羟乙基淀粉原料标准

羟乙基淀粉原料检测欧洲药典 [C6H10O5(C2H4O)x]n x-取代基摩尔数 名称 羟乙基淀粉是含有支链的玉米淀粉或马铃薯淀粉被羟乙基部分取代后的产物。羟乙基淀粉由两个指标来表示，即平均分子量（Mw）和每个无水葡萄糖基含有的羟乙基取代基的数量（取代基摩尔数MS）； 羟乙基淀粉也可用是在C2或C6取代的比率来表示。平均分子量（Mw）、取代基摩尔数（MS）及C2/C6比率数值取决于制备过程中的反应条件。 制备 羟乙基淀粉是通过玉米淀粉或马铃薯淀粉经酸水解，与环氧乙烷发生羟乙基取代，最后经过超滤制得。 性状 外观：为白色或类白色粉末 溶解性：在水及二甲亚砜中易溶，在无水乙醇中部分溶解。 在相对湿度达到12%～15%时易吸潮。 鉴别 第一鉴别：A，C 第二鉴别：B，C A．红外吸收光谱 对照品：取中等分子量的羟乙基淀粉对照品 结果：供试品吸收光谱应与对照品一致。取代基不同，可以使吸收带强度发生变化。 B．取本品溶液S（见检查项下），加0.05mol/L的碘试液0.1ml，溶液应显红棕或紫蓝色。 C．分子量（见检查项下） 检查 溶液S：取经干燥的本品5.0g，加新沸放冷的水溶解并稀释至100ml，即得。 溶液颜色：溶液S与Ⅱ号标准液比较，不得更浓。 pH值：取溶液S加饱和氯化钾溶液0.2ml，进行测定。应为4.5～7.0 吸光度：取溶液S经0.2μm滤膜滤过，在400nm处的吸光度，不得过0.025。 分子量（Mw）及分子量分布 （分子筛色谱） 缓冲液配制：取醋酸钠54.34g加冰醋酸100ml，用水稀释至1000ml，即得。 供试品储备液制备：取本品2.0g，加水溶解并加水至50ml，加入上述缓冲液10ml，加水至100ml，即得。 对照溶液（a）制备： 如果分子量名义值在300000以下，用中等分子量的羟乙基淀粉对照品； 如果分子量名义值在300000以上，用高分子量的羟乙基淀粉对照品。 取羟乙基淀粉对照品0.4g，加水10ml溶解，加上述缓冲液2.0ml，用水稀释至20ml。 对照溶液（b）制备：取对照溶液（a）10.0ml，用流动相稀释至20ml，即得。 对照溶液（c）制备：取对照溶液（b）10.0ml，用流动相稀释至20ml，即得。 对照溶液（d）制备：取对照溶液（c）10.0ml，用流动相稀释至20ml，即得。 色谱柱： 固定相：羟基化聚甲基丙烯酸酯凝胶 分离系统用到4根色谱柱 柱长 内径 粒度 孔径 0.30 0.30 0.30 0.30 7.5 7.5 7.5 7.5 17 17 10 10 >100 100 20 12.5 流动相：取上述缓冲液加水稀释至1000ml，即得。 流速：0.5～1.0ml/min 检测器：连接有恒温折光仪的倍角激光散射检测器 进样量：50μl 如何选择合适的供试品浓度：取对照品溶液（a）和（b）进样，如果通过对照品溶液（b）测得的平均分子量不超过经对照品溶液（a）测得的平均分子量的3.%，就选择对照品溶液（a）进行系统适用性试验。 如果超过3.0%，取对照品溶液（c）进样，如果通过对照品溶液（c）测得的平均分子量不超过经对照品溶液（b）测得的平均分子量的3.%，就选择对照品溶液（b）进行系统适用性试验。 如果超过3.0%，取对照品溶液（d）进样，如果通过对照品溶液（d）测得的平均分子量不超过经对照品溶液（c）测得的平均分子量的3.%，就选择对照品溶液（c）进行系统适用性试验。 系统适用性试验 平均分子量：不超过羟乙基淀粉对照品标示量的5% 如有需要，可稀释供试品储备液，使浓度与系统适应性试验所用的对照品溶液的浓度相近。 结果：选择合适的积分计算平均分子量，及10%最低值和10%最大值的质量分率。 低分子量（2000～100000） 中分子量（100000～300000） 高分子量（300000～900000） 测得的分子量=分子量名义值±15% 10%最低分率>10%分子量名义值 10%最低分率>15000 10%最低分率>15000 10%最高分率<300%分子量名义值 10%最高分率<300%分子量名义值 10%最高分率<500%分子量名义值 C2/C6比率（气相色谱法） 溶液A：取等体积的稀硫酸与水混合均匀，即得。 供试品溶液制备：取本品0.18g，置5ml量瓶中，加溶液A 3.0ml，闭塞，密封，振摇使溶解，100℃加热4小时，并时时振摇，冷却至室温，加碳酸钡0.9g，轻轻振摇，9000g离心15分钟，用pH试纸检查上清液pH值，如溶液仍显酸性，再取碳酸钡0.2g，分次加入，直至溶液显中性，用0.45μm滤膜滤过，取滤液0.5ml置自动进样瓶中，40℃蒸干，残渣加嘧啶0.5ml，N,O-2（三甲基硅烷基）乙酰胺0.25ml，和三甲基氯硅烷25μl，密封，40℃加热1小时，并时时振摇。冷却至室温，每瓶进样3次。同时制备双份样品。 对照品溶液制备：取中分子量的羟乙基淀粉对照品，同法制备，即得。 色谱柱： 规格：长15m 直径0.32mm 固定相：聚（乙烷）硅氧烷（膜厚0.25μm） 载气：氢气（69kPa） 分流比：1:20 温度： 时间（min） 温度（℃） 柱 进样口 检测器 0～1 1～25 25～28 150 150→270 270 250 300 检测器：FID 进样量：1μl 峰检出：通过对照品溶液色谱图检出以下物质：衍生物1、衍生物2、衍生物3、2-O-羟乙基-α-D-葡萄糖、6-O-羟乙基-α-D-葡萄糖、2-O-羟乙基-β-D-葡萄糖和6-O-羟乙基-β-D-葡萄糖。 系统适用性试验：对照品溶液进样 分离度：2-O-羟乙基-β-D-葡萄糖和6-O-羟乙基-β-D-葡萄糖分离度应不小于1.5。 对称因子：衍生物1峰的对称因子应为0.6～1.5 重复性：衍生物1连续进样3次，峰面积RSD不得过5.0% C2/C6比率计算公式： A1=衍生物1峰面积 A2=衍生物2峰面积 A3=衍生物3峰面积 A4=2-O-羟乙基-α-D-葡萄糖峰面积 A5=2-O-羟乙基-β-D-葡萄糖峰面积 A6=6-O-羟乙基-α-D-葡萄糖峰面积 A7=6-O-羟乙基-β-D-葡萄糖峰面积 测定两个供试品，求其平均值。（两个供试品求出的比率值相对平均偏差不得过5.0%） 限度：不得过名义值的20% 取代基摩尔数（MS） （气相色谱法） 羟乙基取代基的含量应在氢碘酸水解和碘乙烷羟乙基化完成后测定。 内标溶液制备：取甲苯1.0ml，加二甲苯稀释至200ml，即得。 供试品溶液：取本品50.0mg，置5ml量瓶中，加入己二酸0.10～0.15g，加入内标溶液1.0ml，氢碘酸2.0ml，闭塞，用开有圆孔的铝盖密封，同时制备5个样品。 对照品溶液制备：取5ml量瓶7个，各加入己二酸0.10～0.15g，加入内标溶液1.0ml，氢碘酸2.0ml，闭塞，用开有圆孔的铝盖密封，用感量为0.01mg的天平称定重量。用100μl注射器，刺破瓶塞，分别加入碘乙烷10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg和70mg，再称定重量，计算出加入碘乙烷的量。150℃加热10小时，放冷，称定重量，精确到1mg，去除减失重量超过5mg的样品，取供试品4瓶，对照品5瓶分别量取溶液上层各100μl，置自动进样瓶中，加二甲苯1.0ml稀释，立即密封，轻轻振摇。 色谱柱： 材质：熔融石英 规格：长30m 直径：0.53mm 固定相：聚[(键和硅胶)(苯基)][乙烷]硅氧烷 （膜厚3μm） 载气：氦气 流速：8ml/min 分流比：1:20 温度： 时间（min） 温度（℃） 柱 进样口 检测器 0～4 4～16 16～20 50 50→230 230 200 280 检测器：FID 进样量：1μl；每个样品进样2次 出峰顺序：碘乙烷、甲苯 系统适用性试验：对照品溶液进样 分离度：碘乙烷和甲苯应不小于1.5 计算每张色谱图中，碘乙烷和内标的峰面积的比值。求出对照品溶液碘甲烷加入量（mg）和峰面积的线性回归方程，相关系数不得低于0.990。 结果：通过如下公式计算供试品中碘乙烷的含量（mg）： A=供试品溶液中碘甲烷和内标的峰面积的比值 B=回归曲线的y轴截距 M=回归曲线的斜率 通过下面公式计算环氧乙烷的百分含量： m=供试品取样量（mg） 44.05=环氧乙烷分子量 155.97=碘乙烷分子量 通过下面公式计算取代基摩尔数（MS）： 162.14=无水葡萄糖分子量 44.05=环氧乙烷分子量 通过4个供试品样品计算取代基摩尔数（MS）的平均值 限度：应为0.05～2.4，且小于名义值的8.0% 乙二醇 （液相色谱法） 供试品溶液制备：取经干燥后的本品1.0g，加水溶解并稀释至50ml，即得。 对照品溶液制备：取乙二醇0.800g，加水稀释至100ml，精密量取2.0ml稀释至200ml，混匀，精密量取2.0ml稀释至200ml，即得。 预柱： 规格：长0.01m 直径4.0mm 固定相：十八烷基键合硅胶（5μm） 色谱柱： 规格：长0.25m 直径：4.6mm 固定相：十八烷基键合硅胶（5μm） 柱温：30℃ 流动相：水 流速：1.0ml/min 洗柱溶液：取2mol/L氢氧化钠溶液750ml加水稀释至1000ml。 洗柱溶液流速：0.2ml/min 检测器：脉冲电流计检测器 进样量：20μl 运行时间：乙二醇保留时间的2.5倍 保留时间：乙二醇=约4分钟 系统适用性试验：对照品溶液进样 信噪比：以主峰计，不得小于10 重复性：连续6次进样的RSD不得大于10.0% 最多完成8次进样，用以下程序冲柱一次 冲洗液：乙腈-水（20:80 V/V） 时间（min） 流动相（%） 冲洗液（%） 0～15 15～20 20～25 25～30 30～100 75 75→0 0 0→100 100 25 25→100 100 100→0 0 限度：乙二醇：不得大于对照品溶液中乙二醇的峰面积（40ppm） 2-氯乙醇 （气相色谱法） 混合溶剂：甲醇-乙腈（25:75 V/V） 内标溶液制备：取2,6-二甲基苯胺0.250g加混合溶剂溶解并稀释至50ml，取0.5ml加混合溶剂稀释至50ml，即得。 供试品溶液制备：取本品1.0g，置20ml量瓶中，加混合溶剂10.0ml，超声处理3.5小时，冷却至室温，取1.0ml，加内标溶液0.8ml，即得。 对照品溶液制备：取2-氯乙醇0.250g，加水稀释至50ml，取1.0ml加水稀释至100ml，再取1.0ml加水稀释至100ml，混匀，取1.0ml，加内标溶液0.8ml，即得。 预柱： 材质：熔融石英 规格：长10ml 直径0.53mm 固定相：活化聚乙二醇 色谱柱： 材质：熔融石英 规格：长30m 直径0.32mm 固定相：聚乙二醇20000（膜厚0.25μm） 载气：氢气 流速：2.9ml/min 分流比：执行以下程序 时间（min） 分流/不分流 分流比 初始 0.01 0.5 on off on 1:20 1:20 1:20 温度： 时间（min） 温度（℃） 柱 进样口 检测器 0～4 4～23.5 23.5～28.5 45 45→240 240 250 270 检测器：FID 进样量：1μl 系统适用性试验：对照品溶液进样 信噪比：以2-氯乙醇峰计，不得小于10 重复性：连续6次进样的RSD不得大于10.0% 限度： 2-氯乙醇：供试品溶液中2-氯乙醇峰面积与内标峰面积的比值不得大于对照品溶液中2-氯乙醇峰面积与内标峰面积的比值。（5ppm） 环氧乙烷 （顶空-气相色谱法） 供试品溶液制备：取本品1.0g置顶空瓶中，加水1.0ml溶解，密封，即得。同时制备双份样品。 对照品储备液制备：取水80ml，置100ml量瓶中，4℃放置至少30min。加入环氧乙烷1.0g，精密称定加入环氧乙烷的量，加水至100ml，冰箱中储存，4周内可用。 对照品溶液（a）制备：取对照品储备液1.0ml，加水稀释至100ml，摇匀，取1.0ml加水稀释至100ml，即得，24小时内可用。 对照品溶液（b）制备：取本品1.0g，加对照品溶液（a）1.0ml，密封，即得。同时制备双份样品。 色谱柱： 材质：石英 规格：长30m 直径0.32mm 固定相：聚（键合硅胶）（苯基）（二甲基）硅氧烷 （膜厚1.5μm） 载气：氦气（110.3kPa） 分流比：1:35 顶空条件： 平衡温度：80℃ 平衡时间：40min 传输线温度：150℃ 充压时间：2.0min 进样时间：3s 温度： 时间（min） 温度（℃） 柱 进样口 检测器 0～20 20～30 30～40 40 40→240 240 140 250 检测器：FID 进样量：选择供试品和对照品溶液（b）合适的进样体积 系统适用性试验： 信噪比：以对照品溶液（b）中环氧乙烷峰计不得小于10 限度：环氧乙烷：供试品溶液中环氧乙烷峰面积不得大于对照品溶液（b）中环氧乙烷峰面积的0.5倍。（1ppm） 氯化钠 不得过0.1% 供试品溶液制备：取本品10.0g置250ml锥形瓶中，加水100ml溶解，加稀硝酸2ml，9g/L氯化钠溶液5.0ml，混匀，即得。 对照品溶液制备：在250ml锥形瓶中，加水100ml，加稀硝酸2ml，9g/L氯化钠溶液5.0ml，混匀，即得。 电位滴定：0.1mol/L硝酸银滴定液 通过下面公式计算氯化钠百分含量： n1=供试品溶液消耗0.1mol/L硝酸银滴定液的体积（ml） n2=对照品溶液消耗0.1mol/L硝酸银滴定液的体积（ml） m=供试品取样量 重金属 不得过10ppm 取本品2g，加水溶解并稀释至20ml，取12ml进行试验。取标准铅试液（1ppm Pb）制备对照溶液。 干燥失重 不得过15.0% 取本品1.000g，105℃下干燥。 细菌内毒素 不得过2.5IU/g 微生物限度 总需氧微生物数：验收准则 102CFU/g _1393950663.unknown _1393951327.unknown _1393955866.unknown _1393950974.unknown _1393950510.unknown