为了正常的体验网站,请在浏览器设置里面开启Javascript功能!
首页 > 谷草转氨酶活性测定

谷草转氨酶活性测定

2012-07-06 2页 pdf 85KB 88阅读

用户头像

is_506558

暂无简介

举报
谷草转氨酶活性测定 谷丙转氨酶高怎么办肝功能检查结果分析 脂肪肝症状谷丙转氨酶高的危害 谷草转氨酶活性测定 实验原理: 酮戊二酸反应起催化作用 ,在一定的反应条件下 ,产生一定量的草酰乙酸 ,草酰乙酸随之脱羧成为丙酮酸 (Pyruvic acid ,简写 Pyr) 。反应至规定时间后 ,加入 2 ,4 - 二硝基苯肼及盐酸溶液终止反应 ,同时 2 ,4 - 二 硝基苯肼与酮酸中羰基加成 ,生成丙酮酸苯腙。在碱性条件下 ,苯腙呈红棕色 ,其颜色深浅与丙酮酸含量在 一定范围内成正比 ,可用分光光度计以 500nm 波长进行比色 ,测定丙...
谷草转氨酶活性测定
谷丙转氨酶高怎么办肝功能检查结果分析 脂肪肝症状谷丙转氨酶高的危害 谷草转氨酶活性测定 实验原理: 酮戊二酸反应起催化作用 ,在一定的反应条件下 ,产生一定量的草酰乙酸 ,草酰乙酸随之脱羧成为丙酮酸 (Pyruvic acid ,简写 Pyr) 。反应至时间后 ,加入 2 ,4 - 二硝基苯肼及盐酸溶液终止反应 ,同时 2 ,4 - 二 硝基苯肼与酮酸中羰基加成 ,生成丙酮酸苯腙。在碱性条件下 ,苯腙呈红棕色 ,其颜色深浅与丙酮酸含量在 一定范围内成正比 ,可用分光光度计以 500nm 波长进行比色 ,测定丙酮酸含量以确定 GOT活度。 主要试剂 (1)0. 05mol/ L Tris - HCL 缓冲液(pH7. 2) :0. 2mol/ L 三羟甲基氨基甲烷(24. 2g 三羟甲基氨基甲烷用蒸馏水 溶解并定容至 200ml) 50ml 和 0. 2mol/ LHCl44. 2ml ,用蒸馏水稀释至 200ml。 (2) 0. 1mol/ L 磷酸盐缓冲液:称取磷酸氢二钠(AR) 11. 928g ,磷酸二氢钾(AR) 2. 176g ,加少量蒸馏水溶解并 定容至 1000ml。 (3) 2 ,4 - 二硝基苯肼溶液 :称取 2 ,4 - 二硝基苯肼 19. 8mg ,用 10mol/ L HCL10ml 溶解后 ,加蒸馏水至 100ml ,保存于棕色瓶中备用 ,此液可保存 3 个月。 (4) 0. 4mol/ L 氢氧化钠溶液:16g 氢氧化钠(AR)加蒸馏水溶解并定容至 1000ml。 (5) 1mol/ L 氢氧化钠溶液:40g 氢氧化钠(AR)加蒸馏水溶解并定容至 1000ml。 (6)丙酮酸标准液(2 μmol/ ml) :精确称取纯丙酮酸钠22. 0mg于 100ml 容量瓶中 ,加 0. 1mol/ L 磷酸盐缓冲 液至刻度。此液应新鲜配制。 (7) GOT底物液(DL – 天冬氨酸 200mmol/ L , α-酮戊二酸 2mmol/ L) :称取α- 酮戊二酸 29. 2mg和 DL- 门 冬氨酸 2. 66g 置于一小烧杯中 ,加入 1mol/ L 氢氧化钠 20. 5ml 使溶解 ,并校正 pH至 7. 4 ,然后将溶液移 入 100ml 容量瓶内 ,用 0. 1mol/ L 磷酸盐缓冲液定容至刻度。放置冰箱内保存。 实验方法: 1酶粗制剂的提取 将新鲜植物材料剪碎 ,取鲜重0. 2g左右放入研钵 ,加 0. 05mol/ L Tris - HCl 缓冲液 (pH7. 2) 2. 0ml ,在冰浴中研磨 ,得到的匀浆用高速离心机 20000 ×g离心 20min ,上清液供测酶活度用 2谷草转氨酶( GOT)活度测定 取 10ml 试管 2支 ,一支作测定管 ,分别加酶粗制剂 0. 1ml 和 GOT 底物 液 0. 5ml ,另一支作对照管 ,仅加酶粗制剂 0. 1ml。将二管同时置 37℃ 水浴 ,60min 后取出 ,各管加 2 ,4 二硝基苯肼液 0. 5ml 终止反应 ,对照管再加 GOT底物液0.5ml。将二管再置 37℃ 水浴中 20min ,取出后 各管加0.4mol/ L NaOH 5. 0ml ,混匀 ,10min 后用分光光度计比色 ,波长 500nm ,蒸馏水调零点 ,读取吸光 度。将测定管吸光度减去对照管吸光度 ,得吸光度差值 ,查工作曲线即可查得丙酮酸体积(ml) 。若查得的 丙酮酸体积超过 0. 2ml 时应将酶粗制液稀释后再进行测定 ,测定结果乘以稀释倍数即得丙酮酸体积 V(ml) 。 工作曲线绘制:取 10ml 试管 5 支 ,各管加 0. 1mol/ L 磷酸盐缓冲液 0. 1ml ,分别加 GOT底物液 0. 5、0. 45、 0. 40、 0. 35、 0. 30ml ,丙酮酸标准液 0 (对照管) 、0. 05、 0. 10、 0. 15、 0. 20ml。置 37℃水浴 5min , 谷丙转氨酶高怎么办肝功能检查结果分析 脂肪肝症状谷丙转氨酶高的危害 各管加2 ,4 - 二硝基苯肼溶液 0. 5ml ,混匀 ,再置 37℃浴中20min ,取出后各管加 0. 4mol/ L 氢氧化钠溶液 5ml ,混匀 ,10min后同上比色 ,读取各管吸光度。各管吸光度分别减去对照管吸光度 ,以各管丙酮酸体积为 横座标 ,以相应的吸光度差值为纵座标绘制工作曲线
/
本文档为【谷草转氨酶活性测定】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑, 图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。 本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。 网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
热门搜索

历史搜索

    清空历史搜索