血浆凝血因子测定的影响因素探讨

中华医学检验杂志 1 9 9 5 年 3 月第 18 卷第 2 期 血浆凝血因子测定的影响因素探讨 丛玉 隆 伍 平 殷宗健 张立 文 摘要 为了探讨不同条件下贮存的血浆对凝血因子活性检测的影响 , 笔者观察了不同温度 , 不同 时间保存的血浆中凝血酶原及凝血因子 X ll 、X l、 IX 、 V H I、X 、 V n 、 V 活性和活化部分凝血活酶时间 (A P T T ) 、凝血酶原时间(P T )的影响 。结果显示 xl l 因子最稳定 , 在不同条件下保存其活性不变 , 凝血 酶原 、因子 X 也较为稳定 。 V ln 因子最不稳定 , 在 32 ℃条件下保存 6 小时 , 其活性只相当于取血即刻 试验结果的 48 % , 24 小时后其活性仅剩 5 % 。在室温 (20 ℃ )与冰箱(4 ℃ )内保存 6 小时和 24 小时则分 别为 94 % 、 3 0环和 95 % 、 2 9 % 。 V 因子活性也不稳定 , 出现了同样的变化 。结果还显示 A P T T 和 P T 不 能敏感地反映 因子的减少 , 只能作为凝血系统的筛选指标 , 即 A PT T 和 PT 延长可反映因子活性减 低 , 但正常时并不能排除轻度 、 中度因子活性减低的可能 。 关链词 凝血酶原时间 部分凝血活酶时间 A PPr o a e h o f th e e ffe e t in d e te rm in a tio n o f th r o m b o sis fa e to r s C闭9 Y u l伽g , W u Pi n g , Y in Z ho n g 少故n , e t a l. T h e Ge nera l h os P“ a l o f P L A , B e ,少in g 1 0 0 8 5 3 T h e v a r ia tio n o f A PT T . PT a n d e ffe e t o f th r o m bo sis fa eto r s a etiv ity w ith sto r e d se ru m in d iffe r e n t e o n d itio n s w e r e o bse r v e d . T he r e s u lt s s ho w e d : th e fa e t o r X ll 15 the be st sta ble a s it ae tiv ity , th e n fo l - lo w s fa e t o r X a n d p r o th r o m b in . T h e fa et o r V lll 15 th e w o r st . Its a e tiv ity d e ere a se d to 4 8 % a ft er s t o r e d 6 ho u r s a n d s% a fte r 2 4 h o u r s a t 3 2 O C ; d e e re a se d t o 9 4 % , 3 0 % a t 2 0 ℃ a n d 9 5 % 2 9 % a t 4 ℃ a ft e r 6 a n d 2 4 h o u rs o f sto r a tio n re sp e etilly . S im ila rly th e fa e t o r V 15 u n st a b le . T he r e s u lt also sh o w e d th a t A PT T a n d PT d id n o t d em o n st r a te th e d e er e a s e o f fa e t o r s V lll , IX , X l , V se n sitiv e ly ; the y e a n o n ly b e u se d a s se re e n in g t es ts , 1 . e . , p r o lo n g at io n o f A PT T a n d P T d e m o n - s t r a re d d ee r e a se d a et iv ity o f th e thr o m bo sis fae t o r s b u t a n o r m a l v a lu e doe s n o t r u le o u t slin g h t o r m e d i - u m d e e r e a se o f th e ir a e tiv ity . K e y w o r d s Pr o th r o m bin tim e A e tiv e p a r tia l th r o m bo p l as tin tim e 血浆凝血 11 、 V 、 V ll 、 V lll 、 IX 、 X 、X l、 X ll 因 子检查及部分凝血活酶时间 (A PT T )和凝血酶 原时间 (PT )测定是临床工作中诊 断机体止血 过程凝血系统病理变化的重要指标 。 由于某些 因素的作用 , 常影响实验结果的准确 。为了建立 凝血实验的质量控制方法 , 笔者探讨了各个 环 节对实验的干扰 。 笔者仅就不同条件下保存的 标本对实验的影响如下 , 供同道们参考 。 材料与方法 检查 (白细胞计数 、红细胞计数 、血小板计数 )及止皿买 验 (血小板聚集功能 、血小板因子 一3 、 A PT T 及 PT )结 果正常的成年男性 3 人 ,顺利静脉采血 gml , 9 : 1 比例 3 . 8 %拘椽酸钠抗凝 , 立即离心测 定因子活性和 A PT T 及 PT , 剩余血浆分在 9 个塑料管 中 , 分 3 组分别在 32 ℃ 、 20 ℃及 4 ℃条件下保存 , 在取血后 6 小时 、 12 小 时 、 24 小时进行同样实验 ‘ 2 . 测量 方法 : 使用 Co ul ter 一 IL 公 司生产 A C L - 3 0 0 0 p fu s 科研型全 自动凝血仪及配套试剂进行血浆 11 、 V 、 V ll 、 V lll 、 IX 、 X 、 X l 、 X ll 因子活性 、A P T T 及 P T 测定 , 每次实验均使用配套血浆制作标准曲线并 用质控血浆监控实验结果的准确性 。 1 . 标本来源与处理 : 体检身体健康 , 经一般血液 实验结果 作者单位 : 1。。8 5 3 北京 , 解放军总 医院 由于 3 例实验结果变化趋势完全一致 , 数 中华医学检验杂志 1 9 9 5 年 3 月第 18 卷第 2 期 表 l 不同条件下保存血浆对凝血因子活性的影响 (% ) 保存温度 与时间(h ) V lll 因子 IX 因 子 X l 因子 X ll因子 (% ) ‘ 厉 (% ) “ (% ) ’ 了 (% ) ’ 8 5 8 O 6 2 8 5 8 4 9 8 8 5 1 0 0 8 2 9 6 Q‘月了Q‘勺」00O0Q匕‘.11 34 65 5 5 7 4 8 4 1 J 7 0 5 8 2 9 Ljg白今曰”了,C’O口廿乃j1 勺乙内rl,i八曰,口00口1 000011,‘‘”纽 一乃月了Od”b”O八匕户乃一了八600OCOCO”†Oƒ石00 Q”一了OUC†Ž†心UQ曰Q曰0CU0八勺†Q† 11 9†1八沙11nnQdQ11IL 9 6 8 3 7 4 la11)斗八合勺曰q白OQ†1111 马4 4 2 3 O J认‘勺白Žb,1jn乙户a左L11”l n‘几J000nUOC口Q”‘1111 一了nŽ匕90“On 51,†心9 U9†nL11‘..1一l 9 5 4 5 2 9 J斗冲‘IQŽ八乃Q曰月匕一j111 3 2 C (水箱内) 即刻 6 12 24 ZO C (室温 ) 即刻 6 l2 24 4 C (冰箱内 ) 即刻 6 l2 2 4 , 表 示此时结果相 当于即刻实验结果百分 比 表 2 各因子活性在各条件下的变化 ( % ) 一 20 C 因 子—即刻 4 h 6 h s h 2 4h 4 C即刻 4 h 6 h sh 2 4h 即刻 4 h 6 h sh 2 4h 即刻 4 h 6 h sh 2 4 h1.1弓O乙尸O门OQ一n„111去111 10 1 10 0 9 9V 10 5 10 4 1 0 6V ll 9 2 9 2 1 0 4X 10 5 1 0 0 9 5 1 0 5 1 0 5 1 0 1 10 31 0 4 1 0 4 9 9 9 59 3 9 2 94 9 11 0 3 1 0 6 82 8 3 1 0 1 1 0 1 1 10 10 410 0 8 5 6 5 4 69 3 9 2 7 2 6 310 5 1 0 5 1 0 2 9 8 9 8 1 00 1 0 67 9 6 3 5 98 8 70 5 19 9 9 7 6 9 7 22 32 35 411LOg妇尸」00八曰门1.L111.1115,”0o 5n冲门†一l”111值近似 , 虽例数较少为了表达方便 , 笔者仍用均值表示 。 3 例血浆因子测定实验结果的均值 , 不 同保存时间实验结果变化相当于即刻因子活性 的结果见表 1 . 2 。 取血后 即刻 检查 A PT T 为 29 . 6 秒 , 4 C 和 20 C保存 12 小时 , 分别为 33 . 5 秒 、 34 . 6 秒 ; 24 小时后 , 分别为 38 秒和 48 秒 , 32 C 保存 6 小时 A PT T 即有明显变化 , 为 43 秒 。 同样即刻 PT 为 n . 6 秒取血 4 小时 、 6 小 时 、 8 小 时后 在 20 ℃保存 时 , PT 分别为 n . 9 秒 、 12 · 8 秒 、 13 · 2 秒 。 在 32 一C保存时 , 分别为 1 2 . 6 秒 、 1 3 . 8 秒和 1 7 . 0 秒 。 讨 论 止血实验的质量控制是保证实验结果准确 的必要手段 , 除需仪器的校正 、试剂的鉴定外 , 采血的方法 、部位及穿刺技术 、抗凝剂种类的应 用 ;标本的收集 、运送 、保存 、分离等 , 都是标准 化的重要 。笔者观察了在不同温度 、不同时 间保存下血浆对实验的影响 ,并讨论如下 。 应用现代生物化学及免疫学技术已进一步 明确血液 中的 V lll 因子是 由 V lll : C ( V lll 因 子 促 凝 活性 部 分 ) 及 V W F ( V o n W ille b r a n d Fac to r )所组成的复合物 。 V H I : C 的功能是辅 助活化的 IX 因子 (I X a )对 X 因子的激活作用 。 V W F 是 V lll : C 的载体 。 目前测定 V lll , C 有 两种方法 , ( 1) 利用 V H I: C 单克隆抗体 , 放免 法测定 V lll , A g 含量 ; ( 2 )利用 V lll , C 在凝 血活酶过程中的作用 , 测定 V H I : C 的活性 。本 研究采用的是后者 。 文献报道 , V H I : C 对热不 稳定 ,血浆应保存在 一 70 ℃ 。 有人报道 22 ℃条 件下保存 2 4 小时 , V lll : C 活性减少 5 0 % , 甚 至一 22 ℃保存 5 天 的血浆 , V n l : C 活性也可 丢 失 50 · 4 % , 因此 , V H I 因子活性测 定的实验 条件至关重要 。表 1 明显地显示了这一趋势 。在 6 小时 、 3 2 C条件下 V lll 活性可减少 5 2 % , 2 4 小时后 V H I 因子的活性可减少 95 % 。 中华 医学检验杂志 19 9 5 年 3 月第 18 卷第 2 期 有关 Ix 、 x l 因子特性文献报道不多 , 只认 为其不象 V H I 因子那样对热不稳定 , 但笔者结 果仍表现出对热敏感的现象 , 但较 V H I 因子的 变化幅度小 。 X l 因子在 4 、C 保存 24 小时 , 室温 保存 12 小时血浆活性基本无改变 。 IX 因子在 4 、 C 12 小时内 , 室温 6 小时 内活性与采血后即 刻测定实验结果差异无显著意义 。 X ll 因子对 热极 为稳定 , 在各种温度 、 不同时间保存 , 活性 不变 (数据 中 96 % 一 1 02 %的变 化可能是实验 误差所致 ) 。 以上结果提示 , 在不同因子活性测 定时应根据不 同特 点 , 建立相应 的质 控内容 。 V H I 因子 测定 最好 采血 后 即刻 完成 , 20 C 及 4 C 条件下分别 6 小时 、 12 小时保存血浆对 ix 、 X l 因子活性影响不大 。 室温超过 30 ‘C (特别是 我国南方夏季高温潮湿气候 ) , 在进行上述因子 检查时应注意温度对实验 的干扰作用 。 X n 因 子保存不受温度影响 , 至少在 32 ’C 24 小时 内 , 32 C 12 小时内活性不但没有减低 , 反而有微 弱的增高 , v 因子对热不稳定 , 20 c 、 32 c 保存 1 2 小时后 活性仅 为即刻的 57 %和 36 % , 36 小 时分别为即刻的 巧%和 17 . 5% 。 以上结果 可以看 出 A PT T 不能 敏感地反 映内凝 因子的变化 . 3 例正常人采血后即刻实 验 A PT T 均值为 2 9 . 6 秒 , 而 4 C保持 12 小时 后 V H I 因子 、 IX 因子 、 X l 因子 的活性仅分别相 当于 即刻 实验 的 4 5 . 5 % 、 90 % 、 99 % , 此 时 的 A PT T 仅为 3 3 . 5 秒 。 由于 A PT T 正常参考范 围较大 (25 一 3 2 秒 ) , 所以尽管有病理 因子活性 有较大的减低 , A PT T 仍可在正常范 围之 内 。 从表 2 可以看出 , V 因子对热不稳定 , 随着温度 增 高和保 存时间延长因子活性逐 步丧失 , V H 因子次之 , 但凝血酶原和 X 因子较稳 定 。 有关 不同条件下保存血浆对 PT 的影响已有文献报 道 , 但没有阐述这种变化与因子活性变 化的关 系 。 笔者实验证实在 32 ℃保存 6 小时的血浆 , 其 V 因子活性 已减低 39 % , 而 PT 只延长 2 . 2 秒 ( 1 1 . 6 一 1 3 . 8 秒 ) 。 因此 , A PT T 和 PT 异常 时 可反映 内外 凝血因子的缺 乏 , 但 A PT T 或 PT 正常并不能排除上述 因子 的轻度 、 中度异 常 。 因此 , 在临床诊断中 , 虽 A PT T 、 PT 正常 , 在病史及临庆表现有疑 问时 , 一定要进行因子 测定 。 (收稿 : 19 94 一0 7 一 1 1 修回 : 19 9 5 一 0 1一1 0 ) (本文编辑 : 张 莉 ) 欢迎订阅 1 9 9 5 年《中华医学信息导报》 《中华医学信息导报 》为国家科委批准的中华医学会学术性机关报 , 国 内外公开出版发行 , 以提供国 内外最新 医药学信息服务为其办报方针和宗旨 , 以 30 万名中华医学会会员及其他医药卫生工作者为读者对象 。 主要栏 目 有 : 会议征文 、专家谈 、学术 、继续医学教育 、 中青年医师园地 、 国家医学科技攻关项目简介 、重点学科点与实验 室简介 、回顾现状展望 、问题建议办法 、国 内医学新闻 、国外医学信息 、杂志信息 、科技咨询与开发 、学会 人物 、学会 动态 、出版消息等 。 本报为半月刊 , 每期 16 页 , 全年 24 期 。 订价为每期 。. 50 元 (含邮费) , 全年共 12 元 。 1 9 9 5 年本报继续由编辑部 自办发行 , 读者可随时向本报编辑部订阅 。 订阅者请从邮局汇款(汇款人和收件人姓名务必 一致 ) , 地址 :北京东四 西大街 42 号 (1 0 0 7 1 0) 中华医学信息导报发行组 。 本报收到汇款后 , 即将收据寄回作报销用 。 请务必将通讯地址 、邮 政编码 、收件人姓名及订阅份数书写清楚工整 , 以便准确输入计算机 , 保证导报邮寄无误 。 集体订户可通过银行汇款 。 本报开 户银行 :中国工商银行北京东四分理处 , 帐号 8 9 1 8 8 8 一 1 7 , 中华医学会帐户 (务请注明“导报订款 ” , 并写清楚本单位全 称 、详细地址 、邮政编码 、订阅份数 、经办人姓名 ) 。 汇款后请及时通知本 报编辑部 。