云南国家级医学论文快速发表 浅谈多囊卵巢综合征引发的不孕症的临床治疗

浅谈多囊卵巢综合征引发的不孕症的临床治疗 本文摘自：原上草职称论文网 网址：http://www.yscbook.com/yixue/lcyx/201205/529861.html 【摘要】多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是以双侧卵巢呈多囊性改变伴不孕、多毛、痤疮，月经紊乱的一组症候群。临床特点是高雄激素血症和不排卵。其病因不明。目前认为PCOS是以胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)为特征的内分泌代谢疾患，继发于胰岛素抵抗的高胰岛素血症对造成高雄激素征象起着重要作用[1]。本文针对多囊卵巢综合征引发的不孕症的临床治疗谈一些看法。 【关键词】 多囊卵巢综合征;胰岛素抵抗;胰岛素受体底物I相关的PI3K活性 多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是以双侧卵巢呈多囊性改变伴不孕、多毛、痤疮，月经紊乱的一组症候群。临床特点是高雄激素血症和不排卵。其病因不明。目前认为PCOS是以胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)为特征的内分泌代谢疾患，继发于胰岛素抵抗的高胰岛素血症对造成高雄激素征象起着重要作用[1]。本文通过对PCOS患者和对照者根据体质量指数(BMI)分为PCOS肥胖组、PCOS非肥胖组、 肥胖对照组和非肥胖对照组，各12例，采用免疫沉淀、薄层层析、放射自显影半定量检测脂肪组织IRS-1相关的PI3K活性。目的是探讨多囊卵巢综合征(PCOS)脂肪组织胰岛素受体底物I相关的磷脂酰肌醇3激酶(IRS-1-Associcrted-PI3K)的活性在PCOS发病中的作用。结果发现脂肪组织中IRS-1- Associated PI3K 活性在PCOS肥胖组为55% ± 24%，较非肥胖对照组84% ± 16%明显降低(P < 0.001);肥胖对照组为46% ± 22%，PCOS非肥胖组为71% ± 26%，均较非肥胖对照组明显降低(P < 0.001和P < 0.05)， PCOS肥胖组和肥胖对照组之 间以及PCOS肥胖组和PCOS非肥胖组之间的差异均无显著性意义(P > 0.05)。 PCOS肥胖组和PCOS非肥胖组脂肪组织IRS-1相关的PI3K活性均较非肥胖对照组明显减弱，可能抑制胰岛素受体后的信号传导，并与PCOS胰岛素抵抗的发生有关。目前PCOS发生IR的机制尚不明了，为探讨PCOS IR的发病机制，我们对PCOS患者脂肪组织胰岛素受体底物I相关的磷脂酰肌醇3激酶(insulin receptor Substrate I-associated phosphatidylinositol 3-kinase，IRS-1-Associated PI3K)的活性进行了研究，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 研究对象 　　收集我院和深圳宝安区人民医院妇科病房从2005年1月至2007年1月临床确诊为PCOS患者24例，临床症状及内分泌检查均符合PCOS诊断[1]，术后病理检查证实为多囊卵巢。24例PCOS患者据体质量指数[体质量/身高2(kg/m2)]分为肥胖组(体质量指数≥24 kg/m2)和非肥胖组(体质量指数< 24 kg/m2)各12例;另随机收集妇科病房诊为卵巢囊肿或输卵管阻塞行开腹手术的肥胖和非肥胖妇女各12例。上述各组均无其它急慢性疾病。术中开腹时切取皮下脂肪组织适量，迅速置液氮中冻存。 　　1.2 方法 　　1.2.1 脂肪组织蛋白质的提取 称取脂肪组织适量，即浸入冰冷细胞裂解液中(每克组织约需1 mL)，4 ℃组织匀浆，1 000 × g低温离心10 min，去除脂肪层后加入1.0 mg/mL PMSF贮存液(每克组织约需30 uL)，冰浴30 min，转入离心管内13 000 × g低温离心15 min，收集上清即为脂肪组织蛋白质抽提液。DNA/蛋白质分析仪测定蛋白质浓度，分装后置-20 ℃冰箱冻存[2]。 　　1.2.2 脂肪组织IRS-1相关的PI3K的活性 采用免疫沉淀、薄层层析和放射自显影法检测PI3K的活性。取各样本蛋白质1 mg，加入抗IRS-1多克隆抗体4 ug，4 ℃孵育过夜，加入40 uL蛋白 A-Sepharose 4 ℃孵育2 h，4 ℃ 9 000 × g离心1 min，含1% Nonidet P-40 的冰冷PBS Tris(pH7.4)洗涤3次;含500 mmol/L LiCl 的100 mmol/L Tris-HCl(pH7.6)洗涤2次;溶液A[10 mmol/L Tris-HCl(pH7.4)，100 mmol/L NaCl，1 mmol/L EDTA]洗涤1次;溶液B[20 nmol/L Tris(pH7.4)溶液含100 mmol/L NaCl，10 mmol/L MgCl2，0.5 mmol/L ethyleneglycol-bis-(?茁-aminoethyl ether)-N， N， N′，N′-tetraacetic acid， 120 umol/L adenosine]洗涤1次。 　　所得免疫沉淀物加入40 uL溶液B重悬后，与5 uL溶液C(2 ug/uL phosphatidylinositol 和phosphatidylserine， 20 nmol/L HEPES， 1 mmol/L EDTA，pH7.4)30 ℃孵育10 min。PI3K反应通过加入5 uL 280 umol ATP (含555 kBq [γ-32P]ATP)开始。30 ℃下不断摇动10 min后用200 uL浓度为1 mol/L的HCl终止反应。加160 uL氯仿与甲醇(1∶1)混合物，充分混匀以抽提 phosphatidylinositol 3- phosphate (PI3P)。13 000 × g 离心5 min，弃上层水相，将下层有机相移入另一EP管中待测。室温下冻干。加5 uL氯仿与甲醇(1∶1)混合物重溶解提取物，点样在薄层硅胶板上，在展层液中展层分离。对展层后的薄层硅胶板进行磷屏扫描测定32P的放射活性，结果用OptiQuant 3.0分析。 　　1.3 统计学处理 　　应用方差分析和q检验进行统计学处理。 　　2 结果 　　2.1 各组的临床资料 　　PCOS两组分别与其体质量相匹配的对照组相比， 年龄(t肥=1.70， P > 0.05;t非肥=1.62， P > 0.05)和BMI(t肥=1.64， P > 0.05;t非肥=1.58， P > 0.05)均无统计学差异。 　　2.2 各组脂肪组织IRS-1相关的PI3K活性磷屏扫描图像分析 　　PCOS两组和肥胖对照组脂肪组织IRS-1相关的PI3K活性均较非肥胖对照组明显降低(F =3.53，P < 0.05)，且以肥胖对照组降低更为明显， PCOS肥胖组和肥胖对照组之间以及PCOS两组之间的差异均无显著性意义(图1，1)。 　　3 讨论 　　PCOS患者发生IR的机理尚不明了，可能与胰岛素受体后的信号传导障碍有关，但机制不清，还需要进一步深入探讨。我们既往的研究提示PCOS脂肪组织IRS-1酪氨酸磷酸化作用较非肥胖对照组明显减弱，可能抑制INS受体后的原上草论文网www.yscbook.com/yixue/整理信号传导，并与PCOS IR的发生有关。 　　PI3K是调节细胞摄取葡萄糖的重要物质，PI3K活性降低后，脂肪细胞摄取葡萄糖量下降，葡萄糖转运体由胞浆到胞膜的转移减少。PI3K的活性与基础状态骨骼肌细胞浆和胞膜上的葡萄糖转运体数量密切相关。PI3K对胰岛素刺激的细胞摄取氨基酸过程也有一定的调节作用。PI3K的活性与IRS-1的磷酸化程度呈正相关。但当PI3K的活性达到一定程度时，进一步磷酸化IRS-1并不能增加PI3K的活性。我们此次的研究表明，PCOS两组和肥胖对照组脂肪组织IRS-1相关的PI3K活性均较非肥胖对照组明显降低，且以肥胖对照组降低更为明显，PCOS肥胖组和肥胖对照组之间以及PCOS两组之间的差异均无显著性意义。提示PCOS患者发生IR的机理可能与胰岛素受体后的信号传导障碍有关。 　　【参考文献】 　　[1]Dunaif A. Insulin resistance in women with polycystic ovary syndrome[J]. Fertil Steril，2006，86(Suppl 1)：S13-14. 　　[2]del Aguila LF， Claffey KP， Kirwan JP. TNF-alpha impairs insulin signaling and insulin stimulation of glucose uptake in C2C12 muscle cells [J]. Am J Physiol， 1999，276(5 Pt 1)：E849-855. 　　[3]王竹晨， 顾熊飞， 杨冬梓， 等. 脂肪组织中胰岛素受体底物I的蛋白表达及其酪氨酸磷酸化在多囊卵巢综合征发病中的作用[J].中华妇产科杂志，2005，40(2)：120-123. 　 原上草职称论文网 国家级医学论文快速发表 联系QQ：597400683 电话：13880243186