118 例 少精子及无精子者的细胞遗传学分析

118 例少精子及无精子者的细胞遗传学分析 张建林 ,张玉泉 　(江苏南通医学院附属医院妇产科 ,226001) 摘 　要 : 　目的 　探讨染色体核型分析在少精子及无精子者中存在的意义。方法 　对 2000 年 1 月～2004 年 8 月来我 院就诊的男性不育患者 ,凡精液记数小于 20 ×106 者取外周血淋巴细胞培养 ,常规制片 G显带 ,进行染色体核型分析。结 果 　染色体核型正常 65 例 ,发现异常核型 53 例 ,异常检出率 44. 92 %。异常核型主要涉及性染色体的数目异常 , 共计 40 例 ,占异常检出者的 75. 47 % ;性染色体结构异常 12 例 ,占异常检出者的 22. 64 % ;常染色体 1 例 ,占异常检出者的 1. 89 %。 结论 　对少精子及无精子者进行染色体核型分析十分必要 ,这不仅有助于病因诊断与分析 ,而且也有助于临床的处理和指 导。 关键词 :少精子症及无精子症 ;染色体异常 ;核型分析 中图分类号 :R71116 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :1006 - 9534(2005) - 05 - 0049 - 02 The cytogenetics analysis of 118 cases with oligospermia and azoospermia. ZHA N G Jian - lin , ZHA N G Y u - quan. ( Dept . of Objectit rics and Gynecology , A f f iliated Hospital of N antong Medical College , Jiangsu , 226001) Abstract : Objective : To study the meaning of the karyotype analysis in oligospermia and azoospermia. Methods : Blood sam2 ples from 118 patients whose sperm amount was less than 20 ×106 were regular cultured , proceeding , G - banding and analysed. Results : 65 patients are normal ; 53 patients are abnormal(44. 92 %) . The abnormal is concerned sex chromosome’s number that amounts to 40 patients. 12 patients are the structure abnormal. One patient is autosome abnormal. Conclusion : It is necessary to take the Karyotype analysis of chromosome in patients who had oligospermia and azoospermia. It is not only to assist analysis the origin of the disease but also to supply important references for clinical therapy. Key words : Oligospermia and azoospermia ; Chromosomal anomaly ; Karyotype analysis 　　在男性不育患者中约有 20 %是因为精子生成障碍所 致的特发无精子或少精子。引起无精子或少精子原因复 杂 , 遗传缺陷是其中的重要原因之一。因此 , 在这类患者 中进行染色体核型分析显得尤为重要。本室自 2000 年 1 月至 2004 年 7 月对 118 例就诊的无精子或少精子患者进 行了外周血淋巴细胞染色体检查 ,发现异常核型 53 例 ,现 报告如下。 对象与方法 一、对象 :2000 年 1 月至 2004 年 7 月在我院不孕不育 门诊、男性科门诊咨询者中筛选出无精子或少精子患者。 精液检查 (系采用北京伟力彩色精子质量检测分析系统 , WHO 诊断)两次 ,小于 20 ×106 者抽取外周血进行染 色体检查。 二、方法 :每例患者均在无菌操作下 ,抽取静脉血 1～ 1. 5ml ,肝素抗凝 ,接种于含小牛血清 20 % ,PHA 4 %的 RP2 MI 1640 培养基中 ,放入 CO2 培养箱 37 ℃培养 68h ,加入秋 水酰胺使其终浓度为 0. 05μg/ ml , 继续培养 1h 收获。用常 规方法制备染色体标本。G 显带处理 ,特殊病例加做 R 带。每例标本记数 30 个中期分裂相 ,异常者记数 50～100 个 ,分析 5 个核型。 结 果 在 118 例无精子或少精子者的细胞遗传学检查中 ,共 检出异常染色体核型 53 例 ,异常检出率 44. 92 % ,染色体 异常核型明显高于普通人群。在检出的异常核型中 ,性染 色体数目异常 40 例 ,占 75. 47 % ;性染色体结构异常 12 例 ,占 22. 64 % ;常染色体结构异常 1 例 ,占 1. 89 %。染色 体核型情况请见。 53 例染色体异常核型分类 分类 　　　异常核型 例数 性染色体数目异常 47 ,XXY 37 48 ,XXYY/ 47 ,XXY 1 47 ,XXY/ 46 ,XY 1 46 ,XY/ 45 ,X 1 性染色体结构异常 大 Y 7 小 Y 5 常染色体结构异常 46 ,XY ,inv(9) 1 讨 论 精子发生是一个独特、复杂、持续的分化过程 ,需经过 两次成熟分裂、核物质减半、细胞分化、形态转变等 ,是在多 种因子严格调控和顺序表达下进行的。少精、无精为男性 生殖障碍主要原因之一 ,国内曾有学者报道该病染色体异 常率约为 41. 7 %[ 1 ] ,作者的研究结果约为 44. 92 %。 一、克氏综合征 ( Klinefelter 综合征) 其典型的核型为 47 ,XXY ,在异常检出者中占 69. 81 % (37/ 53) 。此类患者 均表现出典型的体征 :身材高大、四肢修长、皮肤细腻、男性 ·94·中国优生与遗传杂志 2005 年第 13 卷第 5 期 © 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. 第二性征发育差、睾丸小而硬、无精子。多余的 X 染色体 是由于亲代配子减数分裂时 X 染色体不分离所造成。Y 染色体上有睾丸决定因子 ( TDF) 决定睾丸的形成 ,许多实 验已证实 SR Y是 TDF 的最佳候选基因 ,有 TDF 或 SR Y的 存在 ,患者体内就有睾丸组织的存在。47 , XXY患者有正 常的 Y染色体 ,所以有睾丸的发育 ,但它的发育与分化不 正常 ,因为性别的决定与分化很可能是以 SR Y 基因为主 导 ,一系列基因参与的协调表达的调控串模式[ 2 ] 。47 , XXY患者睾丸发育差而出现少精、无精的现象 ,是由于 X 染色体上参与性别决定的基因剂量增加 ,影响性别决定“调 控串模式”的协调表达而造成的。 克氏综合征所致不育显而易见 ,为了防止由此所造成 的不幸婚姻的组合与解体 ,确保家庭与社会的稳定 ,在征得 双方理解的基础上进行婚前的外周血染色体核型分析已势 在必行。 二、关于 Y染色体与临床的关系一直处于争论阶段。 多数人认为系多态现象 ,属正常变异 ,无临床意义。但有学 者认为大 Y是来自染色质中 DNA 过多的重复 ,造成有丝 分裂发生错误或影响基因调节及细胞分化 ,从而导致不良 妊娠[ 3 ] 。本文报道了 7 例大 Y均与流产有关 ,其中最多一 次流产 5 次。小 Y考虑染色体排列过分紧密 ,影响了基因 功能的发挥或者存在 G带染色体分析未能辨清的微小缺 失。至于大、小 Y染色体存在的意义有待进一步研究。 三、有文章表明常染色体异常在无精子患者中所占比 例达 33. 3 %[ 4 ] ,究其机理尚未明确。而本文仅统计到 1 例 常染色体异常者 ,这是否与统计量的大小、研究对象有关 , 我们将作进一步探讨。 四、在生殖医学日益发展的今天 ,对无精子、少精子所 致不育的治疗逐渐成熟。国外报道在一些 Klinefelter 综合 征病人睾丸活检中找到成熟精子进行卵胞浆内单精子显微 注射 (intracytoplasmic sperm injection , ICSI) 而获得正常小 孩[ 5 ] 。这给我们很好的启迪 ,对无精子、少精子者进行 IC2 SI ,同时对极体、卵裂球、滋养外胚层细胞进行植入前遗传 学诊断 ( PGD)无疑是一方向 ,我们将进行这方面的研究。 参 考 文 献 [1 ]朱祖华 ,窦容 ,高湘. 60 例无精子症患者的细胞遗传学分析 [J ] . 中国优生与遗传杂志 ,2000 ,8 (1) :38. 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N Engl J Med ,1998 ,338 (9) :588 - 590. 收稿日期 :2004 - 08 - 18 　　(上接第 27 页) 出阳性 ( 49. 4 %) ,而且与 HBeAg 阳性组及“HBsAg + 、 HBcAb +”标志物载量并无统计学差异 ( P > 0. 05) 。由此 可见 HBeAg 消失至 HBeAb 产生 ,不能一概认为是病情已 经恢复 ,病毒复制停止的一个指标。 在“HBsAg + 、HBcAb + ”组中 , HBV DNA 检出率也比 较高。这种现象可能与 HBV - DNA 1896 位核苷酸的变异 相关[ 3 ] :这一点突变阻止了前 C 区序列的表达 ,因而妨碍 了 HBeAg 的分泌 ,但病毒本身复制不受影响 ,造成 HBeAg 阴性的 HBV 感染。而 C 基因的变异区段基本都是 B、T 细 胞识别的抗原显性表位 ,因此能影响宿主清除体内的 HBV[ 4 ] ,使患者血中 HBV - DNA 水平居高不下 ,这部分人 具有很高的传染性。此研究结果将另文报道。 40 份抗 HBs 阳性 ,抗 HBc 阳性中的 2 例 HBV - DNA 阳性 ,可能是 HBV 基因的 S 区发生有意义的点突变或插 入、缺失突变[ 5 ] ,使体内的 HBV 成为免疫或疫苗逃逸株 , 体内的抗 - HBs 不能完全清除血中的 HBV。 综上所述 ,我们认为 HBV - M 与 HBV - DNA 二者之 间互有联系但又有所不同。血清标志物是反映机体的免疫 功能即抗原抗体反应水平的指标 ,它与患者病情有一定的 联系 ,但它并不能确定患者是现症感染、既往感染或恢复期 感染 ,对指导抗病毒药物的使用存在缺陷。而 HBV - DNA 直接检测血中的病毒含量 ,更能直接反应 HBV 的感染程度 和病毒复制情况 ,也能对乙肝药物的疗效进行监测。因此 我们主张对乙肝患者进行联合检测才有利于为乙肝患者的 正确诊断及药物治疗效果提供客观依据。 参 考 文 献 [1 ]李欣华. HBV DNA 定量与乙肝血清标志物之间关系探讨 [J ] . 临床肝胆病杂志 ,2003 ,2 (19) :118 - 119. [ 2 ]隋支华 ,杨志国 ,许家璋 ,等. 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