ELISA和TRUST法检测磷脂类抗体在梅毒诊疗中的应用比较

ELISA 和TRUST 法检测磷脂类抗体 在梅毒诊疗中的应用比较 宋景秋　张葵 　　【摘要】　目的　采用 ELISA 和TRUST 法测定梅毒患者血清中磷脂类抗体的浓度和滴度, 探讨其在梅毒诊疗中的不 同作用。　采用梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验( TPPA )、TRUST、ELISA 法抗心磷脂抗体( ACA )定量法对94 例 梅毒患者、32 例磷脂综合征患者血清进行检测。结果　94 例T PPA 阳性患者中, T RUST 阳性83 例, ACA 定量( EL ISA )阳 性48例。T RUST 阳性率88. 37% , ACA 定量( ELISA )阳性率51. 06%。32 例磷脂综合征患者血清TRU ST 滴度最高为1∶ 2,其他多数为阴性; ACA 均值为235 U / ml。结论　( 1) ACA 定量( EL ISA )作为梅毒初筛试验敏感度低于T RUST 试验。 ( 2) EL ISA 法测得 ACA 浓度和 TRUST 滴度与梅毒的病程呈平行关系, T RUST 滴度升高明梅毒螺旋体大量增殖, EL ISA 法所测ACA 升高提示组织细胞破坏增加。( 3)在疗效观察中,特别是晚期梅毒患者, ELISA 法所测ACA 浓度的敏感 度高于T RUST 滴度。 　　【关键词】　梅毒　　抗心磷脂抗体　　T RUST 法　　ELISA 法 　　【中图分类号】　R377+ . 1　　R446. 62　　【文献码】　A　　【文章编号】　1671-2587( 2006) 02-0123-03 Comparison of ELISA and TRUST on Detecting the Anticardiolipin Antibody Concentrations During the Diagnosis and Treatment of Syphilis. SON G J in-q iu, ZH A N G K ui.Medical L oboratory Center , Af f iliated Gulou H osp ital. N anj ing M edi- cal Colledge, N anj ing 210008. 　　【Abstract】　Objective　T o Detect the anticardiolipin ant ibody ( ACA ) concentr ations by EL ISA and TRUST in serum of the syphilis suffer s, and to discuss the different inst ructed signification dur ing the diagnosis and tr eatment in syphilis. Methods　T he T PPA , T RUST and ACA quantitativ e analysis techniques w ere adopted t o examine serum samples of 94 syphilouses and 32 phospholipid syndrom e suffer s. Results　 Of 94 samples of TPPA positive, ther e were 83 samples TRUST posit ive , 48 samples ACA quantification posit ive . TRUST positiv e r atio was 88. 37% , ACA quantification positiv e ra tio w as 51. 06% ; the average o f serum ACA o f 32 phospho lipid syndrome suffer s w as 235 U / ml. Conclusion　( 1) A s the primary syphilis scr eening methods, ACA quant ification analy sis's sensitivit y is low er than TRUST 's. ( 2) Though t he development o f ACA and TRUST concentra tions is parallel dur ing the syphilouses sickening per iod, they show differ ent meanings: the hoist of T RUST account for the pr o lifer ate o f syphilis lepto spira, the hoist of ACA clue t o t he incr ease of the br eakage o f tissue cell . ( 3) T he curativ e effect obser vation show s, ACA has the higher sensitivit y than T RUST method, especially for the later syphilouses. 　　【Key words】　Syphilis　　Anticardiolipin antibody ( ACA )　　TRUST　　ELISA 　　梅毒患者体内的磷脂类抗体是指一组能与心 磷脂- 卵磷脂抗原结合的异质型抗体。以心磷脂为 靶抗原的抗体至少包括抗心磷脂抗体、梅毒血清反 应素、狼疮抗凝物质等 [ 1]。ELISA 法所测抗心磷脂 抗体( ACA)为组织细胞的心磷脂成分刺激机体所 产生的抗体;而T RU ST 试验为梅毒初筛试验的一 种,其检测对象为“反应素”, 二者检测的都是针对 磷脂等成份的抗体, 但作用的靶抗原可能有所区 别[ 2]。笔者用ELISA和TRUST两种方法检测梅毒 　　作者单位: 210008　南京大学医学院附属鼓楼医院医学检验中 心 　　作者简介:宋景秋( 1967- ) ,男,江苏人,主管技师,主要从事血 清免疫学工作, ( E-mail) songm imi@ sina. com。 患者ACA ,以发现两种方法所测磷脂类抗体在梅 毒病程中所揭示的不同病理改变。 对象与方法 1　研究对象　94例初诊和复诊 TPPA 阳性患者, 均有不洁性交史或夫妻一方有性病史。32例磷脂 综合征患者, 均无梅毒感染病史, T PPA 为阴性。 2　仪器和方法　ACA 定量试剂盒由欧蒙公司提 供( Ant i-Car diolipin ELISA IgA GM ) , T RU ST 试 剂由上海华盛提供, TPPA 为日本富士通试剂, 酶 标仪为Benchmar k( BIO-RAD公司)。试验均设阴 性、阳性对照或正常人对照。操作及判断按试剂盒 说明书进行。阳性标准参考试剂盒说明。 ·123·临床输血与检验　2006年 4月第 8卷第 2期 3　统计学处理　采用 � 2检验。 结　　果 　　94例T PPA阳性者中, T RU ST 阳性83例,阳 性率88. 37% , ELISA 检测ACA 阳性为48例,阳性 率51. 06%。ELISA 检测ACA 浓度随T RU ST 滴度 升高而升高,两者呈平行关系。以T RUST 滴度分 组, ELISA 法检测 ACA 浓度, 结果组间差异有显 著性。32例磷脂综合征患者血清T RU ST 滴度最高 为1∶2,其他多数为阴性; ACA 均值是235 U / ml。 组间比较的差异均有显著性( P< 0. 01)。见表1。 表 1　 94例患者 TRUST 滴度、ACA 值 TRU ST 滴度( 1∶X) 1组: X< 32( n= 36) 2 组: 64≥X≥32( n= 22) 3组: X> 64( n= 36) * ACA 均值( RU / ml) 4. 75 16. 1 76. 5 ACA 阳性率( % ) 0 63. 6 94. 4 　　* 三组两两比较: P < 0. 01 讨　　论 　　由于心磷脂、卵磷脂不但见于哺乳动物正常组 织细胞中, 也是构成大约 10%螺旋体脂质的物 质[ 3] ,因而无论是ELISA 法定量,还是T RUST 试 验都是非特异性的。二者检测的都是针对磷脂等脂 质成份的抗体,但检测时包被抗原的侧重可能有所 不同[ 4]。本实验中TPPA 阴性的ACA 综合征患者 TRUST 试验大多为阴性,其中4例ACA均值高达 349,而TRUST 滴度仅为1∶2。另外, T PPA 阳性 梅毒患者T RU ST 滴度达1∶32时, ACA均值却基 本正常。这些结果验证了两种方法所产生的差异是 运用抗原不同所致。本试验结果与相关报道一 致[ 1] ,但亦有不同报道 [ 5]。本研究中T PPA 阳性患 者中 T RUST 阳性为 88. 37% ,明显高于 ACA 的 51. 06%。作为梅毒初筛, T RU ST 法优于 ACA ELISA 法定量检测,与国内文献报道有较大的差 异[ 6]。 　　研究发现在早期的梅毒患者中, 在感染局部出 现的体液免疫和细胞免疫反应, 对梅毒螺旋体的清 除起重要作用, 可使症状缓解或消失, 此时因没有 大量的细胞破坏, 故并无ACA 的明显升高,而检测 TRUST 可能为阳性, 表明此时已有梅毒螺旋体的 增殖。当病程进入二期梅毒后, 在梅毒疹和淋巴结 中有大量螺旋体浸润, 引起细胞免疫反应,导致组 织损害,此时会出现血清 ACA 定量和TRUST 滴 度的明显升高。在本试验中, TRUST 滴度1∶32以 上组ACA 浓度出现明显升高( P< 0. 01)。由此可 知ACA 浓度与感染过程相平行,一期梅毒早期为 阴性, 二期及三期时明显升高, 与大多数感染性疾 病中, 随着免疫应答的增强, 临床症状消退不同[ 7]。 虽然TRUST 滴度的升高与ACA 浓度的升高相平 行,且升高程度与疾病进程相平行[ 1, 5] ,但二者提示 的病理变化是不同的, T RUST 滴度升高,表明梅 毒螺旋体大量增殖, ACA 升高则提示组织细胞破 坏增加,与梅毒的两个基本病理变化相一致[ 8]。 　　本研究还发现, TRUST 滴度下降到 1∶32以 下时, ELISA 法所测ACA 已转为正常,可能提示 在梅毒低增殖时并无明显的组织细胞破坏。经有效 治疗的梅毒患者T RUST 滴度下降较慢,与梅毒螺 旋体在体内清除较慢有关。而ELISA法所测ACA 浓度的下降则较为快速,可能与梅毒螺旋体对淋巴 结的浸润受到抑制有关。因此在治疗过程中, ELISA 法所测 ACA 的快速下降提示治疗的有效 性,这是比 TRUST 滴度监测疗效更为敏感的指 标。尤其在晚期梅毒的疗效观察中有较重要的意 义, 也就是说晚期梅毒患者经充分治疗, TRUST 试验仍可为阳性,即出现血清抵抗,而ELISA 法所 测ACA 已显著下降,这时可认为治疗有效。 　　总之,在梅毒筛查中检测ACA 浓度, ELISA 法没有 TRUST 滴度敏感, 与国内有些报道不 同 [ 6]。TRUST 滴度升高, 表明梅毒螺旋体大量增 殖, ELISA 法所测ACA 升高则提示组织细胞破坏 的增加。ELISA 法所测ACA 浓度、TRUST 升高与 梅毒发展进程相平行。在梅毒疗效观察中, 测定 ACA 浓度时, ELISA 法比TRUST 滴度检测更为 敏感。TRUST 滴度升高,表明梅毒螺旋体大量增 殖, ELISA 法所测ACA 升高则提示组织细胞破坏 增加。此结果与梅毒的两个基本病理变化相一致。 ·124· J Clin T ransfus Lab M ed, Apr . 2006, Vo l 8, No . 2 ·研究报告· XE-2100血细胞分析仪异常细胞报警信息的可信性分析 司力　凌华志　卢敏　杨百侠　汪安勇 　　【摘要】　目的　探讨 Sysmex XE-2100 血细胞分析仪在白细胞分类时对异常细胞报警信息的可信性。方法　通过对 200 例XE-2100 血细胞分析仪报警有原始细胞( Bla st s)、未成熟粒细胞( Imm Gran)、异形淋巴细胞( At ypical Ly)、有核红细 胞( NRBC)的全血标本作手工血涂片,经瑞特—姬姆萨染色后用显微镜目测法分类(金标准)比较。以无异常报警的200 例 标本为对照组, 分析仪器对异常细胞报警的可信性。结果　仪器Blast s、Imm Gran、Atypica l Ly和NRBC 报警的阳性预测值 分别为70. 3%、63. 7%、62. 0%和60. 0%。结论　XE-2100 血细胞分析仪对异常细胞的检出性能较高,检测结果有异常细胞 报警的标本均应该进行手工涂片染色、显微镜复检。 　　【关键词】　血细胞分析仪　　异常细胞　　手工分类 　　【中图分类号】　R446. 11+ 3　　【文献标识码】　A　　【文章编号】　1671-2587( 2006) 02-0125-02 　　近年来, 五分类血液细胞分析仪陆续进入医院 检验科,大大减少了对显微镜目测白细胞分类计数 的需求,减轻了劳动强度,显著提高了检测效率。应 用Sysmex XE-2100型全自动血细胞分析仪能将白 细胞分为嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒 细胞、淋巴细胞、单核细胞5类, 当疑有异常细胞时 自动提示有原始细胞( Blasts)、未成熟粒细胞( Imm Gran )、异型淋巴细胞( Atypical Ly )、有核红细胞 ( NRBC)等。为探讨该仪器对异常细胞提示信息的 可信度,笔者对200例有异常细胞报警及200 例无 异常报警的血标本进行手工推片染色镜检,评价该 仪器对外周血异常细胞的识别能力。现将结果报告 如下。 　　作者单位: 230022　合肥,安徽医科大学第一附属医院检验科 　　作者简介:司力( 1967- ) ,男,安徽巢湖人,主管技师,主要从事 临床血液检验工作, ( Tel) 13956023353。 材料与方法 1　仪器和试剂　日本Sysmex 公司产XE-2100型 全自动血液分析仪及其配套试剂; OLYMPU S 双 目显微镜;瑞特—姬姆萨染液。 2　标本来源　采集本院住院患者静脉血2 ml ,用 EDT A-K 2抗凝。选择仪器检测结果有Blasts、Imm Gr an、Atypical Ly、NRBC 报警的标本200份及无 异常报警的标本200份。 3　方法　仪器法检测按XE-2100血细胞分析仪的 操作手册进行, 4 h 内检测完毕。手工显微镜检测按 《全国临床检验操作规程》[ 1]进行,对仪器法提示有 异常细胞报警的标本作血涂片瑞特—姬姆萨染色, 用油镜分类计数复检。结果按文献 [ 2]判断: 参考范 围为异型淋巴细胞< 2%, 杆状核中性粒细胞< 5% ,幼稚细胞< 0,有核红细胞< 0。仪器提示有异 常细胞且镜检证实者为“真阳性”,仪器提示有异常 参　考　文　献 1　郑占才, 张荣富,白彦萍,等. ELISA 法检测梅毒患者血 清中抗心磷脂抗体[ J] . 中国麻风皮肤病杂志, 2003, 19 ( 4) : 307-309. 2 　 Schultz DR . Antiphospho lipid ant ibodies: basic im- munolo gy and assay s [ J ] . Semin A r thritis Rheum, 1997, 26( 5) : 724-739. 3　翁孟武,张学军,主编.免疫皮肤病学基础与临床[ M ] . 上海:科学技术文献出版社 , 1998. 385. 4　蒋小青, 宋萍. 胎儿生长受限与孕妇血清抗心磷脂抗体 的相关性探讨[ J] .东南大学学报, 2004, 23( 1) : 52-53. 5　Santig ao M , Mar tinelli R , Ko A , et al. Ant i-�2-g ly co- prot ion I and anticardiolipin ant ibodies in leptospir osis, syphilis and kala-azar [ J] . Clin Exp Rheumato l, 2001, 19( 4) : 425-430. 6　梁虹, 周心房,熊腊元,等. 抗心磷脂抗体的检测在梅毒 诊断中的应用[ J] .中国皮肤病杂志, 1999, 15( 4) : 168. 7　李天星.梅毒试验诊断及临床意义[ J] . 现代临床免疫学 检验, 2001, 14( 7) : 610-616. 8　吴志华,主编. 皮肤性病学[ M ] . 广州:广东科技出版社, 2000. 115. (收稿日期: 2005-01-25) (校对:王虹) ·125·临床输血与检验　2006年 4月第 8卷第 2期