多点校准曲线法测定血清免疫球蛋白的应用体会

f 一 挺 j 上海医学检验杂志 1997年第 12卷第 1期 谚 ， ： 比‘＼ 多点校准曲线法测定血清免疫球蛋白的应用体会 嘉兴市第二医院检验科(3l4。o0)燮 朱国利 ． 。 2 免疫球蛋白(1g)定量检测传坑使用单向免疫扩 E／L 散法 ，但费时费力，影响固索甚多 ] 自优质的免疫 球蛋 白抗血请问世以来 ，免疫透射比浊法 的应用得 到逐渐普及 我们自1993年起应用上海北海精细化 学研究所生产的试剂 ，采用多点校准曲线法测定血 清免疫球蛋白，取得满意效果。 材 料 和 方 法 一 、 试剂 垒藏体 kG、A、M 测定试剂盒(批 号 951i01)上海北海精细化学试剂研究所产品，内 含 ；IgG、A、M抗体藏各一瓶，kG、A、M参考液各一 瓶，定值；IgG一11．o g／L，IgA一2．0 g／L．IgM 一 1 22 g／L． 二 、方法 1．标本测定 取 1t 11稀释血清，按 IgG 5 ， kA 20 ， M 40 加入各 自试管内，分别加入相 应抗血清 500 ，置 g7℃水浴 20 mln后在德国Be er公司RA一50生化分析仪上测定。 2．曲线 将 IgG、A、M参考液用生理盐水 分别按 1—2．75，1-5 5，1 l 11，l一22．1—44稀释 成 5种不同浓度，按标本测定条件保温及上机测试， 仪器启动后，自动打印出标准曲线。 结 果 一 、 线性实验 用 5种不同浓度的 IgG、A、M 参考液在常规条件下测试．打印出的标准曲线见图 1．2，3 表 明必须用多点标准曲线。IgG、A、M 的相关 系数分别为{r一0，9 717．r一0．9734，r=O．9285 二、批内精密度 用多点校准曲线法对同一份 血清样品在一天内重复础定 1d次，IgG、A．M 的批 E／L 0．1 0．2 0．3 0 ‘ 0．5 O．6 O-7 O-8 H 1 IgG投 验 E／L IgA—L性宴验 IgM 线性实验 内精密度分别为6．75 ，9 69 和 8．55 三 、方法的相关性实验 随机取 l0份血清样 品，分别用本法和单向免疫扩散法测定其 IgG、A、M 的浓度，结果见附表。统计学处理表明两法差异不显 著 附表 比浊法与扩散法对 lO份血清测定结果 四、参考值 对 53例(男／女，28／28)体检合格 健康成人采用本法测定其血清 G、A、M 浓度，以 士i．96 s为参考值范围，结果如下 维普资讯 http://www.cqvip.com ·2O- IgG i：11．76 s=2．09范围 7．66~15．86 g／L IgA：i=1 86 s=0 59范围 0 74～2．98 g／L IgM{ =1．39 0 48范日 0．45～2．33 g／L 讨 论 免疫透射比浊法是测定抗原抗体复合物形成的 浊度，园血清中的大分子物质都具有光散射 ]，而且 高脂血及取样量过大均可引起干扰，固而在实际测 定中必须用稀释剂设立样品空白， 消除非特异性 干扰。 应用多点校准曲线法可及时发现试验中存在的 方法设计，可测范围及抗血清质量等诸多问。困免 疫透射比浊法标准曲线一般不通过原点，有一定的 上海医学俭验杂志 1997年第 lz卷第 l期 截距，围而用单点标准法测定时则结果偏差较大，以 多点校准曲线法为佳． 免疫透射比浊法应注意反应体系中不可有抗原 过剩现象0]，即抗血清量应足够 ，测定结果应在标准 曲线范围以内．我们几年应用本法效果满意． 参 考 文 献 r1]林其矬等 临床化学诊断方击太垒 北京大学出版 社 199o年 第一版 620—929 [2]李培荚等 临床俭验杂志 199,5．13(3)156—1,57 [3]于刺凌等 上海医学检验杂志 199,5．10(1)21 (收稿：96—1o一9 修回r 96一l1—15) 草酸铵改良法血小板计数的评价 天津市大港医院检验科(300270) 韩 青 张芳奎 血小板计数草酸铵改良法的试剂中 EDTA—Nat 浓度各异 本试验将EDTA-Na 浓度改为1．084 g／ L，并加 2 ml／L氯仿防腐，克服了许妆和氏法对少 数红细胞不能溶解、试剂不易保存的缺点，又克服了 加 lm]／L甲醛防腐娆部分血小板聚集，影响计数结 果的缺点 一 、 捡测对象 患者 153倒，其中血小板正常 患者 1 28例 ，血小板减少患者 25例，包括肝炎 8例， 肝硬化 3例，血小扳减少性綮癜4例，再障2例，癌 症化疗 8例，健康^对照50名。 二、试剂和方法 l 草酸铵新改良液 草酸铵 l 0 g、EDTA—Na。 0．108 g，加蒸馏水溶解后 ，加入 0 2 m】氧仿，再加 蒸馏水涪至 10O ml。轻轻振荡促娆氯仿溶解，(氧仿 的溶解度是 20"C水温时 8．2 m]／L水)。避光保存． 待 2～3天氧仿溶解后，加入 4 g／L的结晶紫 乙醇溶 藏 20 。用定性滤纸过滤后室温避光保存。 2．许妆和渣 按原配方配制。 3．检测方法 采末梢血 20 ul，立 即加入 含 0．38ml的改良法或许氏法稀释液中，迅速混匀。待 2～5min溶血后，混匀，滴入计算盘内。室温静置 10 mln，在高倍镜下计数。 三、结果 L 两种血小板计数方法对病人样本测定的比 较结果见表 l。两者具有良好的相关性。 2．放置时间对结果的影响 用改良法检测了 20例末梢第一清血 ，室温溶血后 l0、60、120 mia卦 别计数血小板进行比较(见表 2)，结果无显著差异， 但许氏法掊血后 60 m[n计数略有减少，120 min计 数有部分可减少多选 30×10’／L，或园形态改变无 法准确计数。 表 1 两种方法对病人样本测定结果比较表 表 2 改良法溶血后不同时闻计数比较 时问 范围(×l0 几)1±s(×l0。几) t P 四、讨论 1．试剂中含 EDTA—Na：与血浆中 ca 螯台，形成稳定的络台物，可抗凝血叉可防止血 小板聚集。2．试剂中加氧仿防腐叉可娆血小板不发 生聚集，叉能在试剂中均匀分散，有助于血小板准确 计数。3．试验了 6种 EDTA—Na 浓度(从 0 434～ 1．807 g／L)配制试剂 ，最后选择了 1．084 g／L。用本 改良法的稀释试剂与血液混匀后，红细胞完全溶解， 稀释后虽放置较长时问，血小板计数稳定，形态正 常 。 (收稽1 96—6—14 修回，96—1o一18) 维普资讯 http://www.cqvip.com