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利用生物素标记抗体及过氧化物酶生物素_亲和素复合物检测细菌性抗原的酶免疫测定法

2012-07-10 1页 pdf 106KB 43阅读

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利用生物素标记抗体及过氧化物酶生物素_亲和素复合物检测细菌性抗原的酶免疫测定法
中, � �份 � 。增高 !� ∀ # ∃写%。 测定 � & ∋ (的 ,)∗ 例 , 有 )∃ 例� & ∋ (和 � + , 均低 , 其 −一., ∀ 例 !/ 0 # 了1 %抗 � 一 23 4 抗体增高。 因此 , 抗 � 5 2 3 , 抗体的侧定在� + 4及� & ∋ (均低的慢 ‘性 瓣膜病时 , 意义!6 7 4 作为链球菌病因学诊断时有一定 # ∗ ∗ ) %。 因此 , 在风湿热及风湿 性 心 胜 病 高 发 区 , 测定血清中抗 � 一 23 4 抗体的方 法值得 推荐使用。 ! 夏哲智摘 洪校乐校 % 上清液 。 因而 , 前者灵敏度比后者高 / 一 )0 倍。 用生物素标记免疫反应物 , 在理沦8 9其 有许多优越性 。 由于生物素是小分子 , 生物 素标 记不会明显改变抗体分子的大小或其扩 散特性 。 此外 , 可通过简便的分离程序如透 析法 , 容易地分离未反应的生物素与生物素 化杭体。 最后 , 山于一个亲和素分子可有效 地结合四个生物素分子, 使抗原一抗 休 反应 在亲和素一生物素反应层获得放大 。 ! 李绍康摘 章谷生校 % 。0: 利用生物素标记抗体及过氧化物 酶 生 物素一亲和素复合物检测细菌性 杭 原 的 酶免疫洒定法 · 〔; , −< = > ? −− 等 ≅ Α ΒΧ Χ 一, > , − Δ = ΕΦ , Γ ) : Η Ι ∃ 0 ≅ Ι 工: !英文 % 〕 本文报道一在 灵敏的酶免疫测试系统中用 生物素 ‘( 沁 Εϑ川 标 记抗体 , 测定嗜血性流感 杆菌Κ型的纯多聚核醇磷酸盐 !6 ? ΑΛ% 及 肺炎 球菌抗原。 生物素化免疫球蛋 白 , −Μ− 月Α∋ 一 择 基唬拍酞亚胺生物素酷缀合法形成 。 用微 鼠 滴定板包被抗6? 6 后 , 孔内依次加入待测样 本 , 生物素标记的兔抗 6? 6 、 ΒΝ Ο 过氧化物 酶标记的亲和 素 !� Π ϑΓ Μ−− % , 生 物素 复 合物 !� ( 2 %和底物Θ 或依次加入待测样本 , 未标 记的兔抗6?Β , 、 飞 Ο 生物索标记的杭兔 −Ν Ο 、 过氧化物酶标 记的汽( 2和底物。 测%ΑΜ.Ρ炎球菌 抗原 也用同法。 采用 89述系统 可 检 测 ∗ # 比 )ΙΝ Σ −>− 、 6对 而荧光标记抗兔 ΒΝ Ο 和过 氧化 物酶标记的抗荧光素只能检测 , # Ο/ > Ν加−抗 原 。 因而生物索系统的灵敏度 比其它测试系 统高约 / 倍。 同样 , 采用生物素标记杭体的 酶免疫测试法可检测 ) ≅ 0 /∗ , ∗ ∗ ∗ 稀释的纯化 肺炎球菌抗原 , 相 当于 , # > Ν Σ ΒΤ− 的 灵敏 度 水平 。 此系统也 ,丁检测 ) ≅ 0 /∗ , ∗∗ 。稀释的%Μ−ΒΜ’ 炎球菌−沈型肉汤培养液 !原液 一含菌体约 )∗ ’Σ Χ − % 中的抗原 。 .可用过氧化物酶标 记的兔抗 肺 炎球 菌抗体 , 只能检测 Ι # 加 Ν Σ Χ −纯 化 月#.− 炎你菌抗原和打 /。, ∗叨稀释的 )工型细饱培养 ∗ ∀ ∗ 应用对流免疫电泳诊断艰难梭菌一相关 结肠炎的评价 Υ ≅ , ) ’2 等 ≅ Α ) ∀ !/ % ≅ 0 ς ∗ ! 英文 2 −ϑ> Δ 宝= Ρ , Κ ϑ, − ) : Η Ι % 〕 艰难梭菌及其毒素是抗生索一相关腹泻 病 !� � & % 发病机理的中心环节 。 选 择 培养 基和鉴别培养基的应用促进 了 � � & 的 实验 诊断 。 用细胞培养证明粪便滤液中有艇难梭 菌毒素也是一种具有诊断意义的实验方法。 缺少细胞培养条件的临床检验室则 可应用对 流免疫电泳 !2ΒΩ % 检测培养物及粪便滤液中 的毒素。 这是一种快速 、 简便的试验方法。 本文拟就 2Β Ω 、 细胞培养和分离培 养三种方 法作 一 比较。 从/ ∃0 例 � � & 患者取/ ∀) 份粪 便标本。 制备粪便滤液 的方 法 ≅ 成 形便 用 −, ( + 缓冲液 Ξ ≅ �稀释 , ) ∗ ∗ ∗ :离心 Ι&分沙)‘, 8仁 清液用孔径 ∗ # / ∃ Ψ、Χ 的滤膜滤过 Θ 稀便 则直 接离心后过滤 , 置 / ℃冰箱待用。 取 �∗ 衅末 稀释粪便滤液或阳性对照加在 ) 1琼脂糖板 阴极一侧孔 内, Ψ司量羊抗毒 索加入 阳极 孔 内。 另取未 免疫的羊血清作为非特异性反应 对 Μ橄。 Ρ匕泳 %≅)」6−− # � 、 离子强度∗ # ∗ ∃ )飞勺巴比 妥缓冲液 , 电压 Ι ∗ Χ � , 泳Ι∗ 分钟。 ≅ 电泳结 束立即观察沉淀线 , / ℃过夜后再复查 。 先 便滤液 与抗毒索和非免疫 羊血清同时出现沉 淀线为 一)卜特异性反应 Θ 出现明显且界限清晰 的单条或多条沉淀线为阳性 Θ 邓沉淀线或虽 有但宽而弥散则为阴性。 细胞毒试验以培养 一 ) / Ι 一
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