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葛根散等3首解酒方对乙醇致小鼠急性肝损伤的保护作用

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葛根散等3首解酒方对乙醇致小鼠急性肝损伤的保护作用 7 第 1 2 卷 第 4 期 2010 年 4 月 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM Vol. 12 No. 4 Apr . ,2010 葛根散等3首解酒方对乙醇致小鼠急性肝损伤的保护作用 杨 柱,田维毅,王文佳,韩 洁 (贵阳中医学院,贵州 贵阳 550002) 摘 要 :目的 :考察并比较葛根散等3首解酒方剂对乙醇致小鼠急性肝损伤的保护作用,为进一步研发与应用 提供依据。方法 :制备醉酒小鼠模型,采用各方剂大、中、小...
葛根散等3首解酒方对乙醇致小鼠急性肝损伤的保护作用
7 第 1 2 卷 第 4 期 2010 年 4 月 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM Vol. 12 No. 4 Apr . ,2010 葛根散等3首解酒方对乙醇致小鼠急性肝损伤的保护作用 杨 柱,田维毅,王文佳,韩 洁 (贵阳中医学院,贵州 贵阳 550002) 摘 要 :目的 :考察并比较葛根散等3首解酒方剂对乙醇致小鼠急性肝损伤的保护作用,为进一步研发与应用 提供依据。方法 :制备醉酒小鼠模型,采用各方剂大、中、小剂量灌胃干预,以蒸馏水为对照,实验动物TBA、 ALT、AST、GSH、MDA、肝脏系数等指标,并比较分析各方对乙醇致急性肝损伤的保护效果。结果 :与正常对照组 比较,模型对照组小鼠各项指标有显著改变(P<0.01);与模型对照组比较,葛根散、葛花解酲汤、石膏汤能明显改善 小鼠血清TBA、ALT、AST和小鼠肝组织GSH、MDA水平(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,只有葛根散大剂量组 小鼠肝脏系数明显降低(P<0.01);各项指标改善幅度最大的情况集中在葛花解酲汤或葛根散,其TBA、ALT、GSH 等指标与石膏汤比较具有显著差异(P<0.01)。结论 :酒精可导致小鼠细胞破坏和脏器肿胀明显,3首方剂对稳定肝 细胞,减少肝细胞破坏具有重要作用,葛花解酲汤和葛根散对乙醇导致小鼠急性肝损伤的保护作用比石膏汤强。 关键词 :葛根散 ;葛花解酲汤 ;石膏汤 ;肝功能 ;实验研究 中图分类号 :R285.5 文献标识码 :A 文章编号 :1673-842X (2010) 04- 0007- 03 收稿日期 :2009-10-22 基金项目 :贵州省科技厅基金项目(黔科合J字[2008]2290);贵州省省长专项基金项目(黔科合专字[2008]64号) 作者简介 :杨柱(1964-),男,贵州贵阳人,教授,硕士生导师,博士,主要从事中西医结合研究。 Protective Effect of Three Jiejiu Recipes Against Acute Liver Injury Induced by Ethanol YANG Zhu, TIAN Wei-yi, WANG Wen-jia, HAN Jie (Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550002, Guizhou, China) Abstract :Objective: This study is conducted to examine and compare the protective effect of three Jiejiu recipes against acute liver injury induced by ethanol for the development and application in practice. Methods :After the establishment of mice drunkenness experiment model, mice were lavaged by three varying Jiejiu recipes of high-, medium-, and low-dosage, respectively, with distilled water treatment as control. The TBA, ALT, AST, GSH, MDA, liver index and other indexes are measured. The protective effect of three Jiejiu recipes against acute liver injury induced by ethanol are also compared. Results :All index in model control group mice were significant difference to that in control (P<0.01). Contents of TBA, ALT and AST in serum and the levels of GSH and MDA from liver tissue were significantly amended compared with control (P<0.01 or P<0.01). The coefficients of liver from the Pueraria powder group treated with large- dosage were significantly lower (P<0.01) than that in model group mice. Pueraria powder or Gehua Jiechen decoction had the most significant effect on TBA, ALT, GSH levels of experimential mice.Conclusion: 生,失于温通经脉则也易成瘀。在此基础上,偶遇各 种诱因,则内风旋动,或风火相煽,气血并逆,或痰瘀 互结,引发中风[7-9]。由于缺血性中风的基本病机是 肾虚痰瘀,所以补肾化痰通络法就成为治本之法。 在具体应用时,根据该症以肾阴(精)虚为主、兼有 轻度肾阳(气)虚和不同程度痰瘀存在的病机特点, 治疗应以滋肾填精为主,并视病情佐以温肾、化痰、 通络,临床经典方剂有六味地黄丸等。 中医脑病治法框架不仅给传统的中医脏腑辨 证补充了新的,而且也为现代中西医临床提供 新的思路和方法。如可以应用于老年痴呆、中风, 还可与应用于帕金森氏病、脑外伤、癫痫等[10],均多 属肾虚,肾阴亏耗,可导致心火独亢 ;木失所荣,中 风、眩晕、震颤等脑病随之而生。肾阳虚衰,脾阳不 足,失其健运,痰湿内生 ;血虚气弱,血脉凝滞,虚中 挟淤,从而形成老年脑病本虚标实之病机。故以 “肾 藏精,精生髓,脑为髓海”和“肾精命火阴阳互根” 为理论基础的补肾法防治老年脑病,具有重要意 义。◆ 参考文献 [ 1 ] 胡聪, 曾祥国, 王米渠.试论“肾充于脑”的物质基础[ J ].长春 中医学院学报, 1997, 13 ( 1 ): 1. [ 2 ] 郑湘瑞.肾气亏虚与缺血性中风[ J ].中华医学实践杂志, 2005, 4 ( 5 ): 451. [ 3 ] 何华, 王桂香.老年期虚损痰瘀病机初探[ J ].陕西中医, 2003, 24 ( 12 ): 1 101. [ 4 ] 张茂林, 段建平, 张世益, 等.兔脑血管病模型下丘脑-垂体- 肾上腺皮质轴功能改变的观察研究[ J ].脑与神经疾病杂志, 1996, 4 ( 3 ): 139. [ 5 ] 严石林, 王米渠, 吴斌, 等.肾虚与补肾的基因研究态势分析 [ J ].中医药学刊, 2002, 20 ( 5 ): 627. [ 6 ] 俞晓飞, 魏江磊, 王左.中风急性期运用扶正法的理论依据与 临证实践[ J ].中医药学刊, 2004, 22 ( 7 ): 1 246. [ 7 ] 李国菁, 严浩成, 王行宽.试述肾与脑之关系——也谈缺血性 中风从肾论治[ J ].中医药学刊, 2005, 23 ( 6 ): 1040. [ 8 ] 付先军.滋补肝肾法治疗中风后遗症源流探析[ J ].光明中医, 2004, 19 ( 4 ): 15. [ 9 ] 李杰, 张国, 肖开提.活血化瘀法治疗缺血性中风探讨[ J ].新 疆中医药, 2005, 23 ( 3 ): 1. [ 10 ] 刘茂才,刘晓俊.中医脑病证治思路[ J ].现代中医药,2004 ( 2 ) :1-6. · 论著聚焦 · 8 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 2 卷 过度饮酒已成为损害人体健康的重要因素, 肝脏是酒精损害最主要的脏器。随着饮酒量的 增加和饮用时间的延长,酒清对肝脏的危害按照 “酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝硬化”三 部曲逐渐发展 ;研究明,通过影响肝脏代谢,使 肝细胞膜表面的脂质成分过度氧化,从而损伤肝 细胞膜,导致肝细胞破坏,是酒精损害肝脏的重 要环节[1]。祖国医学对酒伤防止方面具有悠久的 历史。在前期研究工作中,笔者通过对比研究初 步选择出葛根散(金·张子和《儒门事亲》)、石 膏汤(解酒验方)、葛花解酲汤(元·李东垣《脾 胃论》)等3个经方/验方具有较好的醒酒防醉 和干预血乙醇作用(另文发表),本研究通过考察 上述方剂对实验小鼠总胆酸(TBA)、谷丙转氨酶 (ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷胱甘肽(GSH)、丙 二醛(MDA) 、肝脏系数等指标的影响,比较这些 方剂对乙醇致酒精性肝功能损伤的保护作用,为 进一步研发和临床应用提供依据。 1 材料与方法 1.1 实验动物 SPF级昆明雄性小鼠,体重18~22g, 由上海斯莱克实验动物有限公司提供,许可证 号 :SCXK(沪)2007-0005。 1.2 主要仪器 AB135-S型梅特勒托利多电子天 平(梅特勒托利多上海公司);CL8000型全自动生化 分析仪(日本岛津);TG16-WS型低温离心机(中国 湘仪)。 1.3 试剂与药材 56%(V/V)红星二锅头白酒(北 京红星股份有限公司,批号090309);ALT、AST、 GSH、MDA、TBA检测试剂盒均购自南京建成生 物工程研究所。实验方剂包括葛根散(金·张子 和《儒门事亲》)、石膏汤(解酒验方 :石膏12g,葛 根10g,干姜6g)、葛花解酲汤(元·李东垣《脾胃 论》),组方药材购自上海同仁堂大药房,按原方比 例制备水煎剂(生药浓度为1g/mL)备用。根据动 物药理实验用药折算方法,以成人常规用量折合 实验小鼠用药量。所得实验小鼠用大、中、小剂量 分别是 :葛花解酲汤为0.4、0.2、0.1g生药/10g体 重 ;葛根散为0.2、0.1、0.05g生药/10g体重 ;石膏 汤为0.1、0.05、0.025g生药/10g体重。实验前用蒸 馏水按0.25mL药液/10g体重给药体积调整水煎 剂浓度。 1.4 动物分组与处理方法 根据前期研究确定的 灌酒剂量和时长,并参照文献方法[2]。实验小鼠随 机分为11组,每组10只,分别为正常对照组、模型 对照组、各给药大、中、小剂量组。给药组分别以不 同剂量中药水煎剂灌胃,体积为0.25mL/10g,每天 1次,正常对照组和模型对照组代以等量蒸馏水 ; 30min后,各给药组和模型对照组用56%(V/V)红星 二锅头白酒灌胃,体积为0.15mL/10g,每天1次,正 常对照组代以等体积蒸馏水。连续灌胃10天。所 有动物常规饲养。 1.5 测定指标 末次灌胃12h后开始禁食(不禁 水),24h后眼眶采血,低温离心,取上清测定 ;采血 后,快速断颈处死,取肝脏右叶组织约0.5g,在预 冷为4℃的生理盐水中漂洗,滤纸小心拭干,用生 理盐水制成10%肝组织匀浆,低温离心,取上清待 测。血清ALT、AST和TBA,按试剂盒要求进行测 定 ;肝组织匀浆MDA和GSH,按试剂盒要求进行测 定。 1.6 统计分析 所有数据输入计算机用spss13.0统 计软件进行统计,计算结果以均数±差(x—±s) 表示。组间采用t检验。 2 结 果 由于本研究是对各方保肝效果的对比研究,所 以在比较各项指标时,以各复方最佳效果剂量组作 为参比组(以下描述都是针对最佳效果剂量),有关 实验结果如下。 2.1 小鼠血清TBA检测结果 见表1,与模型组比 较,3首方剂在一定剂量下都能显著降低小鼠血清 TBA(P<0.01);其中,葛花解酲汤、葛根散一定剂量 组与正常对照组接近(P>0.05);尤其以葛根散大剂 量组小鼠血清TBA水平恢复性降低最明显,明显低 于石膏汤(P<0.01)。 2.2 小鼠血清ALT AST检测结果 见表1,与模型 组比较,3首方剂在一定剂量下都能显著降低小鼠 血清ALT、AST(P<0.01);其中,葛花解酲汤、葛根 散一定剂量组ALT(葛根散除外 :P<0.01)、AST的 与正常对照组接近(P>0.05);尤其以葛花解酲汤 大剂量组小鼠血清ALT水平恢复性降低最明显, 明显低于葛根汤和石膏汤最佳效果组(P<0.05或 P<0.01)。 表1 3首解酒方对小鼠血清TBA ALT AST干预作用比较(x—±s) 组别 n TBA(μmol/L) ALT(U/L) AST(U/L) 正常对照组 9 1.69±0.55c 58.11±8.17c 70.63±11.41c 模型对照组 10 5.73±0.723) 188.21±13.103) 147.16±16.913) 葛花解酲汤 大剂量组 8 2.23±0.38 71.90±11.07 ▲△c1) 83.78±12.29 中剂量组 10 2.21±0.66△c1)§ 73.21±14.54 80.60±9.18▲△c1) 小剂量组 9 3.79±0.41 119.67±9.88 109.27±9.72 石膏汤 大剂量组 9 4.26±0.41 △c3)§§§ 102.77±10.41△c3)§§§ 93.47±11.85△c2)§ 中剂量组 8 4.89±0.57 141.07±12.73 132.80±8.76 小剂量组 10 4.82±0.63 175.38±13.96 139.52±11.33 葛根散 大剂量 9 2.09±0.42 ▲△c1) 91.26±9.44△c3)§§ 84.81±11.57△c1)§ 中剂量 8 3.17±0.59 108.84±13.96 92.16±12.68 小剂量 10 4.25±0.56 131.60±15.29 139.46±13.62 注 :n为各组除去死亡动物之后实际检测数(动物死亡 原因包括醉死和操作意外死亡);▲本指标最佳效果方剂 ;△ Alcohol treatment can damage cell and organ swelling in experimential mice clearly. The above three recipes can reduce acute liver injury induced by ethanol in mice, the Pueraria powder and Gehua Jiechen decoction had some protective effects on hapatic injury, and their effects were superior to gypsum soup treatment. Key words :pueraria powder; Gehua Jiechen decoction; gypsum soup; liver function; experimential research 9 1 2 卷 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 本方剂本指标最佳效果剂量 ;与模型对照组比较 :aP>0.05, bP<0.05,cP<0.01 ;与正常对照组比较 :1)P>0.05,2)P<0.05, 3)P<0.01 ;与本指标最佳效果方剂比较 :§P>0.05,§§P<0.05, §§§P<0.01。 2.3 小鼠肝组织MDA GSH检测结果 见表2,与模 型组比较,3首方剂在一定剂量下都能显著恢复性 升高小鼠肝组织MDA、GSH和恢复性降低小鼠肝 组织MDA(P<0.05或P<0.01);其中,葛根散一定 剂量组小鼠肝组织MDA、GSH与正常对照组接近 (P>0.05) ;葛根散一定剂量组小鼠肝组织GSH和 MDA水平恢复最明显,其GSH水平明显高于石膏汤 最佳效果组(P<0.01)。 2.4 小鼠肝脏系数检测结果 见表2,与模型组比 较,只有葛根散大剂量组小鼠肝脏系数有明显差 异(P<0.01),该方与其余2首方剂比较没有差异 (P>0.05);与正常对照组比较,3首方剂均有显著差 异(P<0.01)。 表2 3首解酒方对小鼠肝组织MDA GSH和 小鼠肝脏系数干预作用比较(x—±s) 组别 n GSH(mg/g) MDA(nmol/mg) 肝脏系统 正常对照组 9 88.27±6.33c 2.16±0.34c 0.0387±0.0024c 模型对照组 10 39.71±5.513) 4.47±0.423) 0.0526±0.00493) 葛花解酲汤 大剂量组 8 74.66±6.17 △c2)§ 3.21±0.65△b2)§ 0.0475±0.0032△a3)§ 中剂量组 10 64.74±5.50 3.44±0.57 0.0496±0.0048 小剂量组 9 52.06±6.91 4.11±0.49 0.0531±0.0031 石膏汤 大剂量组 9 55.91±5.64 △c3)§§§ 3.46±0.51△b3)§ 0.0493±0.0040△a3)§ 中剂量组 8 45.30±6.49 3.91±0.64 0.0511±0.0064 小剂量组 10 42.77±5.48 4.06±0.51 0.0524±0.0033 葛根散 大剂量 9 76.39±6.21 2.89±0.61 ▲△c1) 0.0437±0.0030▲△c3) 中剂量 8 79.87±5.93▲△c1) 3.50±0.49 0.0490±0.0054 小剂量 10 45.11±5.88 3.91±0.44 0.0519±0.0046 注 :n为各组除去死亡动物之后实际检测数(动物死亡 原因包括醉死和操作意外死亡);▲本指标最佳效果方剂 ;△ 本方剂本指标最佳效果剂量 ;与模型对照组比较 :a P>0.05, b P<0.05,c P<0.01 ;与常对照组比较 :1) P>0.05,2) P<0.05, 3) P<0.01 ;与本指标最佳效果方剂比较 :§P>0.05,§§P<0.05, §§§P<0.01。 3 讨 论 大量尤其是长期大量饮酒对肝脏、脑、心脏、 胃、肾脏等许多脏器都会造成不同程度的损害,由 于酒精经过消化道吸收后主要在肝脏代谢,所以过 度饮酒对肝脏的损害首当其冲。据文献报道,乙醇 急性或慢性中毒导致肝损伤的主要机制之一是通 过激活O2产生氧自由基,导致肝细胞膜脂质过氧 化及肝细胞损伤 ;GSH是人体内抗氧化的重要物 质,它能与自由基直接反应,清除自由基,保护肝细 胞 ;MDA是脂质过氧化的终产物, 它既能反映人体 内氧化反应脂质过氧化程度的强弱,也能作为损害 因子对人体产生进一步损伤[3-4]。ALT和AST在肝 细胞中均有存在,当肝细胞膜受损或细胞坏死时, 便进入血液,通过测定其在血清或血浆中的活性, 即可反映肝细胞受损情况及损伤程度。TBA是由 肝脏合成并分解代谢,从而维持人体胆汁酸的相对 稳定,它的调控是肝脏的一个主要功能。胆汁酸的 生成和代谢与肝脏有十分密切的关系,当肝细胞发 生病变时可引起胆汁的代谢障碍,使进入血中的胆 汁酸含量显著升高,因而血清TBA水平是反映肝 实质损伤的一项重要指标。当乙醇致肝脏损害时, 肝组织炎性肿胀,肝脏重量增加,导致肝脏系数增 大。 实验结果显示(见表1~2)与正常对照组比 较,模型对照组小鼠总胆酸(TBA)、谷丙转氨酶 (ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷胱甘肽(GSH)、丙二 醛(MDA)、肝脏系数均有显著改变(P<0.01),提示 酒精导致小鼠细胞破坏和脏器肿胀明显;3首都能 明显改善小鼠血清TBA、ALT、AST和小鼠肝组织 GSH、MDA水平,与模型对照组比较,其差异显著 (P<0.05或P<0.01),提示3首方剂对稳定肝细胞,减 少肝细胞破坏具有重要作用;与模型组比较,只有 葛根散大剂量组小鼠肝脏系数明显降低(P<0.01), 提示处方只有葛根散能改善肝脏肿胀情况,这可能 是因为肝脏肿胀的消除需要更多的时间(有待进一 步实验证实)。实验结果还显示:各项指标改善幅 度最大的情况集中在葛花解酲汤(包括AST、ALT两 项指标)或葛根散(包括TBA、GSH、MDA、肝脏系 数4项指标),其TBA、ALT、GSH等指标与效果较 差的石膏汤比较具有显著差异(P<0.01),提示葛花 解酲汤和葛根散对乙醇导致小鼠急性肝损伤的保护 作用比石膏汤强。 酒精伤害的防治,越来越受到国内外健康工作 者的关注,但至今仍缺乏理想的药物和方法。在我 国,防治酒伤具有悠久的历史,有关酒伤防治的方 药层出不穷。葛花解酲汤、葛根散和石膏汤均为祖 国医药治疗酒伤常用方剂,其中葛花解酲汤和葛根 散为解酒经典名方。葛花解酲汤出自元代大家李 东垣的脾胃论《脾胃论》,由青皮、木香、橘皮、人参、 猪苓、茯苓、炒神曲、泽泻、生姜、白术、豆蔻仁、葛 花、砂仁等组成,具有淡渗利湿、消积行滞、扶正养 胃之功,全方完整地体现了李东垣治酒病用散渗结 合,消补兼施的法则,是历代治疗酒病的名方 ;葛根 散出自金代张子和的《儒门事亲》,由甘草、干葛花、 葛根、缩砂仁、贯众各等组成,具有利湿健脾、散毒 解酒之功 ;石膏汤为近代解酒验方,由石膏、葛根、 干姜组成,具有发散解酒、除烦止渴之功。在前期 研究中,笔者通过效果对比(另文发表),筛选出上 述3个方剂具有较好的解酒防醉作用。本文对其肝 脏保护作用的研究结果,初步阐释上述方剂防治酒 伤的部分机制。鉴于肝脏损害在酒精伤害中的突 出地位,上述方剂的保肝作用具有重要意义,这也 为我们进一步深入研究和临床应用提供了依据和 坚定了信心。◆ 参考文献 [ 1 ] 韩婷,井源,吴静. 酒精性脂肪肝的肝损伤机制研究近况[ J ] . 实用肝脏病杂志,2007,10 ( 4 ) :279-282. 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