测定酸性磷酸酯的新试剂荧光素单磷酸酯镁的合成

3 第 18卷第 3期 唐慧安等：测定酸性磷酸酯的新试剂荧光素单磷酸酯镁的合成 l ，7尹一， 化 学诫 刑 ，l996，1 8(3j．179～ 1 8o ．z／ -，7 测定酸性磷酸酯的新试剂荧光素 吨 一 一 单磷酸酯镁的合成～ ， 62 、? 生兰塞： 兰垂麦 f--qet~- 李晴宇 摘要 合成了一种测定酶的新试荆荧光素单磷酸酯镁，通过元素分析、红外 热谱确证了其结构，井探讨了其生成 酮磷酸酯 或萘酚 AS—BIS(6一溴一3羟基 2萘 基邻茴香胺)口 的磷酸二氢酯作底物。作者用荧 光索二磷酸酯进行检测0 也取得了满意的结 果。荧光光度法具有很高的灵敏度 ，在荧光免疫 分析中有广泛应用 本文用荧光索和三氯氧磷 在四氢呋喃介质中合成了荧光索单磷酸酯 ，再 经MgCI ·2H O处理得镁盐，合成了可用于酸 性磷酸酯酶测定的灵敏试剂荧光索单磷酸酯 镁 。 1 实验部分 ’ 1．1 仪器与试剂 1106型 元 素 分 析仪 (Carloerba)，FT 1 70SX红外光谱仪(Nicolet)，180—80型原子吸 收分光光度计(日立)，RF一540荧光分光光度计 (岛津)，SPM一10A型数字酸度计。荧光索、四氢 呋喃、三氯氧磷、吡啶、氢氧化钠、盐酸均为分析 纯 。 1．2 荧光素单磷酸酯(镁盐)的合成 本文参考百里酚酞单磷酯 的合成方法， 首次合成了荧光素单磷酸酯(镁盐)。将 8．3g荧 光索放入盛有 65mL无水四氢呋喃的锥形瓶 中．回流助溶 ，搅拌 下加入 5mL POCI ．回流 30min后，加入 1．5mI 吡啶．再回流 150min． 然后用 100mL 2 mol·dm 盐酸中和吡啶并使 。 1，武 刮 加酸时强烈搅拌。用分液 漏斗分离，弃去水相，如此重复加酸、分液 3次， 然后 向有机相 中加入 250mL水 ，滴加 2o NaOH 溶 液 至 pH8．0，加 入 3．8g MgC12· 2H。O，即有沉淀生成 ，滤出沉淀物，用二次蒸馏 水洗 3次 ，置入干燥器中至恒重 得产物 7．2g， 产率为 87 。 荧光索单磷酸酯的元素分析结果列 于 1 表 1 荧光素单磷酸酯镁盐的元素古量 含 量 ， 元 素 古 法 计算值 宴测值 C 47 47 元 索分析 H 3．76 3．60 Mg 原 吸收 1-3 IR谱 从荧光索单磷酸酯(镁盐)的红外光谱图可 以看出，荧光索在形成单磷酸酯后．由于磷酸酯 基的吸电子作用 ．使苯环上的电子云发生移动， 因 而 苯 环上 的 特 征 吸 收 分 别 由荧 光 素 的 1595cm 、1464cm 向 高 波 数 移 动 ，移 到 1609cm～、1493cm 。另外．单磷酸酯的 IR谱 收稿 H期 ：19州 斗 lz月 5}1 - ． 甘肃省 自然科 学基 缸 省 教委科 研萆 金资助课题 维普资讯 http://www.cqvip.com 化 学 试 剂 1 996疰 中新 出现的 1169em 是 荧光 素单磷 酸 酯生 成 后 ；。的振动吸收 。荧光索单磷酸酯中配位水 的一个振动吸收被淹没于苯环的 1609cm--的 振动吸收中 ，这是由 1f原体 系共轭程度消弱 所致。值得注意的是 ，荧光素羧基中的 Vc—o振动 吸收由原来的 1707cm 移到 1763cm_。而变为 五元环内酯的 一。振动吸收。这表明在形成荧 光素单磷酸酯的荧光素的羧基发生了分子内部 亲电加成反应，H：0的另外两个振 动 出现在 3368cnl 、469cm ，其存在于热谱中亦得到证 实。其机理可能为 B式 ： 0H 0H ===一 HL 一 +20H— t 0 0H 1．4 热分析热谱数据(表 2) 表 2 热分析热谱数据 失重 率 ／ 分 解温度 ，℃ 失重 ／rag 失重 物 残 重形 式 计算值陲捌懂 61 j O 586 3H2O A ·H抑 0．900 H20 A 3．46l 3．56 表 中 A代表 M 计f0一 O A ·4H2O 即是 荧光 素单磷酸酯镁。 由热谱数据可以看出荧光素单磷酸酯(镁 盐)分子中含 4个水分子，其中 3个为结晶水 (于 61．5℃失去 )．另一分 子水 为配位 水 (于 i 60℃失去)。 由元素分析、原子吸收、红外光谱和热分析 可得出荧光素单磷酸酯(镁盐)的结构式为： MgHfO 0 合成荧光素单磷酸酯(镁盐)后我们用它测 定了酸性磷酸酯酶 ，检测下限为 1．8x10 u／ m L。 2 参考文献 【 Guilbault G G[美]著．缪辉南 ，陈石根译．酶法分析 手册．上海 ：上海科学技术出版社 ，1982：141 2 Vanghen A，Guilbau[t G G，Hackney D．Anat Chem ．， l97l，42：721 3 龚国权，王流芳 ，周云高 ，等 高等学控化学学报 ， l992，13：913 l Coleman C M ．Clin．Cfiem．A,．ta，1986，13：401 5 陈耀祖著．有机分析．北京 ：高等教育 出版社，1981： 60l srnthesis of fluorescein magnesium m onophosphate for use in the determ ination of acidic ph0sphatase Tang Huian ， Wang Liufang， Yah Shicai， Li Qingyu(Department of Chemistry，Tianshui Teaeheres Colleget Tianshui 741000)t Huaxue Shiji，1996，18 (3)，l79—80 A new reagent for the determination of acidic phosphatase was synthesized，its structure was char— acterized by elemental analysis，IR，spectrum and TG DTA．The mechanism of formation was discussed K eywords synthesis， tluorescein m agnesium m0n0ph0sphate 维普资讯 http://www.cqvip.com