北京地区犬猫被毛真菌菌群的调查

畜牧兽医学报，2006，37(5)，504~509 Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica 北京地区犬猫被毛真菌菌群的调查 丁明星 ，林德贵。 (1．北京农学院动物科技系，北京 102206；2．中国农业大学动物医学院，北京 100094) 摘 要：为了解北京地区犬猫被毛携带真菌的情况，采集动物体表 7个点上的被毛，接种于沙氏或 DTM 培养基 26℃培养 2周 ，对菌落进行宏观和微观鉴定。结果表明，北京地区健康犬的皮肤丝状菌带菌率较低(2．78 ， 1／36)，而猫带菌率较高(9．4 ，3／32)；在 42只健康犬体表的腐生菌分布以耳内最高，右腕 、外眼角次之，耳外、背、 尾 、腹部依次降低。体表腐生菌以青霉(30．69 )、琏格孢霉(12．64 )、曲霉 (6．14 )、毛霉(5．42 )、枝孢霉 (4．69 )为主，酵母菌以念珠菌(20．94 )为主，还有 26株真菌(9．39 )未能鉴定 出来。此外，还分离出 67株细 菌。试验中还分离到其它一些重要致病性真菌，如马拉色菌、毛孢子菌(毛结节菌)和粗球孢菌 、付球孢于菌、皮炎 芽生菌 、帚霉等；提示北京地区犬、猫的皮肤存在着被这些真菌感染的可能。 关键词：真菌；被毛；犬；猫 中图分类号：$855．4 文献标识码：A 文章编号：0366—6964f 2006)05—0504—06 An Survey of Dermatophytes on Hair of Dog and Cat in Beij ing DING Ming—xing ，LIN De—gui (1．Faculty of Animal Science and Technology，Beijing Agricultural College，Beijing 102206， China；2．College of Veterinary Medicine，China Agricultural University，Beijing 100094，China) Abstract：For investigating carrier rate of dermatophytes on hair of dog and cat in Beijing，samples from seven points of the pets were used to cultivate fungus on Sabouraud medium／Dermatophyte Test Medium(DTM)at 26。C for two weeks．A total of 770 hair samples from 78 dogs and 32 cats were cultivated to isolate fungus from January 2002 to March 2003 in the veterinary teaching hospital of CAU．Identification was made by colony morphology and microscopic structures．The results indicated that the carrier rate was low(2．78 ，1／36)in dog，but was high(9．4 ，3／32) in cat in Beijing．The distributing pattern of saprophytes on hairs was as follows，highest carrier rate was found inside the ear，next the right carpus，the lateral corner of right eye，the external of ear base，the back，the tail and the abdomen． The main saprophytes on hair of dogs were： 3O．69％ Penicillium，12．64 9／6Alternaria，6．14 9／5 Aspergillus，5．42％ Mucor，4．69 Clados porum，2O。94 Candida．9。39 fungi could not be identified．67 strains of bacteria were also i— solated．Other pathogenic dermatomyces were cultured from pets，they were M alassezia (Pity— rosporium)furfur，Piedraia hortae，Blastomyces dermatitidis，Coccidioides immitis，Paracoc— cidioides brasiliensis and Scopularis brevicaulis．This suggests that pet might have been infected by them cutaneously or systemically． Key words：dermatophyte；hair；dog；cat 皮肤真菌病(dermatophytosis，癣／皮肤丝状菌 病)是临床常见病，并且难治愈，易复发。这与人们 收稿 日期：2005—03—22 作者简介：丁明星(1958一)，山东莒南人，硕士，讲师，主要从事动物皮肤病的研究，E—mail：dingmx@bac．edu．cn *通讯作者：林德贵，博士 ，教授，中国农业大学动物医学院临床系主任 维普资讯 http://www.cqvip.com 5期 丁明星等：北京地区犬猫被毛真菌菌群的调查 5O5 对真菌的种类、分布、流行特点、药物敏感性等缺乏 了解有关。国内兽医领域相关研究较少。据挪威对 780只犬，279只猫刮取皮屑培养，犬的带菌率为 5．6 ，猫为 30．8 [1]，据 Moriello报道[2]，在新西 兰对 l99只无症状猫进行真菌调查(毛刷法)，得到 了 38株真菌(19 9／6)，13株犬小孢子菌，5株鸡小孢 子菌，5株 Ajelloi毛癣菌和 15株 Terrestre毛癣 菌。另据 Slesenop等报道，他们在 11年问对 9 935 例犬的皮肤刮片和被毛进行调查，得到皮肤真菌 447株(4．5 )，其中，84 1 为小孢子菌l3]。国内 人医在 1986和 1996年进行了两次大规模的真菌调 查，第二次调查时各种真菌感染所占的比例：红色毛 癣菌 34．5 、白色 念珠 菌 19．6 、须 发 毛癣菌 10．6 、马拉色菌 4．1 、犬小孢子菌 3．4 、絮状表 皮癣菌1．2 9／6 ]。查清真菌的种类及在体表的分布对 于正确认识犬、猫皮肤真菌病是必要的，也是研究皮 肤微生态环境及皮肤微生态环境改变后皮肤真菌病 发生规律的基础。本试验旨在了解北京地区犬、猫皮 肤丝状菌的带菌情况，为临床诊断和防治提供依据。 l 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 培养基 沙 氏培养 基，土豆 培养 基 ， DTM 培养基 ]，种子 培养基m，乳 酸棉酚 蓝染 液嘲。 1．1．2 动物 中国农业大学动物医院I临床收治的 健康犬、猫，不同阶段采用的动物数量见结果部分。 1．1．3 采毛及真菌培养 分别从腕部 、外眼角 、 耳内 、耳外 、背部 、腹部和尾部用镊子采毛(5～lO 根)装入灭菌试管。把采集的毛接种到沙氏培养基 或 DTM 培养基上；每只动物(7个样本)接种两个 分 4区的同种平皿。并在平皿上记录日期、编号、部 位等，隔天观察一次。根据菌落的生长情况(快、慢、 菌落特点等)决定是否镜检或停止培养(因毛霉生长 快速，在培养基上生长 5 d即充满培养基)。 1．2 各种菌的培养鉴定 1．2．1 肉眼初步判定 判断标准如下。 絮状表皮癣菌：在沙氏培养基上生长缓慢，2周 时直径不到1 cm。开始为蜡样圆锥形菌落，灰白色 突起，有皱褶和放射状沟纹0 I。2周以后，生长加 快，长出绿灰色的放射状菌丝。在土豆培养基上生 长与上述类似，只是生长速度更慢。 矮小小孢子菌：沙氏培养基培养 2周，直径 3 cm，菌落平坦、短绒毛状，边缘白色稍突起，中间为 鲑鱼肉色或黄棕色，颜色随培养时问延长而加深 ]。 须发毛癣菌：DTM 培养基培养 14 d，菌落中央 为白色粉末状或颗粒状，菌落边缘有放射状白色菌 丝，生长速度比犬小孢子菌稍慢。须发毛癣菌落为 颗粒型菌落 ]。培养基变红。 犬小孢子菌：在沙氏培养基上为生长速度中等 (2周菌落直径 7 cm)、白色放射状绒毛样菌落，菌落 反面黄色，颜色随培养时间延长而加深 ；在 DTM 培养基上，生长速度稍慢，呈稀疏的白色放射状、绒 毛样菌落，培养基变红。 马拉色菌：马拉色菌需要在含橄榄油的培养基 才能生长，在加有植物油和胆酸盐的培养基上也生 长良好 ]。在DTM培养基上生长极缓慢，2周时直 径 1 mm，呈表面凸起，棕色酵母样菌落。 帚霉：本菌在分类上不属于皮肤丝状菌，但与上 述四菌同属于丛梗孢科，且能在毛发上大量生长，因 此，把它列为致病菌 ]。在沙氏培养基上生长蔓延， 薄绒状，有皱褶。初期白色，后中央变为黄褐色，表 面为疏松的丛毛状菌落 ]。在 DTM 培养基上生长 缓慢，5 d成熟，菌落初期白色光滑，后期成熟变为 粉状突起，2周直径 3 cm。 1．2．2 显微判定 判定标准如下。 絮状表皮癣菌：菌丝分隔，无小分生孢子。可见 典型的絮状表皮癣菌杵状大分生孢子，其游离端呈 圆形，棒状、壁厚、l～4隔、簇生，少见螺旋菌丝、结 节菌丝_6]，见图 1。 图 1 絮状表皮癣菌。可见分隔菌丝。簇生大分生孢子。 多数为3隔。卵圆形。表面光滑 560× Fig．1 Structure of Epidermophyton floccosum 560× 矮小小孢子菌：沙氏培养基培养 2周，只见螺旋 菌丝、营养孢子，无大小分生孢子。为促进大分生孢 子的产生，接种米饭、玉米、豌豆、大麦、小米 5种培 维普资讯 http://www.cqvip.com 506 畜 牧 兽 医 学 报 37卷 养基，培养 10 d。镜检：在大麦培养基上见到典型的 矮小小孢子菌的大分生孢子、有性生殖及大量子囊 孢子。大分生孢子呈卵形或椭圆形，1～4隔，大部 分只有 1隔，侧顶生，图 2显示 1个 1隔、1个 2隔， 还可见发育不良菌丝嘲。 图 2 矮小小孢子菌 ，示大分生孢子，1个 l隔。1个 2 隔。卵圆形、侧顶生及发育不 良的结节状菌丝 560× Fig．2 Structure of Microsporum nanum 560× 须发毛癣菌：分隔菌丝，片上可见大量大分生孢 子，簇生小分生孢子和螺旋菌丝。未成熟大分生孢 子形状如雪茄样，成熟大分生孢子形状与犬小孢子 菌很相似，为纺锤形，侧顶生或顶生，只是壁稍薄，隔 比犬小孢子菌多，多数 5～10隔嘲，见图3。 图 3 须发毛癣菌，示其螺旋菌丝、大分生孢子、簇生小 分生孢子 560x Fig．3 Structure of Trichophyton mentegrophytes 560~ 犬小孢子菌：在沙氏培养基上没有大分生孢子 产生，不见螺旋菌丝和营养孢子；在 DTM 培养基上 长出大量的大分生孢子和少量小分生孢子；大分生 孢子侧生或顶生，3～7隔，壁厚，壁上带有小颗粒， 呈纺锤状。分生孢子柄长短不一。小分生孢子鸭梨 状，沿菌丝两侧单个垂直排列 ]，见图4。 马拉色菌：可见正在出芽的几个细胞，像保龄球 图4 犬小孢子菌 ．示大分生孢子及小分生孢子。大分 生孢子 5～7隔，小分生孢子沿菌丝单排垂直排 列 560× Fig．4 Structure of M icrosporum canis 560× 的球瓶，瓶形细胞产生出单个马拉色菌。乳酸棉酚 蓝染色，可见单个瓶形细胞或两个连在一起的卵圆 形酵母 ，见图 5。 图5 马拉色菌 ，示保龄球球瓶样马技色菌 1 400x Fig．5 Structure of Malassezia(Pityrosporum)furfur l 400X 帚霉：分隔菌丝，孢子梗 自气生菌丝直立生长， 短、圆桶状，轮状分枝，其上附着分生孢子，有点像青 霉，但分生孢子柄短。孢子大于青霉，壁厚，柠檬样， 分生孢子远端钝圆，基部如刀切样整齐，表面粗糙， 有点状小颗粒 ]，见图 6。 1。3 鉴定程序 采样、接种于沙氏培养基／DTM 培养基 2周， 隔天观察菌落生长状况，第 lO天开始做显微镜检 查，并判定真菌种属。如未能鉴定出来，再接种各种 种子培养基 2周，第 7天开始镜检，判定真菌种属。 不能确定的，归类于未鉴定出真菌。 若宏观形态和微观结构相矛盾，以微观结构为 准。因宏观形态易受温度、湿度、培养基成分、观察 时的光线等因素影响。 维普资讯 http://www.cqvip.com 5期 丁明星等：北京地区犬猫被毛真菌菌群的调查 5O7 圈6 帚霉，示分生孢子梗顶端产生柠檬样分生孢子， 远端钝圆、近端刀切样整齐 560X Fig．6 Structure of Scopularis brevicaulis 560× 2 结 果 2．1 在犬体表不同部位的真菌调查结果 试验的第一阶段使用沙氏培养基，对 42只健康 犬各取 7个部位的被毛进行真菌分离、鉴定，共取得 294个被毛样本。真菌分离、鉴定结果如下：右腕 39 (4)、外眼角 35(5)、耳内 47(6)、耳外 36(3)、背部 34 (3)、腹部 29(2)、尾部 31(3)，括号内为未鉴定出的 株数。 详细结果：42只犬全部检出真菌。在 294个样 本中，共培养出真菌总数 277株，主要是腐生菌或称 为植物性真菌。其中，66个被毛样本未培养出真 菌，占样本总数的22．4 。7部位平均真菌数 39．6 株，每只犬培养出真菌平均数为 6．6株。耳内真菌 数最高，高于 7个部位平均数。 2．2 真菌种类分布状况 用沙氏培养基对 42只健康犬的 294个样本进 行分离培养，得到真菌 277株，共 18类真菌(有 26 株未能鉴定)。真菌分布状况见表 1。 表 1 沙氏培养基分离到 277株真菌的种类分布 Table 1 Distribution of 277 dermatophytes isolated by Sabouraud medium 种类 株数 比例／％ 种类 株数 比例／ 青霉 Penicillium 85 30．69 头孢霉 CP户^nZ0s户0 “m 2 0．72 曲霉Aspergillus 17 6．14 黑粉菌 Ustilago 1 0．36 毛霉 Mucor 15 5．42 弯孢菌 Curvularia 1 0．36 琏格孢霉Alternaria 35 1 2．64 附球菌 Epicoccum 1 0．36 枝孢霉 Cladosporium 13 4．69 毛壳菌 Chaetomium 2 0．72 单顶孢 Trichothecium 2 0．72 酵母样菌 Saccharomyces 4 1．44 拟青霉 Paecilomyces 3 1．O8 念珠菌 Candida 58 20．94 瓶霉 Phialophra 3 1．O8 镰刀菌 Fusarrium 3 1．08 地霉 Geotrichum 4 1．44 未鉴定出真菌 Unidentified dermatophytes 26 9．39 茎点霉 Phoma 2 0．72 合计 Total 277 100 2．3 致病性真菌在犬体表的分布情况 试验的第二阶段使用 DTM 培养基，对 36只健 康犬的252个被毛样本进行致病性真菌的分离、鉴 定。结果在右腕分离到皮炎芽生菌 1株．夕 眼角未 分离到真菌；在耳内分离到 3株马拉色菌、1株付球 孢子菌；在耳外分离到 1株帚霉、1株犬小孢子菌； 在背部未分离到；在腹部分离到 1株毛孢子菌；在尾 部分离到 1株帚霉。 在 lO只犬检出致病性真菌，检出率占总数的 27．78 。共分离到 9株 6种真菌。同时，还分离 到变形杆菌和气单孢杆菌。耳内致病性真菌最多， 且马拉色菌占优势。皮肤丝状菌(犬小孢子菌)的带 菌率为2．78 (1／36)。 2．4 致病性真菌在猫体表的分布情况 试验的第二阶段使用 DTM 培养基，对 32只健 康猫的224个被毛样本进行致病性真菌调查，结果 如下：在右腕分离到 1株犬小孢子菌、2株帚霉；在 外眼角未分离到真菌；在耳内分离到 3株马拉色菌、 2株付球孢子菌；在耳外分离到 2株帚霉、1株犬小 孢子菌；在背部分离到 1株犬小孢子菌、2株付球孢 子菌；在腹部分离到 3株念珠菌、2株皮炎芽生菌、1 株帚霉；在尾部分离到 2株粗球孢菌、1株付球孢子 菌。 32只猫 中 l9只带有致病性真菌，检出率为 59．4 ；共分离到 26株 7种致病性真菌，后躯带菌 较多；皮肤丝状菌(犬小孢子菌)的带菌率为 9．4 维普资讯 http://www.cqvip.com 5O8 畜 牧 兽 医 学 报 37卷 (3／32)。 2．5 对 17只疑似癣病犬、猫被毛的调查结果 使用 DTM 培养基，采集 17只疑似癣病犬、猫 (片状脱毛、断毛、被毛颜色变深)的被毛做真菌培 养，共得到9株致病菌，检出率 53 。具体结果：从 11只猫分离出 4株犬小孢子菌、1株须发毛癣菌、1 株矮小小孢子菌、1株表皮癣菌；从 6只犬分离出 1 株犬小孢子菌、1株须发毛癣菌。 3 讨 论 3．1 关于培养基 真菌培养多使用沙氏培养基，通过一年多的使 用，笔者认为可以用沙氏培养基做真菌分离，但不适 于做皮肤丝状菌的鉴定。 即使沙氏培养基能分离出真菌，但因营养物质 过于丰富，易造成不同菌落互相遮盖，生长快速的把 生长慢的遮盖了，使菌落计数失真。例如一旦有根 霉生长，其它菌落就看不见了，使培养失败；有时曲 霉生长得较茂盛，易误认为是毛霉，需做镜检才能鉴 别，而且在采样、制片、镜检过程中易使孢子扩散而 污染实验室，妨碍以后的培养。总之，根据笔者的使 用经验，建议使用改良的沙氏培养基，主要是减少蛋 白胨的含量，如减半使用，并且最好使用植物蛋白 胨，以利于分离、鉴定。 3．2 关于致病性真菌的种类 本研究的目的是调查犬、猫被毛上皮肤丝状菌 (包括表皮癣菌、小孢子菌、毛癣菌)的带菌情况，但 在试验过程中也分离到其它的被毛致病菌(如毛孢 子菌、帚霉 )、皮肤致病菌(如念珠菌、皮炎芽生 菌、粗球孢菌、付球孢菌及马拉色菌_4 9])，因此一 并报告。 3．3 真菌在动物体表的分布 腐生菌 的种类分 布、比例与 国内外结 果一 致E。 珀]。犬的犬小孢子菌带菌率与国外接近，但 与吴金节调查的家养猫犬小孢子菌带菌率为 3O 、 宠物市场猫的带菌率是 4O 9／6的结果差别较大 1。 本试验显示，在动物体表真菌分布以耳内最高， 以腹部、尾部最低。耳内真菌分布较高，可能是由于 耳内处于半封闭状态，进入耳内的真菌不易清除掉。 腹部处于躯干下面，因重力原因，环境中的真菌不易 附着；而尾部因经常摇摆，真菌也不易停留，故数量 少 。 值得注意的是耳内的大量真菌，特别是马拉色 菌(3／36)。此菌是一种嗜脂性条件致病菌，也是正 常动物体表常在菌。它并不适合在 DTM培养基上 生长，耳内皮脂分泌物和脱落上皮形成的耳垢很适 合它的生长，外耳炎时，应考虑有此菌参与。据 Gedek等报道ll引，在 158例发生外耳炎的犬和 106 例正常犬的外耳道中，56．9 的患犬和 17 的正常 犬的外耳道中分离到马拉色菌，并认为酵母菌，特别 是马拉色菌是外耳炎的重要病原菌，建议对慢性外 耳炎给予抗真菌治疗。 本研究使用沙氏培养基对 42例健康犬的调查 未能分离到犬小孢子菌，笔者认为主要是因为腐生 菌(如毛霉)生长过快，掩盖了小孢子菌的生长。在 使用 DTM培养基对 36例健康犬的调查时，分离到 犬小孢子菌 1株。此菌被认为是犬、猫皮肤最普通 的癣菌。此次分离到较少该菌可能与以下因素有 关：①犬体表此菌较少。此次被调查犬的卫生条件 较好，经常给予洗澡。据笔者临床观察，在几百个患 皮肤病的犬中，只有 3例皮肤真菌病。其中 2例确 诊(1例是犬小孢子菌，另 1例是须发毛癣菌)，1例 为典型小孢子菌。②实验方法不同。文献报道多数 是使用毛刷法。例如 Quaifer对展览猫的调查，小 孢子菌带菌率为 35 9／6 El3]。Moriello等对健康猫的 调查，皮肤丝状菌的带菌率为 9．3 9／6(16／172)，且未 分离到犬小孢子菌，主要是(14／172)红色毛癣菌l2]。 被调查猫来自室内饲养或散养，单猫或多猫家庭，这 与本试验结果相似。使用毛刷法固然能刷遍全身， 但也有刷不下来或没刷到的可能。本研究采用 7点 取毛，亦有未采到带菌毛的可能性。③与小孢菌的 流行特点有关。真菌病易在猫场、犬场、流浪宠物庇 护所、散养及多宠物家庭流行。在家养的犬、猫中， 卫生条件较好，犬、猫的带菌率均较低。④与样本少 有关，若能采集百个以上的样本(最好能达到几百 个)，相信结果会更加准确。 4 结 论 北京地 区健康 犬 的皮 肤 丝状 菌 带菌 率 为 2．78 (1／36)。健康猫的皮肤丝状菌带菌率高于 犬，达到 9．4 (3／32)。被毛上的各种腐生菌以青 霉、琏格孢霉、曲霉、毛霉、枝孢霉为主。分离出3属 中的4种皮肤丝状菌，分别是：表皮癣菌属，絮状表 皮癣菌；小孢子菌属，犬小孢子菌、矮小小孢子菌；毛 癣菌属，须发毛癣菌。马拉色菌、粗球孢菌、付球孢 菌、皮炎芽生菌、帚霉、毛孢子菌(毛结节菌)和念珠 维普资讯 http://www.cqvip.com 5期 丁明星等：北京地区犬猫被毛真菌菌群的调查 5O9 菌等应视为犬、猫被毛或皮肤的致病性真菌。 参考文献： [1] Henrik S．Isolation of dermatophytes from domestic animals in Norway~J]．Norway Vet Med，1985，37： 161～ 169． [2] Moriello K A，DeBoer D J．Fungal flora of the hair coat of cats with and without dermatophytosis[J]．J Med Vet Res，1991，52：602． [3] Slesenop U，Busse M，Bohm K H．The importance of dermatophytosis in dogs and cats— a review of 1 1 year of routine mycological diagnostic work[J]．Kleintier— praxis，1996，41(7)：483~491． [43 廖万清，吴绍熙．真菌病研究进展[M]．第二军医大学 出版社，1998，1～10． [5] Mary C，Campbell B A，Joyce L，et a1．The medical mycology handbook[M]．john Wiley 8L Sons，1980． 383． [6] Davise H I ．Medically Important Fungi：a guide to identification EM]．Harper and Row Publishers，1976． 133，‘7‘7，90，83，82，93． r73 Jaroslav D，Milos O．Mycological diagnosis of animal dermatophytosis[M]．Academia Publishing House of the Czechoslovak 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“感动中国畜牧兽医科技创新领军企业”(20个)、“感动中国畜牧兽医科技创新领军院所”(10个)等奖项。学 会将于 2006年 1 0月 28日在年会和 7O周年庆典的同时，隆重举行“感动中国畜牧兽医科技创新峰会暨颁 奖盛典”。 本次峰会的启动仪式已于 2006年 3月 5日在湖南长沙隆重举行。相关奖项设置及评选办法，已经 2006年全国秘书长会议讨论修改并征询相关专家、评委的意见。详情请浏览学会网站 www．caav．org．cn， 中华农牧企业网www．boyar．cn。请将候选人及侯选单位的推荐表及相关证明材料(签字盖章)，于 2006年 5月 25日前寄送到中国畜牧兽医学会，同时将推荐表的电子版发送到学会。 通讯地址：北京朝阳农展馆南路 9号博雅园 1 106号中国畜牧兽医学会 联 系 人：孙丽波 刘海霞 李传业 联系电话：010-85959009 85959006 传真：010-85959010 E—mail：caavl23@ 163．com 维普资讯 http://www.cqvip.com