急性致痉挛性杀鼠剂中毒事件卫生应急处置技术方案

急性致痉挛性杀鼠剂中毒事件卫生应急处置技术 致痉挛性杀鼠剂主要包括氟乙酰胺、氟乙酸钠、甘氟、毒鼠强、 杀鼠硅（毒鼠硅）。急性致痉挛性杀鼠剂中毒是短期内接触致痉挛性杀 鼠剂后引起的以中枢神经系统损害为主的全身性疾病。 1 概述 致痉挛性杀鼠剂多数为白色粉末或结晶，但不同毒物在水和有机 溶剂中的溶解度差异很大，化学性质大多较为稳定，大部分有造成二 次中毒的危险。致痉挛性杀鼠剂均为高毒或剧毒化学物，对大鼠的经 口LD50大多小于 5mg/kg（附件 1）。 致痉挛性杀鼠剂中毒途径主要为经口摄入，绝大多数为食源性中 毒，如食用致痉挛性杀鼠剂污染的食品和饮用水。 2 中毒事件的调查和处理 2.1 现场处置人员的个体防护 现场调查人员进入杀鼠剂生产、储存现场调查时，应佩戴防颗粒 物口罩，乳胶或化学防护手套和防护眼罩，防护服无特殊要求。进行 食品加工、储存现场调查时，应佩戴乳胶或化学防护手套，防护服无 特殊要求。 现场采样人员采集食品样品时，应佩戴防颗粒物口罩，乳胶或化 学防护手套和防护眼罩，防护服无特殊要求。 医疗救护人员在救护中毒病人时，一般不必穿戴防护装备。 2.2 中毒事件的调查 调查人员到达中毒现场后，应先了解中毒事件的概况，然后进行 中毒事件相关场所、人员等调查工作，并及时向中毒事件指挥部提出 收集并封存所有可疑中毒食品、其他可能导致本次中毒事件物品以及 中毒病人呕吐物、血液、尿液和其他救治病人的医疗废弃物的建议。 1 2.2.1 中毒事件相关场所的调查 生活性中毒事件的调查对象包括中毒事件涉及的食品生产、加工 至食用整个过程的各个场所，调查内容包括食品加工过程（包括使用 的原料和配料、调料、食品容器、使用的工具），食品的分装、储存的 条件等。生产性中毒事件的调查对象主要为生产、储存场所，调查内 容包括生产工艺流程、环境状况、通风措施、防护条件、人员接触情 况等。 2.2.2 中毒事件相关人员的调查 调查对象应包括中毒病人、目击证人以及其他相关人员（如饭店 负责人、厨师、服务员、食品采购员、同工作场所工人等）。调查内容 包括接触时间、接触物质、接触人数、中毒人数、中毒的主要症状、 中毒事件的进展情况、已经采取的紧急措施、饮食的加工方法、食品 的来源等。同时，还应向临床救治单位进一步了解相关资料（如抢救 过程、临床治疗资料、实验室检查结果等）。 2.2.3 现场周围环境和生活习惯的调查 如某一地区反复出现此类事件，则调查内容还应包括现场周围是 否同时有动物大量死亡，动物死前的症状现，现场周围鼠药使用情 况（包括鼠药的种类、投放时间和数量、储存等），居民的生产、生活 习惯（如饮水、饮食等）。 对现场调查的资料作好记录，进行现场拍照、录音等。取证材料 要有被调查人的签字。 2.3 现场中毒样品的快速检测 中毒事件现场采集的可疑中毒食品、水、毒饵、鼠药以及中毒病 人的呕吐物等样品可在现场进行快速定性检测。考虑毒鼠强中毒时， 可使用硫酸-变色酸目视比色法定性测定（附件 2），有条件可使用硫酸 -变色酸分光光度比色法定量测定（附件 3）；考虑氟乙酰胺中毒时，可 2 使用改良奈氏试剂法（附件 4）或异羟肟酸铁反应法（附件 5）测定。 2.4 中毒事件的确认和鉴别 2.4.1 中毒事件的确认标准 同时具有以下三点，可确认为急性致痉挛性杀鼠剂中毒事件： a) 中毒病人有致痉挛性杀鼠剂接触机会； b) 中毒病人短时间内出现以癫痫样大发作等中枢神经系统兴奋 为主的临床表现； c) 血、呕吐物和食物等样品中检出致痉挛性杀鼠剂。 2.4.2 中毒事件的鉴别 应注意与乙型脑炎、流行性脑脊髓膜炎等传染病疫情、群体性癔 病以及其它毒物中毒事件（如霉变甘蔗中毒、有机氯杀虫剂中毒等） 鉴别。 2.5 现场医疗救援 现场医疗救援首要措施是迅速控制中毒病人的抽搐发作，并保持 呼吸道通畅。意识清晰的中毒病人应立即进行催吐，有条件可给予活 性炭（成人用量为 50g，儿童用量为 1g/kg）口服。当出现大批中毒病 人，应首先进行现场检伤分类，优先处理红标病人。 2.5.1 现场检伤分类 a) 红标，具有下列指标之一者： 昏迷；持续抽搐；窒息。 b) 黄标，具有下列指标者： 抽搐。 c) 绿标，具有下列指标者： 出现头痛、头晕、乏力、恶心、呕吐等症状。 d) 黑标，同时具备下列指标者： 意识丧失，瞳孔散大，无自主呼吸，大动脉搏动消失。 3 2.5.2 现场医疗救援 对于红标病人要保持复苏体位，立即建立静脉通道，抽搐发作者， 立即缓慢静脉注射地西泮或咪达唑仑，必要时可联合应用苯巴比妥钠。 黄标病人应密切观察病情变化。出现呼吸节律明显不规律、窒息或严 重缺氧等情况时，及时采取对症支持措施。绿标病人脱离环境后，暂 不予特殊处理，观察病情变化。 2.5.3 病人转送 中毒病人经现场急救处理后，应立即就近转送至有血液净化条件 的医院继续观察和治疗。 3 中毒样品的采集与检测 3.1 采集样品的选择 可能导致中毒的食品、中毒病人的呕吐物、胃内容物和血液是首 选样品。另外，可根据中毒事件的现场调查结果，确定应采集的其它 样品种类。 3.2 样品的采集方法 呕吐物、胃内容物、固体食品和半流质食品使用具塞玻璃瓶或聚 乙烯瓶密闭盛放，采样量 50g～100g；液体样品(血液除外)使用具塞玻 璃瓶或聚乙烯瓶盛放，采样量 300ml～500ml；血液样品使用具塞的抗 凝试管盛放，采血量应大于 10ml。如果测定血浆中的毒鼠强，血液样 品采集后立即用 3000rpm/min 离心，移取上层血浆。 3.3 样品的保存和运输 所有样品采集后最好在 4℃条件下冷藏保存和运输，如无条件冷藏 保存运输，样品应在采集后 24h 内进行实验室检测。所有实验室检测 完毕的样品，应在冷冻条件下保存一周，以准备实验室复核。 3.4 推荐的实验室检测方法 a) 中毒样品的毒鼠强测定可使用气相色谱法定性及定量分析 4 （GA/T 205-1999）。 b) 血浆中毒鼠强可使用液液萃取/气相色谱氮磷检测器法定量测 定（附件 6） c) 食品和生物样品中氟乙酰胺和毒鼠强的同时测定可使用液液 萃取/气相色谱氮磷检测器法定量分析（附件 7）。 4 医院内救治 4.1 病人交接 中毒病人送到医院后，由接收医院的接诊医护人员与转送人员对 中毒病人的相关信息进行交接，并签字确认。 4.2 诊断和诊断分级 救治医生对中毒病人或陪护人员进行病史询问，对中毒病人进行 体格检查和实验室检查，确认中毒病人的诊断，并进行诊断分级。 诊断分级 a) 观察对象 有致痉挛性杀鼠剂接触机会，而无临床症状者。 b) 轻度中毒： 出现头痛、头晕、恶心、呕吐、四肢无力等症状，可有局灶性癫 痫样发作； c) 中度中毒：在轻度中毒基础上，具有下列之一者： i 癫痫样大发作； ii 精神病样症状，如幻觉、妄想等。 d) 重度中毒：在中度中毒基础上，具有下列之一者： i 癫痫持续状态； ii 合并其他脏器功能衰竭。 4.3 治疗 接收医院对所接收的中毒病人确认诊断和进行诊断分级后，根据 5 病情的严重程度将病人送往不同科室进行进一步救治。观察对象进行 至少 24h～48h 医学观察，轻、中度中毒病人住院治疗，重度中毒病人 立即进行监护抢救治疗。 4.3.1 清除体内毒物 a) 催吐：对于意识清晰、经口中毒早期者，可进行催吐。 b) 洗胃：对经口中毒不足 24h 的病人均要进行洗胃。中、重度中 毒的病人洗胃后要保留洗胃管，以备反复灌入活性炭。 c) 活性炭：轻度中毒病人洗胃后给予活性炭 1 次，中、重度中毒 病人可反复使用，使用剂量一般为成人每次30g～50g，儿童每次1g/kg。 d) 血液净化：氟乙酰胺、氟乙酸钠和甘氟中毒一般选用血液透析 治疗，毒鼠强中毒需使用血液灌流进行治疗。中、重度中毒病人在保 证生命体征平稳的情况下，应早期进行血液净化治疗，可多次进行。 4.3.2 镇静止痉 a) 苯巴比妥钠：为基础用药，可与其他镇静止痉药物合用。轻度 中毒，每次 0.1g，每 8h1 次，肌内注射；中、重度中毒，每次 0.1g～ 0.2g，每 6h～8h 时 1 次，肌内注射。儿童每次 2mg/kg。抽搐停止后减 量使用 3～7 天。 b) 地西泮：癫痫大发作和癫痫持续状态的首选药物。成人每次 10mg～20mg，儿童每次 0.3mg/kg～0.5mg/kg，缓慢静脉注射，注射速 度成人不大于 5mg/min，儿童不大于 2 mg/min。必要时可重复静脉注 射。 c) 其他：癫痫持续状态超过 30min，连续两次使用地西泮，抽搐 仍不能得到有效控制，应及时使用静脉麻醉剂。 4.3.3 特效解毒药物 乙酰胺为氟乙酰胺、氟乙酸钠和甘氟中毒的特效解毒剂，需早期、 足量应用。轻、中度中毒病人每次 2.5g～5.0g，肌内注射，每日 2～4 6 7 次，连用 5～7日；重度中毒病人一次可给予 5.0g～10.0g。 4.3.4 其他对症支持治疗 加强营养、合理膳食，注意水、电解质及酸碱平衡，密切监护心、 脑、肝、肾等重要脏器功能，及时给予相应的治疗措施。 5 应急反应的终止 中毒食品和其他可疑毒物已经完全收缴和销毁，中毒相关危险因 素已被有效控制，未出现新的中毒病人且原有病人病情稳定 24h 以上。 毒性 毒物名称 CAS 分子式 物理特性 化学性质 动 物 途 径 LD50 （mg/kg） 人最低致死 剂量 备注 毒鼠强 80-12-6 C4H8N4O2S2 无味的白色晶体或粉末，难溶于甲 醇、乙醇和水，微溶于氯仿和丙酮， 可溶于乙酸乙酯和苯，易溶于二甲 基亚砜。 化学性质非常 稳定，在稀酸 或稀碱中不分 解。 大 鼠 经 口 0.1～0.3 5mg～10mg 可引起二次中毒 氟乙酰胺 640-19-7 C2H4OFN 白色针状结晶，无臭无味，易溶于 水、乙醇、丙酮，微溶于氯仿。空 气中易潮解，熔点 107℃～108℃。 常温下化学性 质较为稳定。 大 鼠 经 口 5.7 5 mg/kg 可造成二次中 毒。 氟乙酸钠 62-74-8 FCH2COONa 白色晶体，略带醋酸气味，极易溶 于水，微溶于丙酮、乙醇。在空气 中易潮解成糖浆状。 常温下化学性 质较为稳定， 但高于 200℃ 可以分解。 大 鼠 经 口 0.1 5 mg/kg 可引起二次中毒 毒鼠硅 29025-67-0 C12H16O3NClSi 白色结晶或粉末，无臭、味苦，难 溶于水，可溶于苯和氯仿等多种有 机溶剂。熔点 230℃～235℃。 遇酸易分解 大 鼠 经 口 1～4 经 口 30 甘氟 80650-71-2 C3H6OF2占 70%～80%， C3H6OFCl占 20%～30% 无色或微黄色透明油状液体，具有 挥发性，略带酸味，能与水、醇、 乙醚混溶。 化学性质稳定 大 鼠 经 皮 66 可引起二次中 毒。 致痉挛性杀鼠剂的理化性质和毒性 8 附件 1: 附件 2 硫酸-变色酸定性测定食品、呕吐物等样品中毒鼠强 1 适用范围 本方法适用于食品、水、毒饵、鼠药、呕吐物等样品中毒鼠强的 定性分析。环境样本和生物样本中毒鼠强的定性测定可作为初步判断 事件性质的重要参考，不能作为确定事件性质的依据。重大突发事件 性质的判定，建议采用其他分析方法加以确证。 2 原理 毒鼠强在强酸条件下加热可分解，其分解产物中的甲醛在酸性条 件下与变色酸发生变色反应，通过颜色变化对毒鼠强进行定性分析。 3 方法重要参数 3.1 检出限：0.5µg/5ml 3.2 干扰：醛类等对其可造成假阳性干扰，酚类可降低其灵敏度。酱 油、醋、有颜色的饮料等液体样品在乙酸乙酯或苯萃取后使用少量活 性炭进行脱色处理，以防止颜色干扰。 3.4 全程测定时间：20min。 4 试剂和仪器 4.1 仪器：酒精灯 1 个（电热杯或控温电炉）、试管若干、500ml 烧 杯 1 个、100ml 烧杯 2 个、漏斗或滴管 1 个、玻璃棒 1个、滤纸若干。 4.2 试剂：乙酸乙酯、60%浓硫酸，变色酸。 毒鼠强标准品可从公安部门获得。 5 操作步骤 9 5.1 样品前处理 由于现场所采集的样品成分复杂，除少数样品，例如市售鼠药或 工业原粉，可直接用本方法检测外，其他样品均需进行样品前处理以 去除杂质干扰，提高灵敏度和降低假阳性率。 5.1.1 鼠药和工业原粉 直接取少量 0.1g～0.5g 进行检测。 5.1.2 固体样品（毒饵、米、面、茶叶、盐、呕吐物等） 取固体样品（颗粒大的固体需先研磨碎）1g～3g 放入烧杯中， 加入乙酸乙酯（苯或丙酮亦可）5ml，玻璃棒充分搅匀，静置 5min， 将上清液用滤纸过滤，重复上述过程一次，合并上清液至一大试管内， 将试管置于沸水浴中，使提取液完全挥发。 注意：不要将已经挥发干的试管长时间置于沸水浴中，否则会影 响回收率，出现假阴性。 5.1.3 液体样品（水、酒、饮料、酱油、醋等） 取液体样品 1ml～3ml 放入大试管中，加入乙酸乙酯 5ml，充分 振荡混匀，静置 5min，用分液漏斗或滴管分离上清液，重复过程一 次，合并上清液至大试管内，将试管置于沸水浴中，使提取液完全挥 发。酱油、醋、有颜色的饮料等液体样品在乙酸乙酯萃取后使用少量 活性炭（聚酰胺粉或硅藻土亦可）进行脱色处理，以防止颜色干扰。 5.2 定性分析 向经前处理后的样品试管中加入 2%变色酸 0.2ml，加 60%硫酸 5.0ml，放置 100℃水浴，反应 5min 观察颜色变化。同时取一干净的 10 空试管进行同样操作作为对照。 6 质量控制 检测时，应同时加做阴性样品及毒鼠强标准品。 7 结果和解释 定性分析 阳性：试管内颜色呈现淡紫色至紫黑色。 阴性：试管内颜色为淡黄色。 11 附件 3 硫酸-变色酸分光光度比色法定量测定食品等样品中毒鼠强 1 适用范围 本方法适用于食品、毒饵、水、呕吐物等样品中毒鼠强浓度的定 量分析。环境样本以及生物样本中毒鼠强的测定可作为初步判断事件 性质的重要参考。重大突发事件性质的判定，建议采用其他分析方法 加以确证。 2 原理 毒鼠强在强酸条件下加热可分解，其分解产物中的甲醛在酸性条 件下与变色酸发生变色反应，比色定量。 3 方法重要参数 3.1 线性范围：（0.5～10）μg/5.0ml。 3.2 精确度（RSD）：≤10%。 3.3 准确度（回收率）：90%～105%。 3.4 检出限：0.5μg/5.0ml。 3.5 干扰：醛类等对其可造成假阳性干扰，酚类可降低其灵敏度。 3.6 全程测定时间：30min。 4 试剂和仪器 4.1.仪器：酒精灯 1 个（电热杯或控温电炉）、分光光度计、试管若 干、500ml 烧杯 1 个、100ml 烧杯 2 个、漏斗或滴管 1 个、玻璃棒 1 个、滤纸若干。 4.2 试剂：乙酸乙酯、60%浓硫酸，变色酸显色剂。 12 毒鼠强标准品从公安部门获得。 5 操作步骤 5.1 样品前处理 由于现场所采集的样品成分复杂，除少数样品，例如市售鼠药或 工业原粉，可直接用本方法检测外，其他样品均需进行样品前处理以 去除杂质干扰，提高灵敏度和降低假阳性率。 5.1.1 鼠药和工业原粉 直接取少量 0.1g～0.5g 进行检测。 5.1.2 固体样品（毒饵、米、面、茶叶、盐、呕吐物等） 取固体样品（颗粒大的固体需先研磨碎）1g～3g 放入烧杯中， 向烧杯中加入乙酸乙酯（苯或丙酮亦可）5ml，玻璃棒充分搅匀，静 置 5min，将上清液用滤纸过滤，重复上述过程一次，合并上清液至 一大试管内，将试管置于沸水浴中，使提取液完全挥发。 注意：不要将已经挥发干的试管长时间置于沸水浴中，否则会影 响回收率，出现假阴性。 5.1.3 液体样品（水、酒、饮料、酱油、醋等） 取液体样品 1ml～3ml 放入大试管中，加入乙酸乙酯 5ml，充分 振荡混匀，静置 5min，用分液漏斗或滴管分离上清液，重复过程一 次，合并上清液至大试管内，将试管置于沸水浴中，使提取液完全挥 发。酱油、醋、有颜色的饮料等液体样品在乙酸乙酯萃取后使用少量 活性炭（聚酰胺粉或硅藻土亦可）进行脱色处理，以防止颜色干扰。 5.2 定量分析 13 5.2.1 绘制标准曲线 吸取相当于 0μg、0.1μg、0.2μg、0.3μg、0.4μg、0.5μg 的标准物加入 2%变色酸 0.2ml，加 60%硫酸 5.0ml，放置 100℃水浴 10min 后以 1cm 比色皿在 573nm 波长处比色。 5.2.2. 样品分析 用测定标准系列的操作条件测定样品溶液和空白对照溶液。样品 吸光度减去空白对照吸光度后，由标准曲线得出毒鼠强含量。 5.2.3 计算 根据取样量 M(g)及样品中毒鼠强含量 C(μg)按下式计算样品含 量。 样品含量(μg/kg)=[C/M]×1000 6 质量控制 检测时，应同时加做阴性样品。 14 附件 4 改良奈氏试剂法定性测定食品、生物样品中氟乙酰胺 1 适用范围 适用于环境样品及部分生物样品(呕吐物和胃液和胃容物)中氟乙 酰胺的定性测定，测定结果可作为初步判断事件性质的重要参考，不 能作为确定事件性质的依据。氟乙酰胺的检测目前无国家标准分析方 法，重大突发事件性质的判定，建议采用其他分析方法加以确证。 2 原理 氟乙酰胺水溶液遇到强碱性的奈氏试剂,逐渐水解出氨,与奈氏 试剂作用,产生黄棕色沉淀。 3 方法重要参数 3.1 检出限：0.5μg。 3.2 干扰：铵盐存在假阳性干扰。 3.3 全程测定时间：20min。 4 器材与试剂 4.1 试剂奈氏试剂:11.5g碘化汞和8g碘化钾溶于少量水中,溶后加水 稀释至50ml,再加入25%氢氧化钠50ml ,静置过夜,取上清液使用,贮 于棕色瓶中。 4.2 阳性对照样品：5ml胃液中加50μg氟乙酰胺。 4.3 阴性对照样品：5ml胃液中加50μg溴鼠隆。 5 测定 5.1 样品处理 15 固体或半固体(胃内容物、呕吐物)样品,可采用有机溶剂直接提 取法。一般常用甲醇或乙醇浸泡,在50℃水浴上温浸1h～2h。如用其 他有机溶剂(乙酸乙酯、氯仿等)时,可在提取容器中充分振摇,然后过 滤,滤液置60℃水浴上蒸发至近干,用适量甲醇溶解残渣(混浊时可过 滤),溶液供检验用;液体样品(饮水、菜汤、饮料),可直接用氯仿等有 机溶剂提取或用透析法处理,也可采用在水浴上蒸去水分后再用甲醇 浸出。 5.2 测定 取处理后的样品水溶液1ml～2ml ,加奈氏试剂1ml～2ml ,如有氟 乙酰胺,在滴加试剂约0.5min，观察颜色变化。如测定环境样品氟乙 酰胺时同时与氟乙酰胺标准和水质等作对照。如测定胃液和胃容物中 氟乙酰胺时，同时与阳性样品和阴性样品对照。 6 结果判定 阳性：淡黄色→黄色→亮黄色→深黄色，2min 后逐渐混浊，最 后生成桔红色沉淀。 阴性：无颜色反应。 7 说明 7.1 如有铵盐存在，滴加试剂后立即生成桔红色沉淀。 7.2 对含量低的或含量高的样品要用几种检验方法来确证，以避免假 阳性和假阴性，同时要以氟乙酰胺标准和水质等作对照试验，以便检 查操作是否准确。 7.3 样品分离提取后，得到的毒物数量往往很少，而且常常又不能重 16 复采样，为此，在试验前以消耗少量的样品进行预试验后，再进行确 证试验。 17 附件 5 异羟肟酸铁反应法定性测定食品等样品中氟乙酰胺 1 适用范围 本方法适用于食品、毒饵、水、呕吐物样品，可作为初步判断事 件性质的重要参考，不能作为确定事件性质的依据。氟乙酰胺的检测 目前无国家标准分析方法，重大突发事件性质的判定，建议采用其他 分析方法加以确证。 2 原理 氟乙酰胺与羟胺在碱性条件下，生成异羟肟酸，与三价铁离子作 用发生变色反应，通过颜色变化对氟乙酰胺进行定性。 3 方法重要参数 3.1 检出限：50μg/ml。 3.2 干扰：碱度过高对其可造成假阳性干扰，酸度过高可造成假阴性 干扰。 3.3 全程测定时间：15min。 4 试剂和仪器 4.1 仪器：酒精灯 1 个（或电热杯 1 个）、试管若干、500ml 烧杯 1 个、100ml 烧杯 2个、漏斗或滴管 1个、玻璃棒 1 个、滤纸若干， PH 试纸。 4.2 试剂：活性炭或中性氧化铝、氢氧化钠溶液，盐酸羟胺溶液、盐 酸溶液、三氯化铁。 4.3 氟乙酰胺标准品从公安部门获得。 18 5 样品前处理 由于现场所采集的样品成分复杂，除少数样品，例如市售鼠药或 工业原粉，可直接用本方法检测外，其他样品均需进行样品前处理来 以去除杂质干扰，提高灵敏度和降低假阳性率。 5.1 鼠药和工业原粉 直接取少量 0.1g～0.5g 进行检测。 5.2 固体样品（毒饵、米、面、茶叶、盐、呕吐物等） 取固体样品（颗粒大的固体需先研磨碎）2g～5g 放入 10ml 比色 管中，加入三倍于样品重的蒸馏水或纯净水，振摇后过滤，将上清液 用滤纸过滤，重复上述过程一次，合并上清液至一大试管内，将比色 管置于沸水浴中，使滤液煮沸浓缩至 1ml 左右。注意：不要将已经挥 发干的试管长时间置于沸水浴中，否则会影响回收率，出现假阴性。 5.3 液体样品（水、酒、饮料、酱油、醋等） 取液体样品 5ml 放入大试管中，加入等量于样品重的蒸馏水或纯 净水，充分振荡混匀，静置 5min，用分液漏斗或滴管分离上清液， 重复过程一次，合并上清液至大试管内，将试管置于沸水浴中，使滤 液煮沸浓缩至 1ml 左右。酱油、醋、有颜色的饮料等液体样品使用少 量活性炭或中性氧化铝进行脱色处理，以防止颜色干扰。 6 样品测定 取待检液 1ml 左右于试管中，加氢氧化钠溶液 10 滴，加盐酸羟 胺溶液 5滴，置沸水中水浴 5min（使其充分水解成氟乙酸钠释放出 氨）。取出放冷，加盐酸溶液 9～10 滴（调 pH 值至 3～5）后，加三 19 氯化铁溶液 3～10 滴（使其与氟乙酸反应），取出观察颜色变化。同 时取一干净的空试管进行同样操作作为对照。 7 结果判定 阳性：粉红或紫红色，尤其在滴加后的液面上更为明显。 阴性：浅黄或黄色。 8 说明 8.1 加盐酸溶液 9滴后要用 pH 试纸测试溶液 pH 值，若 pH 值太高(碱 度过高)，加入三氯化铁溶液时可产生红棕色沉淀，影响结果判定， 造成假阳性结果；若 pH 值太低(酸度过高)，加入三氯化铁溶液后氟 乙酰胺显色不敏锐或不显色，易造成假阴性结果。pH 值可用氢氧化 钠溶液和盐酸溶液反向调整。 8.2 空白对照试验，取与样品相同（不含氟乙酰胺）的物质与样品同 时操作，以便于观察对比。对于呕吐物、胃内容物等样品，应加阳性 对照试验。 8.3 测定时做空白对照试验，阴性结果为浅黄或黄色，有些空白对照 为黄棕色絮状沉淀，静置后上层液变成无色或仅呈浅黄色。 8.4 本方法不适于血液和组织器官样品的测定。 8.5 三氯化铁溶液放置时间长时会有少量沉淀产生，须摇匀后使用。 组合试剂的有效期为 1 年，阳性对照试验无反应时不可再用。 9 质量控制 检测时，应同时做阴性样品及氟乙酰胺标准品。 20 附件 6 液液萃取/气相色谱氮磷检测器法定量测定血浆中毒鼠强 1 适用范围 用于定量测定血浆样品中毒鼠强。 2 原理 使用液液萃取对样品前进行前处理，然后将处理后样品定容，并 经过毛细管柱分离，使用氮磷检测器对其中组分毒鼠强进行测定，通 过毒鼠强标准品的保留时间以及标准曲线来进行定性和定量检测。 3 方法重要参数 3.1 线性范围：可对血浆中毒鼠强含量在 10ng/ml～500ng/ml 的样品 进行毒鼠强定量测定。 3.2 精密度：批内、批间 RSD≤10%。 3.3 准确度（回收率）：90%～110%。 3.4 检出限：最低定量浓度为 10ng/ml。 3.5 全程测定时间：120min。 4 器材与试剂 气相色谱仪（配置氮磷检测器）；非极性毛细管气相色谱柱 （HP-1）；振荡仪；离心机；微量加样器；吹氮仪 毒鼠强标准；乙酸乙酯 5 操作步骤 5.1 色谱条件 a) 色谱柱：HP-1交联石英毛细管柱30m×0.32mm i.d.×0.25µm。 21 b) 温度：进样口 250℃，检测器 250℃。程序升温：初始温度 150℃，保持 1min，以 7℃/min 的速率升温至 250℃，保持 1min。 c) 载气：高纯氮气，柱头压力 35kPa，不分流进样，分流时间 0.75min，隔垫清扫：3.6ml/min。尾吹流量：30ml/min。氢气流量： 3.3ml/min。空气流量：86ml/min。 5.2 标准曲线的配制 称取 100mg 毒鼠强标准，用乙酸乙酯在 100ml 容量瓶中定容，配 制成 1mg/ml 的毒鼠强储备液。用储备液稀释出 5µg/ml、2µg/ml、 1µg/ml、0.5µg/ml、0.2µg/ml 和 0.1µg/ml 的标准溶液，利用此系列 标准溶液绘制标准曲线，相关系数为 0.999。 5.3 样品前处理 取出 1ml 血浆样品放入试管中，加入 2ml 乙酸乙酯，石蜡膜封口， 振荡混匀 4min（如果乳化现象比较严重，可以加入 0.5ml 的异丙醇）， 3000rpm 离心 4min，将上清液取出，重复上述萃取过程一次，将两次 上清液合并。合并的上清液在 40℃水浴下吹氮至近干，加入 0.1ml 乙酸乙酯定容，振荡混匀 1min。 5.4 进样检测 取定容后的溶液 1μl 进样检测，保留时间定性，峰面积定量。 6 质量控制 6.1 空白对照样色谱图上没有保留时间与毒鼠强相同的峰。 6.2 进待测样品前必须进空白样或乙酸乙酯溶剂，以确认进样针和色 谱仪器系统未受污染。 22 6.3 质控样测得值应在质控样品浓度的 90%～110%之间。 23 附件 7 液液萃取/气相色谱氮磷检测器法定量分析 食品、血和尿样品中氟乙酰胺和毒鼠强 1 适用范围 用于定量测定食品、血和尿样品中毒鼠强和氟乙酰胺。 2 原理 使用液液萃取对样品前进行前处理，然后将处理后样品定容，并 经过毛细管柱分离，氮磷检测器对其中组分氟乙酰胺和毒鼠强进行测 定，通过氟乙酰胺、毒鼠强标准品的保留时间以及标准曲线来进行定 性和定量检测。 3 方法重要参数 3.1 线性范围：(5～50)μg/ml。 3.2 精密度：批内、批间 RSD≤10%。 3.3 准确度（回收率）：80%～90%。 3.4 全程测定时间：120min。 4 器材与试剂 气相色谱仪（配置氮磷检测器)；非极性毛细管气相色谱柱 （HP-1）；振荡仪；离心机；微量加样器；吹氮仪 毒鼠强标准、氟乙酰胺标准 5 操作步骤 5.1 色谱条件 a) 色谱柱：HP-1交联石英毛细管柱30m×0.32mm i.d.×0.25µm。 24 b) NPD检测器温度:280℃,进样口温度:230℃,载气恒流模式 0.7ml/min, 空气流量:60ml/min,氢气:3ml/min。程序升温:初始温度 150℃,保持2min,以10℃/min升温至250℃,并保持5min。 5.2 标准曲线的配制 吸取1.0mg/ml的氟乙酰胺、毒鼠强标准溶液1.0ml于10.0ml容量 瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度,此液氟乙酰胺、毒鼠强的含量分别为 100μg/ml,将混合标准液逐级稀释为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、 50μg/ml,分别取1.0μg注入气相色谱仪测定,以保留时间定性确证。 氟乙酰胺和毒鼠强的保留时间分别为2.36min和8.72min左右。 5.3 样品前处理 5.3.1 固体(米、面、馒头、蔬菜等) 取适量样品(15～30)g,加无水硫酸钠研磨呈粉末状,置于150ml 带塞锥形瓶中,加入50ml乙酸乙酯,用超声波清洗器提取20min或振荡 1h过滤,滤液于40℃水浴浓缩至1ml～2ml。 5.3.2 饭、菜汁、洗胃液、呕吐物等 取适量样品(15～20)g置于锥形瓶中,加50ml 乙酸乙酯,超声提 取或振荡,乙酸乙酯层通过无水硫酸钠过滤,于水浴浓缩至1ml～2ml。 5.3.3 病人血清、尿液 取适量样液(血清0.50ml,尿液500μl)于具塞离心管中,加5ml乙 酸乙酯,振摇提取3min,于3500rpm/min下离心分层,水相再次用5ml乙 酸乙酯萃取1次,合并2次萃取的有机相,浓缩至0.5ml。吸取1.0μL进 行色谱仪分析。保留时间定性，峰面积定量。 25 6 质量控制 6.1 空白对照样色谱图上没有保留时间与氟乙酰胺和毒鼠强相同的 峰。 6.2 进待测样品前必须进空白样或乙酸乙酯溶剂，以确认进样针和色 谱仪器系统未受污染。 6.3 样品分析则在相同检测条件下,如在相同保留时间出现色谱峰, 可进一步在样液中加入定量标准液,同一保留时间出现峰叠加即可判 定为阳性结果。 26