六味地黄丸(浓缩丸)申报资料

已有国家的中成药注册分类第9类 受理编号： 原始编号： 申请编号： 六味地黄丸(浓缩丸)申报资料目录 （1） 综述资料 资料1药品名称 资料2证明性文件 资料3立题目的与依据 资料4对主要研究结果的总结及评价 资料5药品说明书样稿、起草说明及最新参考文献 资料6包装、标签设计样稿 （2） 药学研究资料 资料7药学研究资料综述 资料8药材来源及鉴定依据 资料12生产工艺的研究资料及文献资料，辅料来源及质量标准 资料15药品标准草案及起草说明 资料16样品及检验书 资料17药物稳定性研究的试验资料及文献资料 资料18直接接触药品的包装和容器的选择依据及质量标准 已有国家标准的中成药注册第9类 六味地黄丸(浓缩丸)申报资料 （一）综述资料 资料1药品名称 资料2证明性文件 资料3立题目的与依据 资料4对主要研究结果的总结及评价 资料5药品说明书样稿、起草说明及最新参考文献 资料6包装、标签设计样稿 药品名称 1、 中文名：六味地黄丸（浓缩丸） 2、 汉语拼音名：Liuwei Dihuang Wan 3、 命名依据：六味地黄丸收载于部颁标准《中药成方制剂》第11册36页 证明性文件 1.药品生产企业《营业执照》复印件（附后） 2.药品生产企业《药品生产许可证》复印件（附后） 3.《药品生产质量管理》认证证书复印件（附后） 4.直接接触药品的《药品包装材料和容器注册证》复印件 （附后） 实业有限公司 《药品包装材料和容器注册证》 5.中药保护品种情况检索结果报告单复印件（附后） 保 证 书 六味地黄丸（浓缩丸）收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》（中药成方制剂）第11册36页，经国家中药品种保护审评委员会检索，该品种未受保护，不存在侵权的问题。 立题目的与依据 1.立题目的与依据 六味地黄丸（浓缩丸）是用于调理人体机能，治疗肝肾阴虚的经典传统中药。随着当前中国社会的进步、人们生活方式的演变和人们以及工作压力的增强，对于滋补肝肾，辅佐调理人体机能且无毒副作用的药物就愈加需求。六味地黄丸（浓缩丸）是根据祖国医学的滋补肝肾的原则，在传统丸剂的基础上，结合现代药理学，中药化学等理论，开发研制的药物。 六味地黄丸（浓缩丸）六味地黄丸组方中选择熟地黄滋肾填精作为主药；辅以山萸肉养肝涩精，山药补脾固精，这是补的一面，有用泽泻清泻肾火，并防熟地黄之滋腻；牡丹皮清肝泻火，并制山茱萸之温；茯苓淡渗脾湿；以助山药之健运，共为佐使药，这是泻的一面。六药互相配合，补中有泻，寓泻于补，相辅相成，是通补开合之剂，滋补肝肾之方，常治肝肾不足，虚火上炎之证。治疗肝肾阴虚所至腰膝酸软，头目眩晕，耳鸣耳聋，盗汗遗精，或骨蒸潮热，或手足心热，或消渴，或虚火牙痛，舌燥喉痛，有良好的疗效。临床和市场调查表明六味地黄丸受到了医务工作者和群众的广泛使用。 该药收载于《中药成方制剂》第11册第36页。该产品的类似制剂是在六味地黄丸基础之上减加而成，六味系列产品深受广大群众的欢迎。 2.中医理论、古籍文献及国内外生产使用情况综述。 六味地黄丸（浓缩丸）是补阴的主要药物，功效以滋补肝肾为主，并能补脾阴，为三阴并补之药，阴虚生内热，故见骨蒸潮热，手足心热；如虚火上炎，则见舌燥喉痛，虚火牙痛；虚火内扰，阴不内守，故盗汗遗精；腰为肾之府，肾主骨而生髓，如骨髓不充，则腰膝酸软无力，如脑髓不足，则头目眩晕，耳鸣，耳聋；由于精气亏虚，肾虚不固，故小便多而消渴。 六味地黄丸（浓缩丸）是以中医药理论为指导，在传统中药制剂基础上，结合现代科学技术，提取精制而成的浓缩丸剂在治疗冠心病的临床中受到医务人员与患者的欢迎。 目前国内六味地黄丸（浓缩丸）生产厂家有山西华康药业股份有限公司，三九万荣药业有限公司，宜昌民康药业有限公司，鞍山市先臻药业有限公司，吉林省辉南辉发制药股份有限公司，吉林金宝药业股份有限公司，通化东日药业股份有限公司，通化振霖药业有限责任公司，吉林修正药业集团通化市制药有限公司，通化茂祥制药有限公司，无锡山禾药业股份有限公司，河南省新谊药业股份有限公司，河南省洛阳市中药三厂，河南省宛西制药股份有限公司，湖南九芝堂股份有限公司，湖北清华药业科技有限公司，河北药都制药集团有限责任公司等。该品种是在六味地黄丸的基础上开发出的制剂，质量稳定，疗效确切. 3.创新性、可行性 六味地黄丸（浓缩丸）是以中医药理论为指导，在传统中药制剂基础上，结合现代科学技术，提取精制而成的浓缩丸剂。参照原部版标准中药成方制剂第11册36页“六味地黄丸（浓缩丸）”项下，我们制定了牡丹皮中丹皮酚的提取工艺，牡丹皮药渣，山茱萸，熟地黄，茯苓，泽泻的提取工艺，制定了以高效液相色谱法测定成品中牡丹皮药材中丹皮酚含量的[含量测定]方法，完善了原部版标准中定量项目的不足，通过提高检测检验标准，实现了生产中量化指标的可控性。进而使产品的治疗作用和质量稳定性得充分的保障，确保产品的质量与临床效果。在中药制剂走向现代化的生产与管理方面作出了有益的探索。 对主要研究结果的总结及评价 根据新的《药品注册》的有关规定，按中药品种注册分类9类的有关要求，我们对六味地黄丸（浓缩丸）主要做了以下的研究： 1、 工艺的研究 我们着重考察了六味地黄丸（浓缩丸）制备工艺中丹皮酚的提取方法。采用了比较试验和正交试验法对丹皮酚的提取方法和工艺参数进行了详细研究。结果表明，所定工艺能较好地提出丹皮酚，且重现性好，收率较稳定，说明采用该工艺进行水蒸气蒸馏提取牡丹皮中丹皮酚是可行的。详见资料12。 我们着重考察了六味地黄丸（浓缩丸）制备工艺中牡丹皮药渣，山茱萸，熟地黄，茯苓，泽泻的提取时加水量对出膏率和熊果酸提取收得率之间关系进行研究。结果表明，加水量分别为第一次10倍量、第二次8倍量，每次煎煮时间为2小时，为最佳提取条件。详见资料12。 2、质量可控性的研究 六味地黄丸（浓缩丸）质量标准收载于部版中药成方制剂第11册36页，根据国家中药仿制药品试行标准管理规定的要求，我们对原标准进行了提高研究，以高效液相色谱法代替原标准中紫外分光光度法测定成品中牡丹皮药材中丹皮酚含量,完善了原部版标准中定量项目的不足，通过提高检测检验标准，实现了生产中量化指标的可控性。进而使产品的治疗作用和质量稳定性得充分的保障，确保产品的质量与临床效果。在中药制剂走向现代化的生产与管理方面作出了有益的探索。 3、 稳定性的考察 我们对试制的三批样品（批号为040201、040202、040203）进行了12个月的稳定性加速试验和12个月的稳定性长期试验，加速试验的结果表明，在考察期内各项指标无明显变化，故此我们将六味地黄丸的有效期暂定为二年。稳定性长期试验仍在考察之中。 4、 安全性和有效性 六味地黄丸已上市多年，其疗效确切，有良好的声誉。我们依据处方与工艺做了三批样品，将其按新的六味地黄丸（浓缩丸）质量标准检验，结果各项指标均符合要求。 药品说明书样稿、起草说明 一、六味地黄丸说明书样稿 注册商标 六味地黄丸说明书 【药品名称】 品 名 六味地黄丸 汉语拼音 Liuwei Dihuang Wan 【成 份】熟地黄、山茱萸（制）、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻。 【性 状】本品为亮黑色的浓缩丸。味微甜、酸、略苦。 【作用类别】本品为虚证类非处方药药品。 【功能主治】滋阴补肾。用于头晕耳鸣，腰膝酸软，遗精盗汗。 【用法用量】口服，一次8丸，一日3次。 【注意事项】 1.忌辛辣食物。 2.不宜在服药期间服感冒药。 3.服药期间出现食欲不振，胃脘不适，大便稀，腹痛等症状时，应去医院就诊。 4.服药二周后症状未改善，应去医院就诊。 5.按照用法用量服用，孕妇、小儿应在医师指导下服用。 6.药品性状发生改变时禁止服用。 7.儿童必须在成人的监护下使用。 8.请将此药品放在儿童不能接触的地方。 9.如正在服用其他药品，使用本品前请咨询医师或药师。 【规 格】 【贮 藏】 密封。 【包 装】 每瓶装200丸，塑料瓶装。 【有 效 期】 暂定2年 【批准文号】 【生产企业】 企业名称： 地 址： 邮政编码： 电话号码： 传真号码： 二、起草说明 我们起草的说明书，其【主要成份】项参考《国家药品标准说明书[主要成份]内容汇编》上的中药排列顺序；【有效期】项主要是根据稳定性加速试验的考察结果而制定。 参考文献 《国家药品标准说明书[主要成份]内容汇编》，统一药品使用说明书及批准文号专项工作小组，2001年11月。 药学研究资料综述 根据新的颁布执行《药品注册管理办法》的有关规定，我们对六味地黄丸主要进行了以下的实验研究： 1、 工艺研究 我们着重考察了六味地黄丸制备工艺中丹皮酚的提取方法。采用了比较试验和正交试验法对丹皮酚的提取方法和工艺参数进行了详细研究。结果表明，所定工艺能较好地提出丹皮酚，且重现性好，收率较稳定，说明采用该工艺进行水蒸气蒸馏提取牡丹皮中丹皮酚是可行的。详见资料12。 2、 质量标准的研究 六味地黄丸（浓缩丸）质量标准原收载于部颁标准中药成方制剂第11册36页，根据国家中药仿制药品试行标准管理规定的要求，我们对原标准进行了提高研究，制定了以高效液相色谱法测定成品中牡丹皮药材中丹皮酚含量的[含量测定]方法，完善了原部颁标准中定量项目的不足，通过提高检测检验标准，实现了生产中量化指标的可控性。进而使产品的治疗作用和质量稳定性得充分的保障，确保产品的质量与临床效果。在中药制剂走向现代化的生产与管理方面作出了有益的探索。 三、稳定性的研究 我们对试制的三批样品（批号为030601、030602、030603）进行了12个月的稳定性加速试验和12个月的稳定性长期试验，加速试验的结果表明，在考察期内各项指标无明显变化，到目前为止，长期稳定性实验仍在进行中。 药材来源及鉴定依据 药材来源及鉴定依据 1、药材来源 名称 质量标准 入药部位 产地 药材来源 熟地黄 中国药典2005年版一部 块根 山茱萸（制） 中国药典2005年版一部 干燥成熟果肉 牡丹皮 中国药典2005年版一部 干燥根皮 山药 中国药典2005年版一部 干燥根茎 茯苓 中国药典2005年版一部 干燥菌核 泽泻 中国药典2005年版一部 干燥块茎 2、鉴定依据 熟地黄、山茱萸（制）、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻都是中国药典2005年版一部收载的药品，其鉴定依据为药典法定标准。 3、药材的质量标准复印件（附后） 4、药材的检验报告书复印件（附后） 已有国家标准的中成药注册第9类 资料12 生产工艺的研究资料及文献资料 辅料来源及质量标准 试验项目：生产工艺的研究资料及文献资料 辅料来源及质量标准 试验名称：六味地黄丸（浓缩丸） 试验负责人： 试验人： 试验起止日期： 原始资料保存地点：究所 试验单位： 申报单位： 联系人： 联系电话： 工艺研究的资料及文献资料 辅料来源及质量标准 生产工艺的研究的资料 1、 提取工艺研究 根据一般经验，同时参照卫生部药品标准中药成方制剂第十一册第36页“六味地黄丸（浓缩丸）”项下[制法]，对各种药材的提取工艺参数进行筛选。 1、牡丹皮中丹皮酚的提取工艺研究 原标准中对丹皮酚的提取方法未加说明。文献[1]采用比较试验和正交试验法对牡丹皮的提取方法和工艺参数进行了详细研究，我们参照文献[1]中的优选提取工艺，进行了平行试验：牡丹皮加15倍水，水蒸气蒸馏，收集药材量10倍的蒸馏液，冷藏，滤过，得结晶，滤液加5%氯化钠重蒸馏，收集3倍量蒸馏液，冷藏，滤过，合并丹皮酚结晶。试验结果见下表： 项目 1 2 3 4 5 牡丹皮量(g) 60 60 60 60 60 出酚量(g) 1.0 1.1 1.0 1.0 1.1 出酚率(%) 1.67 1.83 1.67 1.67 1.83 平均出酚率(%) 1.73 药材丹皮酚含量(%) 2.11 平均提取率(%) 82.0 结论：由表可见，该工艺能较好地提出丹皮酚，且重现性好，收率较稳定，说明采用该工艺进行水蒸气蒸馏提取牡丹皮中丹皮酚是可行的。 2、牡丹皮药渣、山茱萸、熟地黄、茯苓、泽泻提取工艺研究 依照原标准中方法，采用水为溶剂提取，原标准对加水量未加说明，试制中拟对加水量以出膏率和熊果酸含量为指标进行确定，根据一般经验，拟定加水量分别为12倍和10倍，10倍和8倍，8倍和6倍进行比较。 分别取60g牡丹皮药渣、山茱萸27g、熟地黄160g、茯苓60g、泽泻60g按拟定加水量进行试验，浸膏中熊果酸含量测定方法参照成品中[山茱萸]项下进行，结果浸膏中未检出熊果酸，其他结果见下表： 药材总量（g） 加水量（倍） 干膏量（g） 出膏率（%） 367 12、10 163.0 44.4 367 10、8 161.5 44.0 367 8、6 151.3 41.2 结论：加水量为12、10倍和10、8倍的出膏率高且相近，而8、6倍的出膏率偏低。综合考虑确定煎两次，加水量分别为10倍和8倍量，每次煎煮时间为2小时。 注：原拟以干膏中熊果酸含量为指标考察加水量，但用薄层扫描法在干膏中检测不到熊果酸。由于本工艺采用水为溶剂提取，而熊果酸为脂溶性成分，不溶于水，可知在该工艺中熊果酸不能很好地被提取，因此，熊果酸含量在该工艺的优选中不具代表性，所以本工艺的优选未以熊果酸含量为指标。 二、成型工艺研究 将山药及剩余山茱萸混合打粉，过80目筛。为保证丹皮酚能与稠膏、细粉充分混合均匀，先将丹皮酚溶于少量乙醇，用喷瓶将其喷入细粉中，再将山茱萸等的稠膏与细粉混匀，制软材，用YUJ-16A型高速制丸机，6.5mm模具，湿丸控制在0.22g，制丸，热风循环干燥烘箱内干燥，设定温度50-55℃，烘至含水量7%以下，取出打光，得成品丸。 结论： 根据以上工艺研究，确定该品种的工艺如下： 以上六味，牡丹皮加15倍量水，水蒸气蒸馏，收集药材量10倍的蒸馏液，冷藏，滤过，得结晶，滤液加5%氯化钠重蒸馏，收集3倍量蒸馏液，冷藏，滤过，合并丹皮酚结晶。药渣与山茱萸20.3g、熟地黄、茯苓、泽泻加水10倍和8倍煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.35-1.40(50℃)的稠膏；山药与剩余山茱萸粉碎成细粉，过筛，混匀；丹皮酚先用适量乙醇溶液喷入细粉中，再将山茱萸等的稠膏与细粉混匀，制软材，制丸，干燥，打光，即得。 三、与生产、工艺有关的仪器设备 序号 生产名称 型号 生产厂家 1 多功能提取机组 SH-TN 2 中药制丸机 WZ-180 3 中草药粉碎机 SF-250 4 热风循环箱 CT-C3 5 混合机 HC 四、参考文献 1、《中药材》1998年21卷第1期34-36页 五、辅料的来源及质量标准 （1） 来源及质量标准 辅料名称 依据的质量标准 生产厂家 虫白蜡 中国药典2000年版一部 蜂蜡厂 乙醇 中国药典2000年版二部 酒精销售有限公司 （2） 辅料的质量标准与检验报告书复印件（附后） 2、 工艺流程图 加15倍量水 水蒸气蒸馏 收集药材的 10倍量蒸馏液 第一次10倍水2小时 第二次8倍水2小时 过滤 减压浓缩至相对密度为 加5%氯化钠重蒸馏收集 1.35-1.40（50℃） 的3倍量重蒸馏液 4℃ 冷藏过滤 用乙醇溶解 喷入细粉中 40℃干燥 制丸 干燥 打光 3. 三批中试产品的相关数据 1.中试产品批号 040201 （1）处方:熟地黄 8400g山茱萸（制）4200g 牡丹皮3150g 山药 4200g茯苓3150g泽泻3150g 制成70000丸 （2）制法：以上六味，牡丹皮提取丹皮酚；药渣与山茱萸1421g、熟地黄、茯苓、泽泻加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.35-1.40的稠膏；山药与剩余山茱萸粉碎成细粉，过筛，混匀；将以上稠膏、细粉、丹皮酚混匀，制丸，干燥，打光，即得。 （3）成品：67600粒 收得率： 96.57% 2.中试产品批号 040202 （1）处方:熟地黄 8400g山茱萸（制）4200g 牡丹皮3150g 山药4200g茯苓3150g泽泻3150g 制成70000丸 （2）制法：以上六味，牡丹皮提取丹皮酚；药渣与山茱萸1421g、熟地黄、茯苓、泽泻加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.35-1.40的稠膏；山药与剩余山茱萸粉碎成细粉，过筛，混匀；将以上稠膏、细粉、丹皮酚混匀，制丸，干燥，打光，即得。 （3）成品：68200粒 收得率：97.42% 3.中试产品批号 040203 （1）处方:熟地黄 8400g山茱萸（制）4200g 牡丹皮3150g 山药4200g茯苓3150g泽泻3150g 制成70000丸 （2）制法：以上六味，牡丹皮提取丹皮酚；药渣与山茱萸1421g、熟地黄、茯苓、泽泻加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.35-1.40的稠膏；山药与剩余山茱萸粉碎成细粉，过筛，混匀；将以上稠膏、细粉、丹皮酚混匀，制丸，干燥，打光，即得。 （3）成品：68400粒 收得率：97.71% 4. 中试产品情况一览表： 项目 批号 结果 标准规定 性状 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦。 符合规定 符合规定 符合规定 鉴别 1、 应显山药、山茱萸显微特征。 显山药、山茱萸显微特征。 显山药、山茱萸显微特征。 显山药、山茱萸显微特征。 2、 应检出丹皮酚 检出丹皮酚 检出丹皮酚 检出丹皮酚 检查 1、 重量差异 符合规定 符合规定 符合规定 2、 水分（%） 5.4 4.8 5.2 3、 溶散时限（min） 56 58 53 含量测定 本品含牡丹酚按丹皮酚计，不得少于0.18% 0.19 0.19 0.18 本品含山茱萸按熊果酸计，不得少于0.02% 0.031 0.030 0.030 微生物限度检查 细菌<1000个 /g 100 170 210 霉菌<100个/g <10 <10 <10 大肠杆菌不得检出 未检出 未检出 未检出 活螨不得检出 未检出 未检出 未检出 结论 符合规定 符合规定 符合规定 已有国家标准的中成药注册第9类 资料15 六味地黄丸质量标准草案 及起草说明书 试验项目：六味地黄丸质量标准及起草说明书 试验名称：六味地黄丸（浓缩丸） 试验负责人： 试验人： 试验起止日期： 原始资料保存地点： 试验单位：限公司 申报单位：有限公司 联系人： 联系电话： 六味地黄丸（浓缩丸） liuwei Dihuang Wan 【处方】熟地黄 120g 山茱萸（制） 60g 牡丹皮 45g 山 药 60g 茯 苓 45g 泽 泻 45g 制成1000丸 【制法】以上六味，牡丹皮提取丹皮酚；药渣与山茱萸20.3g、熟地黄、茯苓、泽泻加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.35-1.40的稠膏；山药与剩余山茱萸粉碎成细粉，过筛，混匀；将以上稠膏、细粉、丹皮酚混匀，制丸，干燥，打光，即得。 【性状】本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦。 【鉴别】（1）取本品，置显微镜下观察：果皮表皮细胞橙黄色，表面观类多角形，垂周壁略连珠状增厚。淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24-40µm，脐点短缝状或人字形。 （2）取本品5g，研细，加乙醚20ml，回流1小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2000年版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各10µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-醋酸乙酯（3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 【检查】应符合丸剂项下有关的各项规定（中国药典2000年版一部附录IA）。 【含量测定】牡丹皮 照高效液相色谱法（中国药典2000版一部附录VID）测定。 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（55：45）为流动相；检测波长为274nm。理论塔板数按丹皮酚峰计算，应不低于2000。 对照品溶液的制备 精密称取丹皮酚对照品5mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含丹皮酚10µg）。 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取细粉0.25g，精密称定，置50ml量瓶内，加甲醇30ml，超声提取30分钟，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，静置，用0.45µm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20µl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。 本品含牡丹皮以丹皮酚（C9H10O3）计，不得少于0.18%。 山茱萸 取本品5g，精密称定，加水30ml，放置使溶散，用滤纸滤过；药渣再用水30ml洗涤，在室温干燥至呈松软的粉末状，于100℃烘干，连同滤纸一并置索氏提取器内，加乙醚适量，加热回流提取4小时，提取液回收乙醚至干，残渣用石油醚（30-60℃）浸泡2次，每次15ml（浸泡约2分钟），倾去石油醚，残渣加无水乙醇-氯仿（3：2）混合液适量，微热使溶解，定量转移至5ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取供试品溶液5µl与10µl，对照品溶液4µl与8µl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-氯仿-醋酸乙酯（20：5：8）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110℃烘5-7分钟，至斑点清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法（ 中国药典2000年版一部附录 VIB ）进行扫描， 波长：λs=520nm，λR=700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。 本品含山茱萸按熊果酸（C30H48O3）计，不得少于0.02%。 【功能与主治】滋阴补肾。用于肾阴亏损，头晕耳鸣，腰膝酸软，骨蒸潮热，盗汗遗精，消渴。 【用法与用量】口服，一次8丸，一日3次。 【规格】每8丸相当于 【贮藏】密封。 成品质量标准草案起草说明 【名称】同原标准 【处方】原标准处方制成量1333丸，折合每1000丸处方为 熟地黄 120g 山茱萸（制） 60g 牡丹皮 45g 山 药 60g 茯 苓 45g 泽 泻 45g 制成1000丸 【制法】同正文所述，详见资料12。 【性状】同原标准，为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦。 【鉴别】 1、 鉴别（1）同原标准，三批样品显微镜鉴别见图1至图3。 2、鉴别（2）为处方为牡丹皮的鉴别方法，原质量标准中已有项目。三批样品薄层色谱鉴别见图4。 3、处方中熟地黄为君药，经文献检索，并参考中国药典2000年版一部收载方法，拟增加熟地的定性鉴别，经试验，阴性对照有干扰，故未列入质量标准。 4、处方中熟地黄为君药，拟增加熟地的定性鉴别。参照文献熟地鉴别方法，以熟地为对照药材，以甲苯-醋酸乙酯（1：1）为展开剂，以2，4-二硝基苯肼为显色剂，经试验，不含熟地的阴性对照液色谱与样品相同，未见特征性斑点，表明有干扰。参照药典熟地的鉴别，以石油醚-乙酸乙酯为展开剂，紫外显色，也未找到特征性斑点。参照药典地黄的鉴别，以氯仿-甲醇-水为展开剂，先紫外显色，后喷5%香草醛硫酸溶液加热显色，仍未找到特征性斑点，故未列入质量标准。 5、处方中茯苓和泽泻，经文献检索，查阅中国药典2000年版一部收载方法，发现无特异性定性和定量成分，故未制定鉴别方法。 【检查】 1、制剂通则检查 依照中国药典2000年版一部附录IA丸剂项下的规定，对本品三批样品的水分、重量差异、溶散时限、微生物限度进行了检查，结果符合规定。测定结果见表1： 表1 批号 水分 重量差异 溶散时限（min） 微生物限度 7.2% 符合规定 83 符合规定 6.9% 符合规定 90 符合规定 7.1% 符合规定 80 符合规定 2、重金属检查 取本品1g，依照中国药典2000年版一部附录IXE的方法检查，测定结果见表2： 表2 批号 重金属含量 <20ppm <20ppm <20ppm 结论：三批样品重金属含量均小于20ppm，故未列入质量标准。 3、砷盐检查 取本品，依照中国药典2000年版一部附录IXF的方法检查，测定结果见表3： 表3 批号 结果 <2ppm <2ppm <2ppm 结论：三批样品砷盐检查均<2ppm，故未列入质量标准。 【含量测定】 （一）牡丹皮 本品所制定的含量测定系处方中牡丹皮所含丹皮分配成分的含量测定。原质量标准采用的是紫外分光光度法，该法存在的不足是：操作繁琐，其灵敏度和方法重现性不如高效液相色谱法，且所有在274nm处有吸收的成分均会被测出。本法参考相关文献报道[1][2]，并在此基础上进行了适当调整，建立了新的高效液相色谱测定方法并做方法学考察如下： 1、仪器与试药 仪器：Agilent 1100 series高效液相色谱仪；Agilent 1100 series 2996二级管阵列检测器。 色谱柱：Kromasil 5u 100AC18（250×4.60mm） 对照品：丹皮酚 购自中国药品生物制品检定所，批号0708-9704，供含量测定用。 试剂：甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯。 2、色谱条件 固定相：十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：甲醇-水（55：45） 检测波长：274nm 柱温：室温 流速：1.0ml/min 3、系统适用性试验 在此条件下，丹皮酚与其它相邻组成可达到较好的基线分离，且缺牡丹皮的阴性对照在相同保留时间下无吸收峰，理论塔板数 n=5.54*(tR/Wh/2)2=5459，分离度R=2（tR2-tR1）/（W1+W2）=8.75，丹皮酚对照品紫外扫描图见图5，HPLC图谱见图6；牡丹皮空白HPLC图谱见图7；六味地黄丸（浓缩丸）HPLC图谱见图8。 1）对照品溶液的制备：精密称取丹皮酚对照品5mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含丹皮酚10µg）。 2）供试品溶液的制备：丹皮酚不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙酮，参照文献[3][4]，采用甲醇超声法制备样品供试液，取本品细粉约0.25g，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇30ml，考察不同提取时间对提取率的影响。试验结果见表4。 表4 试验号 提取方法 溶剂 称样量（g） 含量（%） 1 超声20min 甲醇 0.2509 0.250 2 超声30min 甲醇 0.2497 0.255 3 超声40min 甲醇 0.2508 0.249 4 超声50min 甲醇 0.2498 0.258 5 超声60min 甲醇 0.2499 0.256 结论：从上表结果可看出采用超声提取30min，丹皮酚已基本提取完全。 4、阴性对照试验 取除牡丹皮外的五味药物按处方组成的剂量，按工艺要求制备浓缩丸牡丹皮空白样品，取该样品0.25g，按[含量测定]项下的供试品溶液的制备方法操作，得空白对照溶液。取空白对照溶液20µl，按上述色谱条件进行色谱分析，在与对照品丹皮酚峰同一保留时间下无吸收峰，证明阴性样品无干扰（见图7）。 5、线性关系考察 精密称取丹皮酚对照品5.07mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.1、0.5、1、2、3ml至50ml量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件，进样20µl，测定峰面积，结果见表5。 表5 浓度 进样量 峰面积 平均峰面积 （µg/µl） （µg） 1 2 3 （n=3） 1 0.001014 0.02028 82.9 84 84.6 83.8 2 0.00507 0.1014 425.2 421 415.4 420.6 3 0.01014 0.2028 868.3 890.8 839.8 866.3 4 0.02028 0.4056 1699.6 1694.1 1695.5 1696.4 5 0.03042 0.6084 2586.2 2579 2569.8 2578.3 丹皮酚浓度为横坐标，以峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，见图6。 图6 回归方程：A=4231.3C-3.6151(r=0.9999) 表明丹皮酚在0.02028~0.6084µg范围内线性关系良好。 6、精密度试验 精密吸取对照品溶液20µl，重复进样5次，测定丹皮酚峰面积，计算相对标准偏差，结果见表7。 表7 次数 1 2 3 4 5 峰面积 851.3 841 845 852.2 852.5 RSD（%） 0.61 精密吸取供试品（批号：030601）溶液20µl，分别重复进样5次，测定丹皮酚峰面积，计算相对标准偏差，结果见表8。 表8 次数 1 2 3 4 5 峰面积 969.4 965.9 951.1 952 970.8 RSD（%） 0.99 7、重复性试验 取同一批六味地黄丸（浓缩丸）样品（批号：030601）5份，按样品含量测定方法测定，计算供试品丹皮酚含量和相对标准偏差。结果见表9。 表9 次数 称样量（g） 含量（%） 平均含量（%） RSD% 1 0.2512 0.256 2 0.2516 0.254 3 0.2502 0.251 0.252 1.21 4 0.2512 0.253 5 02504 0.248 8、加样回收率试验 配制0.5mg/ml的对照品溶液5份，分别精密量取1ml溶液加入已知含量的六味地黄丸（浓缩丸）样品（批号：030601），按上述含量测定条件测定，以下式计算回收率，结果见表10。 测出的丹皮酚-样品中丹皮酚量 回收率=————————————————×100% 添加的丹皮酚量 表10 称样量 (g) 样品含量 (mg) 添加丹皮酚量 (mg) 实测含量 (mg) 回收率 (%) 平均回收率 (%) RSD % 1 0.2498 0.629 0.497 1.119 98.6 2 0.2517 0.634 0.500 1.122 97.6 3 0.2518 0.635 0.520 1.165 102.0 99.5 1.94 4 0.2524 0.636 0.527 1.154 98.3 5 0.2493 0.628 0.518 1.152 101.2 试验表明平均回收率为99.5%，符合要求。 9、稳定性试验 吸取对照品溶液20µl，每隔2小时进样1次，计算相对标准偏差，结果见表11。 表11 试验次数 0小时 2小时 4小时 6小时 8小时 峰面积 825.2 830.2 839.1 831.6 849.2 RSD(%) 0.77 取六味地黄丸（浓缩丸）（批号：060601）按[含量测定]项，然后每隔2小时进样1次，共5次，计算相对标准偏差，结果见表12。 表12 试验次数 0小时 2小时 4小时 6小时 8小时 峰面积 972.5 981.8 986.6 969.4 994.4 RSD(%) 1.04 10、样品测定 对十批样品含量进行测定，结果见表13： 表13 批号 含量（%） 0.253 0.249 0.251 0.20 0.19 批号 含量（%） 0.21 0.18 0.21 0.18 0.20 11、高效液相法与紫外分光光度法测定丹皮酚含量结果的比较 取自制样品和市售样品适量，分别按上述方法及卫生部药品标准中药成方制剂第十一册36六味地黄丸（浓缩丸）项下[含量测定]方法测定，结果见表14。 表14 样品 紫外法（%） HPLC（%） 0.322 0.253 市售样品 0.263 0.152 结论：由表可见，紫外分光光度法所测结果偏高，可能是由于其它挥发性成分在274nm处有一定吸收所致，高效液相法测定结果更为准确。 结论：由表可见，紫外分光光度法所测结果较高，可能是由于高效液相法所测为丹皮酚单一成分的含量，故紫外法所测结果较高。 12、含量限度的制订 参照原质量标准的含量限度，确定本品含牡丹皮以丹皮酚（C9H10O3）计，不得少于0.18%。 （二）山茱萸 本品的含量测定同原质量标准，本品含山茱萸以熊果酸（C30H48O3）计，不得少于0.02%，对试制样品3批检验结果见表15： 表15 批号 含量（%） 0.026 0.028 0.031 0.022 0.021 批号 含量（%） 0.020 0.021 0.021 0.020 0.022 与质量研究相关的仪器设备 序号 设备名称 型号 制造厂家 台数 1 高效液相色谱仪 HP1100 美国惠普 1 2 高效液相色谱仪 AL1100 美国安捷伦 1 3 六管崩解仪 2B-IB 天津大学精密仪器厂 1 4 电子天平 FA1004 上海天平仪器厂 3 5 净化工作台 SXK-103 蚌埠净化设备厂 1 6 霉菌培养箱 PYX-DHS-40X50 上海跃进医疗机械厂 1 7 电热鼓风干燥箱 101A-1 上海试验仪器总厂 4 8 立式压力蒸汽灭菌清毒器 628 铁岭市医疗器械总厂 1 五、参考文献： [1]药物分析杂志，18（3），1998，199-200 [2]中国药科大学学报20（2），1989，109-111 [3]基层中药杂志，11（1），1997，34-36 [4]中药材，第23（5），2000，291 已有国家标准的中成药注册第9类 资料16 六味地黄丸样品及检验报告书 试验项目：六味地黄丸样品及检验报告书 试验名称：六味地黄丸（浓缩丸） 试验负责人： 试验人： 试验起止日期：2月 原始资料保存地点：究所 试验单位：公司 申报单位：公司 联系人： 联系电话： 三批样品及检验报告书 依据中药成方制剂11册“六味地黄丸（浓缩丸）”项下有关内容，我们试制出 等批号的样品，并依据提高后的质量标准进行检验，各项指标均符合要求。 自检报告附后。 已有国家标准的中成药注册第9类 资料17 药物稳定性研究的试验资料 及文献资料 试验项目：药物稳定性研究的试验资料及文献资料 试验名称：六味地黄丸（浓缩丸） 试验负责人： 试验人： 试验起止日期： 原始资料保存地点：所 试验单位：司 申报单位：有限公司 联系人： 联系电话： 药物稳定性研究的试验资料及文献资料 根据新的《药品注册管理办法》的要求，按中药稳定性试验指导原则，对三批中试样品（市售包装）进行稳定性加速试验和稳定性长期试验。 1、 稳定性加速试验 1、 样品来源：本公司 2、 样品规格：每瓶装200丸 3、 样品包装：固体药用塑料瓶 200丸/瓶 4、 样品批号： 5、 考察项目：性状、鉴别、溶散时限、水分、含量测定、微生物检查。 6、 考察条件：温度37~40℃ 相对湿度：75% 7、测定方法：六味地黄丸质量标准及中国药典2005年一部。 8、试验设备： 名称 用途 鼓风干燥箱 水分测定 电子分析天平 检查及含量测定 高效液相色谱仪 含量测定 崩解仪 崩解时限 培养箱 微生物限度检测 薄层扫描仪、紫外灯 鉴别 恒温培养箱 加速试验 9、检验结果 项 结 目 果 批 号 性 状 水分 % 崩解时限(min) 鉴 别 含量（%） 微生 物 限度 应显山药、山茱萸显微特征 应检出丹皮酚 丹皮酚 熊果酸 030601 0月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.4 56 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.19 0.031 符合 规定 1月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.3 56 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.17 0.033 符合 规定 2月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.5 55 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.18 0.031 符合 规定 3月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.5 57 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.17 0.029 符合 规定 6月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.4 59 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.18 0.029 符合 规定 12月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.5 59 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.17 0.028 符合 规定 030602 0月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 4.8 58 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.19 0.030 符合 规定 1月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 4.9 57 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.18 0.030 符合 规定 2月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 4.7 58 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.19 0.029 符合 规定 3月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 4.9 58 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.17 0.030 符合 规定 6月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 4.8 60 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.17 0.028 符合 规定 12月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 4.7 60 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.18 0.029 符合 规定 030603 030603 0月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.2 53 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.18 0.030 符合 规定 1月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.4 52 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.18 0.029 符合 规定 2月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.4 55 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.16 0.029 符合 规定 3月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.3 54 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.18 0.029 符合 规定 6月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.3 56 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.18 0.027 符合 规定 12月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.4 55 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.17 0.028 符合 规定 二、稳定性长期试验 1、 样品来源：本公司研究所 2、 样品规格：每瓶装200丸 3、 样品包装：固体药用塑料瓶 200丸/瓶 4、 样品批号： 3 5、 考察项目：性状、鉴别、溶散时限、水分、含量测定、微生物检查。 6、 考察条件：温度37~40℃ 相对湿度：75% 7、 测定方法：六味地黄丸质量标准及中国药典2005年一部。 8、 试验设备 名称 用途 鼓风干燥箱 水分测定 电子天平 检查及含量测定 高效液相色谱仪 含量测定 崩解仪 崩解时限 培养箱 微生物限度检测 薄层扫描仪、紫外灯 鉴别 9、检验结果 项 结 目 果 批 号 性 状 水分 % 崩解时限min 鉴 别 含量g/mg 微生 物 限度 应显山药、山茱萸显微特征 应检出检出丹皮酚 丹皮酚 熊果酸 030601 0月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.4 56 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.19 0.031 符合 规定 1月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.3 55 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.19 0.030 符合 规定 2月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.6 55 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.17 0.030 符合 规定 3月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 506 58 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.18 0.029 符合 规定 6月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.4 57 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.19 0.030 符合 规定 12月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 5.5 60 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.17 0.029 符合 规定 18月 24月 030602 0月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 4.8 58 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.19 0.030 符合 规定 1月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 4.8 58 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.18 0.031 符合 规定 2月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 4.8 58 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.19 0.030 符合 规定 3月 本品为棕褐色的浓缩丸；味微甜、酸、略苦 4.9 60 显山药、山茱萸显微特征 检出丹皮酚 0.08 0.031