HPLC法快速测定银杏叶中银杏总黄酮醇苷含量

中国医药指南2009年 6月第7卷 第l2期 Guide o~ChinaMedicine，June2009，Vo1．7，No．12 论著 HPLC法快速测定银杏叶中银杏总黄酮醇苷含量 韩立路 孙兴力 龙红萍 周金彩 5 【摘要】目的 建立银杏叶中特征性成分总黄酮醇苷的快速含量分析方法，比较不同的采集地总黄酮醇苷含量差异。方法 采用AlltimaC。。 色谱柱 (5 m，4．6×150mm)；流动相为甲醇-O．4％磷酸 (50：50)；检测波长为360nm；流速为 1．0mL／min；柱温为30。c。结果 Q在 O．06,-4)．60 g范围内线性关系良好 (r=0．9998)；K在O．06-4)．06 g范围内线性关系良好 (r=O．9998)；I在0．04--0．40 g范围内线性关系 良好 (，=O．9999)。平均加样回收率为97．6％ (n=6)，RSD为1．22％，银杏总黄酮醇苷的含量为0．4857％-4)．8869％ 。结论 不同产地银杏 叶中总黄酮醇苷含量差异较大，该方法准确、简便，重现性好，为银杏叶质量评价提供简便快捷的方法。 【关键词】银杏叶；银杏总黄酮醇苷；含量测定；高效液相色谱法 中图分类号：R927．2 文献标识码：A 文章编号：1671-8194(2009)12—0005—02 HPLC Rapid Determination of the Total Flavonol Glycoside in Ginkgo Bfloba HANLi—lu ，SUNXing-li,LONG Hong-ping,ZHOUJin—cai (DepartmentofPharmacy,Hunan Yongzhou VocationalTechnicalCollege,Yongzhou42500~Chin IAbstract】Objective To establish the rapid analysis methods of characteristic componen~of flavonol glycoside conten in Ginkgo biloba，comparing the difference content oftotal flavonoid glycosides in Ginkgo biloba collecting from different places．Methods An Alltima C18 column(5ran，4．6×150mm) was used the mobile phase of methanol·O．4％phosphoric acid(50：50)； m 1．0mL／min of flow rate，detecting wavelength was 360rim；and the column temperature was 30"C．Results The linear range of Q was good within the range of 0．06-4)．60 (，=0．9998)；and the of K was good with in the range of 0．06加．O6嵋 (，=O．9998)；and that of 1 was good、vi也in the range of O．04,-0．4O g(，=0．9999)；The average recovery rate was 97．6％ (n=6)，RSD 1．22％， the content oftotal Ginkgo flavonol glycosides Was 0．4857％,-,0．8869％．Conclusion Th e content oftotal flavonol glycoside in Ginkgo biloba collecting from different places is different，the method is accurate，simple and good reproducibility for the quality evaluation of Ginkgo biloba to provide an easy and fast- 廿ackmethod． 【Key wordsJ Ginkgo biloba；Total of Ginkgo flavonol glycosides；Determination；High performance liquid chromatography 银杏叶为银杏科植物银杏 (Ginkgo biloba L)的干燥绿叶。银杏 叶主要含黄酮和内酯类有效成分。有研究结果表明” ，银杏叶有效成 分的含量与不同生长气候和不同季节的树龄紧密相关。为了建立银杏 叶中特征性成分银杏总黄酮醇苷的快速含量分析方法，用高效液相色 谱法，比较不同产地银杏叶中银杏总黄酮醇营的含量分布，从而为银 杏叶的质量控制提供理论依据。 1仪器与材料 1．1仪器 美国Waters Alliance高效液相色谱仪I PDA99b检测器；410示差 检测器；Millipore MILLIQ一2超纯水I制备仪；Resolve C18(8mm X 100mm)径向加压色谱柱。 1．2材料 槲皮素 (Q)、山柰素 (K)、异鼠李素 (I)品由中国药品生 物制品检定所提供。 1．3银杏叶样品 于2007年9月分别采自湖南衡山、广西桂林、湖南永州、贵州正 安2～10年生银杏树上的银杏叶样品。 2方法与结果 2．1色谱条件与系统适用性试验 湖南省教育厅科研 资助项 目 (编号：07D084) 通讯作者：E--maU：yongzh0uhanUlu@1 65．c0m 填充剂：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲 醇-0．4％磷酸 (50：50)；检测波长：360rim，流速：1．0mL／min；柱 温：30"C；理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于2500。 2．2对照品溶液的配制 分别精密称取Q、K、I对照品适量，加甲醇溶解配制成每lmL分 别含0．1、0．08、0．04mg的混合溶液，摇匀，用0．45 m滤膜滤过，取 滤液，作为对照品溶液 2．3样品制备 银杏总黄酮样品制备：样品处理采用酸水解法脚。即取银杏叶 1g，精密称定，加70％甲醇溶液40mL／次，每次称重。回流提取3 次，每次60rain，合并提取液，放冷加70％ 甲醇至3次总重量，过滤。 精密量取续滤液40mL，加浓盐酸8mL，加热回流30min，迅速冷却， 用甲醇定量转 入50mL容量瓶并稀释至刻度，用0．4 m的滤膜过滤， 作为总黄酮醇苷供试品溶液。 2．4方法可行性考察 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 1O L，按上述色谱条 件进样，记录色谱图，对照品、供试品色谱图见图1。由图1可见，Q、 K、I色谱峰分离良好 (R>1．5)。 2．5线性关系 精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10 L，按上述色谱条件分别 湖南省 永州职业技术 学院药学系 (4251 O0) 6 A A 中国医药指南2009午 6月第7卷 第 l2期 GuideofChinaMedicine，June2009，Vo1．7，No．12 B 一 ’’ }， t／min t／min 图1高效液相色谱 A 对照品； B 供试品 进样测定峰面积，以峰面积 (Y)为纵坐标、进样量 (x)(u g)为横 坐标绘制标准曲线，得到对照品3组分的3条直线，其线性范围和相 关系数为Q：O．15 ．45 g，t=0．9998~K：0．12--0．45“g，r=0．9998；I： 0．09--0．40 g，，=O．9999。 2．6精密度和回收率试验 吸取上述对照品溶液，依色谱条件进行分析，重复进样5次，每 次lO u L，测得Q、K、I峰面积RSD分别为1．2％、O．9％、O．7％。称取 加入一定量芦丁的银杏叶样品，按上述方法处理 ，计算芦丁的回收率 为97．6％ (n=6)，RSD为1．22％，表明该方法水解完全。 2．7供试品含量测定” 】 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各l0 L，按上述色谱条件进 样测定，外标法计算含量，分别计算Q、K、I的含量 ，银杏总黄酮醇 昔含量=(Q含量+K含量+I含量)X 2．51，结果见表1。 3讨 论 3．I提取方法选择 在提取方法的考察试验中，分别考察了超声与加热回流提取，提 取2、3、4次，提取30、60、90min。结果表明，回流提取3次，每次 60min可将银杏总黄酮醇苷提取完全。 3．2检测波长和洗脱条件的选择 参照 《中国药典》 (2005版) ，达到较满意分离效果。 表 1 样品测定结果 采集地点 样品个数 银杏总黄酮醇苷平均含量(％)( ) ( ±s) 与其他地 区比较有显著性差异P<0．05 3-3由测定结果可以看出 不同地区问的银杏总黄酮醇苷的含量存在较大的差异，贵州高原 区银杏叶中总黄酮醇昔含量明显高于其他地区，与其他地区比较，银 杏总黄酮醇苷有显著差异 方案

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