27王不留行307-316_SV_C[1]

307 圖 1 王不留行外觀圖 1 cm 308 王不留行 1. 名稱 藥材正名：Semen Vaccariae 中文名：王不留行 漢語拼音名：Wangbuliuxing 2. 來源 本品為石竹科植物麥藍菜 Vaccaria segetalis（Neck.）Garcke 的乾燥成熟種 子。夏季果實成熟、果皮尚未開裂時採割植株，曬乾，打下種子，再曬 乾，除去雜質。 3. 性狀 本品呈球形，直徑 1.4 - 2.4 mm。面黑色或棕黑色，略有光澤。10 倍放 大鏡下可見細密顆粒狀突起平均分佈在種皮表面，有1淺色圓點狀凹陷 種臍和一側有 帶狀凹陷淺溝。質堅硬，剖開可見胚乳白色，胚彎曲成 環，子葉二枚。氣微，味微澀、苦（圖 1）。 4. 鑒別 4.1 顯微鑒別（附錄III） 橫切面 種皮表皮細胞 1 列，紅棕色，外壁明顯增厚為乳凸狀突起，隱約可見層 紋。內種皮皺縮，黃棕色。胚乳為薄壁細胞，胞腔內含糊粉粒。子葉及胚 根由薄壁細胞組成（圖 2）。 粉末 灰褐色。種皮表皮細胞紅棕色或黃棕色，星狀，直徑 48 - 135 µm，外壁層紋 增厚。內種皮細胞淡黃棕色，類方形、長方形至多角形，垂周壁呈緊密的 念珠狀增厚，表面可見緻密條狀紋理。胚乳細胞多角形、類方形至類長方 形，胞腔內充滿糊粉粒。子葉細胞含有脂肪油滴（圖 3）。 王不留行 309 4.2 薄層色譜鑒別 [附錄IV(A)] 對照品溶液 王不留行環 A 對照品溶液 取王不留行環 A 對照品（圖 4）1.0 mg，溶解於 1 mL 甲醇中。 展開劑 製備二氯甲烷 - 甲醇（10 : 1, v/v）的混合溶液。 顯色劑 取硫酸 10 mL，緩緩加至 90 mL 乙醇中。 供試品溶液 取本品粉末 10.0 g，置50-mL錐形瓶中，加二氯甲烷 - 甲醇（4 : 1, v/v）混 合溶液 30 mL，超聲（240 W）處理 30 分鐘，濾過，濾液轉移於 100-mL 圓 底燒瓶中，用旋轉蒸發器減壓蒸乾。殘渣溶於 1 mL 甲醇，即得。 操作程序 照薄層色譜法 [附錄 IV(A)] 進行。分別吸取王不留行環 A 對照品溶液 和供試品溶液各 6 µL，點於同一高效硅膠 F254 薄層板上。將薄層板置雙 槽層析缸一槽中，加上述新製備的展開劑於另一槽內，預先飽和約 15 分 鐘，再將展開劑小心傾入置薄層板的槽中，展開約 8 cm，取出，標記溶 劑前沿，晾乾。均勻噴上顯色劑，在約 105℃ 加熱約 1 分鐘。置紫外光 （366 nm）下檢視，並計算 Rf 值。 供試品色譜應顯出與王不留行環 A 色澤相同、 Rf 值相應的特徵斑點或 條帶。 310 王不留行 圖 2 王不留行橫切面顯微特徵圖 A. 簡圖 B. 橫切面圖 C. 種皮表皮細胞 1. 種皮表皮 2. 種皮內表皮 3. 胚乳 4. 胚根 5. 子葉 註：胚根和胚芽由薄璧細胞組成，沒有明顯鑒別特徵。由於它們分別位於種 子的兩側，因此沒有顯示細節。 註：胚根和胚芽由薄壁細胞組成，沒有明顯鑒別特徵。由於它們分別位於種 子的兩側，因此沒有顯示細節。 1 C A B100 µm 100 µm 1 2 3 2 1 2 3 4 5 王不留行 311 圖 3 王不留行粉末顯微特徵圖 (光學顯微鏡下) 1. 種皮表皮細胞 2. 內種皮細胞 3. 胚乳細胞 4. 子葉細胞 50 µm 1 3 2 4 312 王不留行 N H N H N H N H N HHN O O O O O O O N H N H N H H N H N NH HN O O O OO 圖 4 王不留行環 A 化學結構式 4.3 高效液相色譜指紋圖譜鑒別（附錄XII） 對照品溶液 王不留行環 A 對照品溶液Std-FP (100 mg/L) 取王不留行環 A 對照品 1.0 mg，溶解於10 mL 甲醇中。 供試品溶液 取本品粉末 1.0 g，置 50-mL 離心管中，加甲醇 20 mL，超聲（240 W）處 理 30 分鐘，離心 5 分鐘（約 5000 × g），用 0.45 - µm 微孔濾膜（PTFE）濾過， 即得。 色譜系統 液相色譜：二極管陣列檢測器，檢測波長 219 nm；4.6 × 250 mm 十八烷基鍵 合硅膠（5 µm）填充柱；柱溫為 35℃；流速約 1.0 mL/min。色譜洗脫程序如 下（表 1）： 表 1 色譜洗脫條件 時間 水 乙 洗脫(分鐘) (%, v/v) (%, v/v) 00–20 90g85 10g15 性梯度 20–40 85g70 15g30 性梯度 40–60 70g30 30g70 性梯度 王不留行 313 系統適用性要求 吸取王不留行環 A 對照品溶液 Std-FP 20 µL，注入液相色譜儀，至少重 複 5 次。系統適用性參數的要求如下：王不留行環 A 的峰面積相對標準 偏差應不大於 5.0%；王不留行環 A 峰的保留時間相對標準偏差應不大 於 2.0%；理論塔板數按王不留行環 A 峰計算應不低於 150000。 供試品測試中 6 號峰與鄰近峰之間的分離度應不低於 1.5（圖 5）。 操作程序 分別吸取王不留行環 A 對照品溶液 Std-FP 和供試品溶液各 20 µL，注入 液相色譜儀，並記錄色譜圖。測定對照品溶液 Std-FP 色譜圖中王不留行 環 A 峰的保留時間，及供試品溶液色譜圖中 6 個特徵峰（圖 5）的保 留時間。在相同液相色譜條件下，與相應對照品溶液 Std-FP 色譜圖中王 不留行環 A 峰的保留時間比較，鑒定供試品溶液色譜圖中王不留行環 A 峰。二色譜圖中王不留行環 A 峰的保留時間相差應不大於 2.0%。 按附錄 XII 公式計算特徵峰的相對保留時間。 王不留行提取液 6 個特徵峰的相對保留時間及可變範圍見表 2。 表 2 王不留行提取液 6 個特徵峰的相對保留時間及可變範圍 峰號 相對保留時間 可變範圍 1 刺桐鹼 0.24 ± 0.03 2 0.44 ± 0.03 3 0.59 ± 0.03 4 0.71 ± 0.03 5 0.92 ± 0.03 6（指標成份峰， 王不留行環 A） 1.00 - 314 王不留行 圖 5 王不留行提取液對照指紋圖譜 供試品色譜圖中應有與對照指紋圖譜相對保留時間範圍內一致的 6 個特徵 峰（圖 5）。 5. 檢查 5.1 重金屬（附錄V）︰應符合有關規定。 5.2 農藥殘留（附錄VI）︰應符合有關規定。 5.3 霉菌毒素（附錄VII）︰應符合有關規定。 5.4 雜質（附錄VIII）︰不多於 1.0%。 5.5 灰分（附錄IX） 總灰分：不多於 4.0%。 酸不溶性灰分：不多於 1.0%。 5.6 水分（附錄X）︰不多於 15 .0%。 0 0 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 AU 5 1 2 3 4 5 6 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 min 王不留行 315 6. 浸出物（附錄XI） 水溶性浸出物（冷浸法）︰不少於 9.0%。 醇溶性浸出物（熱浸法）︰不少於 6.0%。 7. 含量測定 照附錄 IV（B）進行。 對照品溶液 王不留行環 A 對照品儲備液 Std-Stock (200 mg/L) 精密稱取王不留行環 A 對照品 2.0 mg，溶解於 10 mL 甲醇中。 王不留行環 A 對照品溶液 Std-AS 精密吸取王不留行環 A 對照品儲備液適量，以甲醇稀釋製成含王不留行 環 A 分別為 8、20、60、100、160 mg/L 系列的對照品溶液。 供試品溶液 精密稱取本品粉末 0.5 g，置 50-mL 離心管中，加甲醇 40 mL，超聲（240 W） 處理 30 分鐘，離心 5 分鐘（約 5000 × g）。取上清液轉移於 200-mL 圓底燒瓶 中，重複提取 2 次，合併提取液，用旋轉蒸發器減壓蒸乾，殘渣溶於甲醇， 轉移於 2-mL 量瓶中，加甲醇至刻度，用 0.45-µm 微孔濾膜（PTFE）濾過，即 得。 色譜系統 液相色譜：二極管陣列檢測器，檢測波長 219 nm；4.6 × 250 mm 十八烷基鍵 合硅膠（5 µm）填充柱；柱溫為 35℃；流速約 1.0 mL/min。流動相為甲醇 - 水 （50 : 50, v/v）的混合溶液；流程約 30 分鐘。 系統適用性要求 將王不留行環 A 對照品溶液 Std-AS（60 mg/L）20 µL，注入液相色譜儀， 至少重複 5 次。系統適用性參數的要求如下：王不留行環 A 的峰面積相 對標準偏差應不大於 5.0%；王不留行環 A 峰的保留時間相對標準偏差應 不大於 2.0%；理論塔板數按王不留行環 A 峰計算應不低於 1500。 供試品測試中王不留行環 A 峰與鄰近峰之間的分離度應不低於 1.5。 316 王不留行 標準曲 綫 將王不留行環 A 系列對照品溶液 Std-AS 各 20 µL，注入液相色譜儀，並記 錄色譜圖。以王不留行環 A 的峰面積與相應濃度作圖。從相應 5 點的標 準曲 得斜率、截距與相關系數。 操作程序 將供試品溶液 20 µL，注入液相色譜儀，並記錄色譜圖。與王不留行環 A 對照品溶液 Std-AS 色譜圖中王不留行環 A 峰的保留時間比較，鑒定 供試品溶液色譜圖中王不留行環 A 峰。二色譜圖中王不留行環 A 相應 峰的保留時間相差應不大於 2.0%。測定峰面積，按附錄 IV（B）公式計算 供試品溶液中王不留行環 A 的濃度（mg/L），並計算樣品中王不留行環 A 的百分含量。 限度 按乾燥品計算，本品含王不留行環 A（C31H43N7O6）不少於 0.028%。