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微生物实验问题与答案

2012-06-13 8页 doc 60KB 101阅读

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微生物实验问题与答案微生物实验问题与答案 一、光学显微镜的操作及细菌、放线菌个体形态的观察 1、为什么油镜的放大倍数比普通物镜大? 答:油镜能减少光的折射,进而提高视野的亮度;通过提高显微镜的数值口径增加显微镜的分辨力。 2、数值口径的表达公式? 答案:N.A=n ×sin α,n为介质折射率;α为光线最大入射角的半数。 3、显微镜数值口径与分辨力的关系? 答案:分辨力是指显微镜能辨别两点之间最小距离的能力,它与光的波长成反比,与数值口径成正比。 4、油镜的使用与普通物镜有何不同? 答案:油镜必须借助于光折射率等于或接近于玻璃的试剂,...
微生物实验问题与答案
微生物实验问题与答案 一、光学显微镜的操作及细菌、放线菌个体形态的观察 1、为什么油镜的放大倍数比普通物镜大? 答:油镜能减少光的折射,进而提高视野的亮度;通过提高显微镜的数值口径增加显微镜的分辨力。 2、数值口径的达公式? 答案:N.A=n ×sin α,n为介质折射率;α为光线最大入射角的半数。 3、显微镜数值口径与分辨力的关系? 答案:分辨力是指显微镜能辨别两点之间最小距离的能力,它与光的波长成反比,与数值口径成正比。 4、油镜的使用与普通物镜有何不同? 答案:油镜必须借助于光折射率等于或接近于玻璃的试剂,如香柏油等才能使用,而普通物镜则不需要;油镜是由100×物镜与香柏油构成,而普通物镜则限于10×物镜、40×物镜等。 5、使用油镜时应特别注意什么? 答案:上下调节镜头时应使用微螺旋,否则容易损坏镜头;应使油镜始终浸泡在香柏油中,否则就不是油镜;使用完毕后,必须用搽镜纸沾取二甲苯等有机溶剂搽去残留的油迹,否则会玷污油镜。 二、微生物染色 1、单染色的原理是什么? 答案:主要基于微生物细胞能与各种染料进行不同程度地结合。 2、单染色过程中,为什么干燥固定? 答案:因为通过干燥可以使菌体蛋白变性,细胞质凝固,进而可以使菌体紧密地附着于载玻片表面。 3、单染色过程中,为什么水洗时水流要缓慢地从载玻片上端流下? 答案:因为如果水流直接冲洗有菌部位,容易使菌体被冲洗掉。 4、为什么载玻片要完全干燥后,才能使用油镜? 答案:因为香柏油与水不相溶,容易造成光线发生折射或散射,一方面无法构成油镜,另一方面也会降低视野的亮度。 5、革兰氏染色的原理是什么? 答案:对于G+细菌来说,当用乙醇脱色时,由于肽聚糖含量高,网孔小,再加上脂量低,所以乙醇脱色后,进一步地缩小了网孔,结晶紫-碘复合物无法脱出,第二次用番红染色时无法着色,进而呈紫色;对于G-细菌来说,当用乙醇脱色时,由于肽聚糖含量低,网孔大,再加上脂量高,所以乙醇脱色后,进一步地扩大了网孔,结晶紫-碘复合物被脱出,第二次用番红染色时着色,进而呈红色。 6、革兰氏染色时,为什么要加碘液? 答案:碘可以与结晶紫染料形成较大的复合物,从而可以阻止结晶紫向细胞外渗透;另一方面也可以增加结晶紫与细胞质的亲和力。 7、革兰氏染色时,为什么要用酒精冲洗? 答案:加酒精是为了溶解细胞壁中的脂类和脱去细胞内的有机染料。 8、革兰氏染色时,为什么不能涂片太厚? 答案:涂片太厚,容易使菌体重叠,造成假阳性。 9、革兰氏染色时,为什么说脱色是最关键的一步? 答案:如果脱色时间较短,则容易使革兰氏阴性细菌脱色不完全,造成假阳性;如果脱色时间较长,则容易使革兰氏阳性细菌内的染料被脱出,造成假阴性。 10、革兰氏染色时,如何证明你的染色操作是正确的? 答案:将革兰氏阳性细菌—葡萄球菌与革兰氏阴性细菌--大肠杆菌制成混合涂片,经革兰氏染色后,如果葡萄球菌呈紫色,而大肠杆菌呈红色,则说明染色操作是正确的。 三、无菌操作(补充) 1、无菌操作过程中,为什么试管或三角烧瓶在开塞或回塞之前,口部要过火几次? 答案:这样可以烧去管口或瓶口的微生物。 2、开塞后的试管或三角烧瓶口部微生物要平放? 答案:如果口部向上或朝下,则容易通过空气对流污染培养物。 3、接种针接种前后微什么要过火焚烧? 答案:主要防止微生物培养物之间交叉污染,也防止污染操作台面。 四、细菌的鞭毛染色及活细菌的运动性观察 1、细菌的鞭毛染色的原理 答案:细菌的鞭毛较细,在普通光学显微镜下无法观察。但可以通过对鞭毛进行染色,再结合染料堆积使鞭毛加粗,从而便可以在普通光学显微镜下观察鞭毛的形态。一定要充分洗净A液后再加B液,否则背景很脏,影响观察效果。 2、鞭毛染色时,应注意哪些环节? 答案:用新培养的并且转接2-3次的菌种为易,因为老化菌种的鞭毛易脱落;载玻片要干净,防止鞭毛变态;挑菌时应不带培养基;干燥后应尽快染色防止鞭毛脱落。 3、细菌运动性观察时,菌液中的细菌与灰尘颗粒的运动有什么区别? 答案:菌液中的细菌常常会由一个位置运动到另一个位置,而灰尘颗粒的运动属于布郎运动,位置基本不变。 4、一般运动性细菌的运动方式有几种? 答案:细菌运动主要包括直线、波浪或翻滚式运动。 5、如何用悬滴法观察细菌运动? 答案:悬滴法观察细菌运动。取干净的凹玻片与盖玻片个一块,并在盖玻片的四角涂少许凡士林。加一滴变形杆菌菌液于盖玻片中央,并轻轻翻转,使菌滴直对凹玻片凹陷处,轻压于凹玻片上。镜检,观察细菌的运动情况。在观察细菌运动时,应注意区分非菌颗粒与细菌细胞,前者的运动属于原地布朗运动,而后者做移位运动。 五、细菌的芽孢染色与夹膜染色 1、芽孢染色的原理是什么?用单染色可以看到芽孢吗? 答案:由于芽孢壁厚,不易着色,所以须采用着色力强的染色剂,并需加热,以便提高芽孢壁的透性,使染料易于进入菌体。用单染色可以将看到芽孢,但是无色的。 2、芽孢染色加热时,为什么染料不能沸腾? 答案:因为染料沸腾后,容易时菌体从载玻片上脱落。 3、荚膜染色时,为什么荚膜不易着色? 答案:荚膜主要成分是多糖,很难着色,同时水洗时多糖易溶于水,因而只能采用衬托的将背景与菌体染色,而衬托出白色而透明的荚膜。 4、荚膜染色时,为什么不允许加热? 答案:荚膜很薄,加热容易变形。 5、如何观察细菌荚膜? 答案:采用衬托法进行。取干净的普通载玻片,并在载玻片的一端滴加蒸馏水,将巨大芽孢杆菌轻沾于水滴中。加少许墨汁于菌滴中,加盖玻片,轻轻挤压,除去多余的液体。镜检,可以观察到菌体周围的白色荚膜。 六、环境因子对微生物生长的影响 1、pH对微生物生长作用的原理是什么?细菌、真菌和放线菌所需要的最佳pH为多少? 答案:pH对微生物生长作用的原理是:使蛋白质和核酸等大分子物质的电荷发生变化影响微生物活性;影响细胞膜表面电荷,进而影响微生物对营养物质的吸收;改变环境中营养物质的可给性及有毒物质的毒性。细菌要求pH为7.0-7.2,真菌pH自然,放线菌pH为7.2-7.4。 2、重金属对微生物影响的机理是什么? 答案:使菌体变性或与-SH基结合,导致微生物酶失活。 3、氯化钠等盐类对微生物的影响机理? 答案:通过调节微生物细胞的渗透压影响微生物。 七、培养基的配制、消毒、灭菌与土壤微生物分离 1、培养基配制原则是什么? 答案:目的明确;根据微生物的营养需要;注意各种营养物质的浓度配比;要控制具体pH、渗透压、水活度和氧化还原电位;经济。 2、培养基配制应注意什么? 答案:称取药品蛋白胨时要迅速,防止吸潮;培养基融化时要不断搅拌以防烧焦;针对不同的培养基要调节适当的pH;培养基灭菌时应按高压蒸汽灭菌锅的操作过程进行,以免危险发生。灭菌后培养基要及时处理,防止凝固或污染。 3、为什么培养微生物时,平板培养基要倒置? 答案:第一培养基倒置可以防止冷凝水落到培养基表面,使菌落分散开;第二可以防止空气对流,污染培养基。 4、为什么高压蒸汽灭菌效果好? 答案:因为在湿热情况下,湿热的穿透力强,菌体吸收水分使蛋白质容易凝固,而且当蒸汽与菌体接触后冷凝成水时可以放出热量,进而提高锅内的温度。 5、如何使用高压蒸汽灭菌锅? 答案:首先检查灭菌锅内的水是否没过电阻丝,然后放上装有物品的内桶。注意物品不要过多。将盖子上的通气管插入内桶壁上的管槽内,盖上盖子,用对角的方式旋紧螺扣,接通电源,开始灭菌。当压力指针达到0.05KPa时打开放气阀放气,反复放气三次以便排除锅内的冷空气。放气结束后,使指针升到压力为0.1KPa,并通过人为控制电源的开闭,在0.1KPa压力下维持20-30min。灭菌结束后,通过冷却使锅内的压力下降到0.05,打开压力阀放气,待压力为0时,对角旋开螺扣,取出物品即可。 6、分离土壤微生物时,细菌、真菌和放线菌的培养基分别是什么? 答案:分离细菌、真菌和放线菌时分别采用牛肉膏--蛋白培养基、马丁氏培养基和改良高氏一号培养基。 八、细菌的生理生化反应 1、你如何解释淀粉酶是胞外酶? 答案:淀粉酶是胞外酶可以通过观察固体培养基表面的淀粉降解圈或透明圈的大小来解释。 2、糖发酵过程中如何证明有气体产生? 答案:在糖发酵过程中,有些微生物可以利用糖产生有机酸并产生气体,我们可以在发酵管中加入得汉氏小管,如果产气,小管内就会有气泡存在。 3、吲哚实验的原理是什么? 答案:吲哚实验的原理是:某些微生物可以分泌色氨酸酶,该酶将蛋白质中的色氨酸分解为吲哚和丙酮酸,吲哚可以与对二甲基氨基苯甲醛结合,形成红色的玫瑰吲哚,进而证明色氨酸的分解。 4、甲基红实验的原理是什么? 答案:甲基红在pH中性时呈现橘黄色,而在酸性条件下则为红色,所以当葡萄糖被分解产生有机酸时,可以甲基红在酸性条件下则为红色。 5、伏-普实验的原理是什么? 答案:伏-普实验的原理是:该实验是用来检验某些细菌利用葡萄糖时可产生中性末端产物,如丙酮酸,丙酮酸进行缩合、脱羧生产乙酰甲基甲醇,此化合物在碱性条件下能被氧气氧化成二乙酰。二乙酰可以与蛋白胨中精氨酸的胍基作用,生成红色化合物。 6、硫化氢实验原理是什么? 答案:硫化氢实验原理是:某些肠道细菌可以分解含硫有机物,并形成硫化氢,该气体与醋酸铅反应形成黑色的硫化铅沉淀。 九、微生物蛋白酶活力的测定 1、蛋白酶活力测定的原理? 答案:蛋白质或多肽在紫外线275nm波长下具有较大的吸收值,所以可以根据蛋白酶与酪蛋白反应前后的吸光度的差值,经过换算来表示蛋白酶活力的大小。 2、三氯乙酸的作用? 答案:在蛋白酶活力测定过程中,经过酶促反应后,填加三氯乙酸,使蛋白酶失活,终止反应,同时也可以将未反应的蛋白质变性沉淀。 3、预热和酶促反应为什么需要40℃? 答案:因为蛋白酶在40℃下的反应活性最高。 4、为什么用硼酸缓冲液(pH 8)? 答案:因为蛋白酶需要pH 8的反应条件,所以硼酸缓冲液pH 8可以维持pH 条件的稳定性。 5、酶活力? 答案:以1分钟内由酪蛋白释放出的三氯乙酸可溶物在275nm的光密度与1μg酪氨酸相当时所需要的酶单位,用U/ml表示。 十、生长谱法测定微生物营养需求 1、生长谱法测定微生物营养需求? 答案:不同微生物对营养需求不同,将浸有不同营养的滤纸片点植到平板培养基表面,由于营养在培养基中可以扩散,如果微生物可以利用该种营养便可以长出菌落,否则,便无菌落可长。 2、菌悬液制备时为什么要用生理盐水洗涤? 答案:1)0.85%生理盐水与微生物细胞内的盐浓度是等渗的;2)、用生理盐溶液反复洗涤是为了去除原菌液和细胞表面残留的营养,以避免实验误差的产生。 3、接种菌悬液后为什么要预培养1小时? 答案:1)使菌液的水分向培养基中渗透,保证培养基表面较干;2)为了使微生物尽快适应新的生长环境。 十一DNA的提取与电泳 1、DNA提取提取时SDS(十六烷基磺酸钠)的作用? 答案:SDS的主要功能是: 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白。此外,SDS还能与蛋白质结合而沉淀。 2、DNA提取提取时溶菌酶的作用? 答案:溶菌酶是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶,它专一地作用于肽多糖分子中N-乙酰胞壁酸与N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4键,从而破坏细菌的细胞壁,使之松驰而失去对细胞的保护作用,最终使细菌溶解死亡。 3、DNA提取时蛋白酶K的作用? 答案:蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶,它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键,达到降解提取液中蛋白质的目的。 4、DNA提取时酞、氯仿和异戊醇的作用? 答案:酞与氯仿是非极性分子,水是极性分子,当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时,蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去,使蛋白失去水合状态而变性。在抽提DNA时,混合液内易产生气泡,加入异戊醇能降低分子表面张力,所以能减少抽提过程中的泡沫产生。 5、DNA纯度如何检测? 答案:主要使用OD260/OD280的比值来判断,当OD260/OD280等于1.8时,表明DNA较纯,当OD260/OD280大于1.8时,表明DNA中污染有RNA,当OD260/OD280小于1.8时有蛋白质或酚污染。 十二、营养缺陷型的筛选与鉴定 1、紫外诱变的机理是什么? 答案:紫外诱变的机理是紫外线引起胸腺嘧啶二聚体,从而导致DNA结构改变,进而引起机体突变或死亡。 2、紫外线诱变后,为什么不能马上见光? 答案?由于紫外线诱变后,如果马上给以可见光照射,则菌体中会产生光复活酶,进而对突变进行修复。 3、什么是营养缺陷型? 答案:营养缺陷型是指用物理或化学诱变使其基因发生突变从而丧失某种生长因子的合成能力,必须在基本培养基中加入相应的营养成分才能正常生长的突变型菌株,与之相对的是野生型菌株。 4、淘汰野生型的原理是什么? 答案:淘汰野生型也叫营养缺陷型的浓缩,由于抗生素(如青霉素等)可以抑制细菌细胞壁的形成,所以野生型在基本培养基中生长过程中,被杀死,而营养缺陷型则不能在在基本培养基中生长,但仍然存活,所以当再次转接到完全培养基中时,便可淘汰野生型。 5、筛选营养缺陷型时,为什么要不停搅拌? 答案:这样可以使微生物细胞均匀地接受紫外线辐射,提高突变率。 十三、菌种的保藏 1、菌种保藏的原理是什么? 答案:采取不同手段使微生物的代谢活性处于最低状态。 2、菌种保藏的意义? 答案:菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定,确保菌种不死亡、不变异、不被污染,以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。 3、斜面和液体石蜡保存菌种法所需的温度为多少? 答案:斜面和液体石蜡保存菌种法所需的温度均为零上4℃ 4、斜面保存菌种法利弊? 答案:前者在斜面培养基表面接种培养后,储存在零上4℃冰箱中,简单、方便,不需要特殊设备等,但由于微生物与空气接触,所以保存时间短、需要定期接种传代,易污染,菌种特性易改变 5、液体石蜡保存菌种法利弊? 答案:该方法也具有简便实用,不需要经常移种。但保存时需直立放置,占用空间较大,不便携带。
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