生素解决抗药性和药残的重要，越来越受到重视[2-3]，尤其是近年来肉食品中的抗生 素残留问题已经被提到了一定的高度，而大肠杆菌又属于多血清型和变异型强的细菌，极易 产生抗药性，笔者用不同种类和浓度的中药制剂分别用平板稀释法和纸片法对大肠杆菌进行 体外抑菌试验，以期筛选出具有临床应用价值的中药制剂，为畜牧业生产服务。 1 材料方法 1.1 材料 1.1. 1 试验菌株 肉鸡源大肠杆菌（安徽技术师范学院动科系预防兽医教研室提供）。 1.1.2 培养基 普通营养琼脂、麦康凯琼脂。按常规方法配制。 1.1.3 单味中药 银花、防风、板兰根、白芷、连翘、杏仁、射干、辛夷、贯众、羌活、荆芥、藿香，每 ml 相当于 1g 生药量。中草药的煎制与蒸馏由安徽技术师范学院中药实验室完成。 1.1.4 复方中药 银射煎液、麻杏射防煎液、羌藿连防煎液、辛芷荆煎液、辛芷荆蒸馏液、银射蒸馏液、 羌藿连防蒸馏液、麻杏射防蒸馏液，每 ml 相当于 1g 生药量。 1.2 方法 1.2.1 大肠杆菌对中药（单味、复方）敏感性的体外试验——平板稀释法[4]。 1.2.1.1 取 1ml 原药液为第一支试管；在第二只试管中分别加入 0.5ml 原药液和 0.5ml 生理 盐水以倍比稀释法稀释至第四支试管；第五支试管为无药对照，每支试管中均含有 1ml 不 同浓度的药液。先把药液倒入无菌的平皿中，然后倒入 60℃左右的无菌的普通营养琼脂或 麦康凯琼脂，并迅速混合均匀，制成平板。然后以无菌的涂布棒蘸取细菌均匀涂布于平板表 面，置 37℃培养箱内培养 24h 后观察结果。 1.2.1.2 在第一支试管加入 8ml 原药液，第二支试管加入 4ml 原药液，第三支试管加入 2ml 原药液，第四支试管加入 1ml 原药液，第五支试管为无药对照，在第二支试管至第五支试 管中分别加入 4ml、6ml、7ml 及 8ml 生理盐水；按照 1.2.1.1 的方法制成平板，涂布细菌后 ＊项目基金：安徽技术师范学院稳定人才基金资助（批准号：YRC200316） 置 37℃的培养箱中培养 24h 后，观察并结果。 1.2.2 大肠杆菌对中药（单味、复方）的敏感性试验—纸片法 [5]把通过前两步筛选出的对大 肠杆菌有明显抑制作用的复方、单味中药制剂分别制成药敏纸片，测定抑菌圈的大小。方法 为：取直径为 0.6cm 的灭菌滤纸片在原药液中浸泡 40min，取出备用。在已制备好的平板中， 无菌操作放置药敏纸片，每种药物贴 6 片，然后将平板置 37℃温箱中培养 24h 后测定抑菌 圈的大小，取其平均值。 ２结果 2.1 平板法抑菌试验结果 当用平板稀释法检测大肠杆菌对中草药（单味、复方）的敏感性时，在低浓度下， 银射煎液、麻杏射防煎液、新防风挥发油羌藿连防煎煮液辛芷荆煎煮液、银花蒸馏液、板兰 根煎煮液及贯众煎煮液都有不同程度的抑菌作用；而连翘水煎液、辛夷煎煮液、射干煎煮液、 羌藿煎煮液、藿香煎煮液、连翘挥发油在高浓度下对大肠杆菌的生长才有明显的抑制作用。 在低浓度下无抑菌作用的中药有：银花挥发油、辛芷荆蒸馏液、银射蒸馏液、羌藿连防蒸馏 液、白芷挥发油、连翘水煎液、杏仁煎煮液。在高浓度下无抑菌作用的有：麻杏射防蒸馏液、 荆芥煎煮液、白芷煎煮液。 2 纸片法测定中草药对大肠杆菌生长的抑制作用 结果见表 1，从表 1 可以看出，单味中草药银花、贯众煎煮液、连翘水煎液、射干煎煮 液、藿香煎煮液均有较强的抑菌作用，而防风挥发油煎煮液、辛夷煎煮液、板兰根煎煮液、 羌活煎煮液的抑菌作用次之。4 种复方辛芷荆煎煮液、羌藿连防煎煮液、麻杏射防煎煮液及 银射煎煮液都具有抑菌作用。 ３小结与讨论 3.1 通过平板稀释法所筛选出的 14 种中草药（单味、复方）对大肠杆菌都具有不同程 度的抑制作用。因此，当用此 14 种中药进行纸片法药敏试验时都有抑菌圈出现，之所以未 对平板稀释法的结果进行详尽阐述是因为其结果不易量化，评定时往往带有主观性，易产生 误差而影响结果的准确性。在此，笔者只把平板稀释法当作定性试验来筛选有抑菌作用的中 草药，而把纸片法当作定量试验来具体判定中草药抑菌作用的大小。 从结果可以看出，单味中药银花蒸馏液、贯众、连翘、射干、藿香对大肠杆菌有明显的 抑制作用，而其它单味中药对大肠杆菌的抑制作用较弱。4 种复方中药对大肠杆菌具有明显 的抑制作用，说明药物配伍适当可提高其抑菌效果。复方比单味中药的抑菌效果好，一方面 与抑菌药物在复方中的比例有关，另一方面，与药物平板上涂布大肠杆菌的数量和方式也有 影响，这与刘玉庆等[4]的观点是一致的。 表 1：中草药对大肠杆菌生长的抑制作用 中药制剂 抑菌圈直径（cm） 平均直径（cm） 抑菌强度 新防风挥发油 0.75 0.75 0.70 0.70 0.80 0.80 0.75 + 银花蒸馏液 0.90 0.95 0.90 0.90 0.90 0.90 0.91 ++ 板兰根煎煮液 0.80 0.80 0.80 0.80 0.75 0.65 0.77 + 贯众煎煮液 0.85 0.85 0.80 0.80 0.90 0.90 0.85 ++ 连翘水煎液 0.80 0.80 0.80 0.80 0.85 0.90 0.83 ++ 射干煎煮液 0.80 0.80 0.80 0.80 0.80 0.80 0.80 + 辛夷煎煮液 0.70 0.70 0.80 0.85 0.85 0.85 0.79 + 羌活煎煮液 0.70 0.70 0.70 0.80 0.85 0.90 0.78 ++ 藿香煎煮液 0.80 0.80 0.80 0.85 0.85 0.90 0.83 ++ 连翘挥发油 0.90 0.90 1.00 1.00 1.10 0.95 0.96 ++ 辛芷荆煎煮液 0.90 0.90 0.90 0.80 0.95 0.95 0.90 + 羌藿连防煎液 0.80 0.80 0.80 0.80 0.80 0.80 0.80 ++ 麻杏射防煎液 0.70 0.80 0.85 0.85 0.85 0.85 0.82 ++ 银射煎煮液 0.80 0.80 0.80 0.80 0.85 0.90 0.82 ++ 注[5]：凡抑菌圈直径大于 1.0cm 者为强抑菌，用+++表示；凡抑菌圈直径为 0.8-1.0cm 者为抑菌， 用++表示；凡抑菌圈直径小于 0.8cm 者为弱抑菌，用+表示。 3.2 中草药的抑菌浓度是抗生素的 1000 倍级，这在中草药目前的炮制和使用情况下难以 达到如此高的体内浓度，单味中草药难以替代抗生素，应在中草药和抗生素联合使用上进行 研究，以减少耐药性和抗生素残留[4]。 3.3 本次试验所用的中药成分有的为挥发油类，故在制成纸片或倒成平板时药物成分会 挥发掉一部分，导致其浓度有所降低，加之药敏试纸为本实验室自己制作，由于工艺问题， 薄厚可能会不太均匀，对试验结果可能会造成一定的影响，加大误差。在试验过程中，笔者 虽努力避免上述种种不利因素的影响，提高试验的准确性，但不确定因素总是存在的。同时， 本次试验所用的药品较少，细菌种类单一，本次试验所得结果仅供同行参考。 参考文献 1. 朱力军.动物大肠杆菌耐药性的变化趋势[J].中国兽医杂志，2001，35（2）：16-18. 2. 杨富业.复方黄连口服液防制鸡大肠杆菌病的研究[J].河南畜牧兽医，1999（11）：10-11. 3. 潘树桥.复方中药制剂的制备及对肉用仔鸡大肠杆菌病的防治效果[J].中国兽医科技，2002 （2）：37-38. 4. 刘玉庆，李晔，车程川，等.大肠杆菌病对中药敏感性试验及其方法研究[J].中兽医医药杂 志，2003（1）：3-5. 5. 郁建生，杨冰.20 种中草药抑菌试验初报[J].中兽医学杂志，1995（1）：2-4. The Inhibition of Traditional Chinese drugs to E.Coli in vitro Lu Zhenxiang，Shiweijing， Yang Yongguang (Anhui Technical Teachers College, Anhui FengYang,233100) Susceptivity of E.coli to 27traditional Chinese drugs was investigated with plate method. The result showed that 14 traditional Chinese drugs have different inhibition effect on E.coli.The result also showed different process and combination make a difference and different Chinese medicines could be used in singles or combined to treat colibacillosis.traditional Chinese drugs and medicines showed different sensitivity to E.coli. Key words: Traditional； Chinese drugs； E.coli