【doc】 皮肤低温损伤机制中海藻糖的抗氧自由基作用

【doc】 皮肤低温损伤机制中海藻糖的抗氧自由基作用 皮肤低温损伤机制中海藻糖的抗氧自由基 作用 c 军 ad 医 PL 进 A 修学院20o5Dec. 26(6)AcadJPLAPostgradMedSchJu [文章编号]1005-1139(2005)06-0435-02 皮肤低温损伤机制中海藻糖的抗氧自由基作用 贾晓明,蔡宏 (解放军总医院第304临床部全军烧伤研究所,北京100037) ? 435? [摘要]目的:观察海藻糖在低温储存皮肤组织中的抗氧自由基损伤作用.方法:取新鲜皮肤标本做正常对 照组,另行海藻糖和二甲基亚砜处理后液氮低温储存,复温后测定皮 肤组织匀浆液中超氧化物歧化酶(SOD)活力, 过氧化脂质(LPO)代谢产物丙二醛(MDA)含量.结果:经海藻糖处理 后,低温储存的皮肤组织中SOD活力升高, 其MDA含量下降.结论:海藻糖是一种有效的稳定剂,在皮肤低温损 伤中具有抗氧自由基损伤作用. [关键词]海藻糖;氧;自由基;低温;皮肤 [中图分类号]R644[文献标识码]A Trehalose’Sprotectiveeffectsofcryopreservedskintoresistthedamageofoxygeonfree radical JIAXiao—ming,CAI(DepartmentofBurnsandPlasticSurgery,BurnsInstitute,GeneralHospital, ng100037,China) [Abstract]Objective:Toinvestigatetheprotectiveeffectsoftrehalseduringcryoinjury.Methods:Evaluatethelevelofsuper- dedismutaes(SOD)andtheamountofmalonyldialdehyde(MDA)fromthecryopreservedskin.Results:Comparingtothenor- malhumanskin,trehalosecouldenhancethevitalityofSODanddecreasetheproductionofMDAwhentheskinWasfrozen. Condusion:Itshowedthattrehalosemaypromotetheabilityoneliminationofoxygenfreeradicalanddecreasetheattackofthe oxygeonfreeradicalduringcryoinjury. [Keywords]trehalose;oxygeon;freeradical;hypothermia;skin 海藻糖是由特殊双糖分子构成的非还原性糖, 特性非常稳定,能够在高温,高寒,干燥失水等恶劣 的条件下在细胞表面形成特殊的保护膜,有效的保 护生物分子结构不被破坏.海藻糖具有抗氧化作 用,但是对于抑制皮肤组织的低温损伤却知之甚少. 笔者测定不同方法低温储存皮肤中SOD的活性及 过氧化脂质(LPO)代谢产物丙二醛(MDA)含量,旨 在探讨海藻糖的抗氧化机制,为其临床应用提供理 论依据. 1材料和方法 【收稿日期】2005-01-04[修回日期】2005-02-06 【基金项目】国家自然科学基金项目(30070298) 【作者简介】贾晓明(1954-),男,四川广元市人,1973年第三军医大 学毕业,1996年军医进修学院博士毕业,1995—1996年赴加拿大 阿尔伯塔大学烧伤整形科及低温医学实验室从事博士后研究工 作,获博士后证书;科室副主任,主任医师,教授,研究生导师,发 表学术论着100余篇,主编及参编专着8部,获国家,军队科技进 步及军队医疗成果二等奖以上奖项8项.电话:(010) 66867973,66867843 1.1材料患者烧伤整形术后所余大腿部韧厚 皮,厚约0.4—0.5mm,大小约1am×lcm的皮片若 干(取皮后4h内),分3组处理:新鲜对照组;H抗 冻液组(以20%二甲亚砜和6%丙二醇为主); 0.5mol/L~藻糖.二甲基亚砜(T/D)组.分别浸泡 后投人液氮中储存. 1.2主要试剂和器材?二甲基亚砜(Sigma公 司).?海藻糖(Sigma公司).?南京建成生物工 程公司SOD试剂盒.?实验器材:美国紫外光分光 光度计. 1.310%皮肤匀浆的制备取新鲜皮片和两种不 同方法处理后低温储存的皮片复温后,经预冷生理 盐水漂洗,滤纸拭干,分别称取重约50mg组织,剪 碎,按重量体积比(w/V)加人生理盐水配成10%, 用匀浆器匀浆. 1.4皮肤SOD活力测定参照南京建成生物工程 公司SOD试剂盒说明书方法测定SOD活力,单位 以u/ml表示. 1.5皮肤MDA含量测定1,1,3,3一四乙氧基丙 烷0.5g加人甲醇配成5mmol/L储备液,加蒸 ? 436? 馏水稀释成101xmoL/L应用标准液;取三氯醋酸 lOOg,加蒸馏水至500ml,混匀;称取三硫化巴比妥 酸(TBA)1.34g,加蒸馏水至100ml,加温使其完全 溶解后加冰醋酸100ml,混匀,避光冷藏,取10%皮 肤匀浆液lml,加20%三氯醋酸ln1l,混匀;再加入 0.67%TBA液lml,100?水溶40min,取出后立即冷 却,加正丁醇4ml,振荡后3500r/min离心10min, 取正丁醇于532nm处比色,读取OD值,单位以 nmo~g表示. 1.6统计学处理计量资料以平均数4-标准差 (4-s)表示,组间比较采用单因素方差. 2结果 海藻糖保护剂组SOD含量高于H抗冻液组 (P<0.01,等于或略低于正常对照组(P>0.01). 皮肤组织匀浆液中MDA含量结果显示:海藻糖保 护剂组低于H抗冻液组(P<0.01),略高于正常对 照组(P>0.01,表1). 表1低温储存对皮肤表皮SOD活力和MDA含量的影响 Tab1Effectofcryopreservedskinsonthecontentof SODandMDA(n=10.?s) P<O.Olwcontrolgroup 3讨论 军医进修学院2o05Dec. 26(6)AcadJPLAPostgradMedSch……’ 本实验提示在皮肤低温储存过程中加入外源性 海藻糖具有稳定超氧化物歧化酶(SOD)活性的机 能,从而提高皮肤活力.它能够在低温储存的皮肤 表层形成一种天然抗氧化防护层,一方面防止皮肤 水份的蒸发,另一方面,能有效的清除皮肤表层由于 代谢过程产生的大量超氧自由基. 海藻糖具有抗氧化作用,稳定皮肤组织中SOD 活力,提高清除OH’,02”与H:O:的能力,保护细胞 免受自由基损伤;保护细胞内抗氧化酶类活性,阻止 多价不饱和脂肪酸的过氧化反应,抑制LPO生成, 维持生物膜正常脂质结构,但具体的作用机制仍然 需要深入的研究. [参考文献】 [1]朱兆明,柴家科,贾晓明.着.皮肤储存基础与应用[M].北京 人民军医出版社,2002.9-13. [2]BuchananSS,GrossSA,AckerJP,eta1.Cryopreservationofstem cellsusingtrehalose:evaluationofthemethodusingahumanhem— atopoieticcellline[J].StemCellsDev,2004,13:295-305. [3]EmgluA,LawittsJA,TonerM,eta1.Quantitativemicminjection oftrehaloseintonl0useoocytesandzygotes.anditseffectondevel- opmcnt[J].Cryobiology,2003,46:121—134. [4]BraboD,RigleyTH,GibranN,eta1.Effectofstorageandpreset— vatlonmethodsonviabilityintransplantablehumanskinauo|fts [J].Bums,2000,26:367-378. (上接426页) 刀完成腹腔内黏连松解后全腹腔脏器探察无腹水,左右卵巢 内各见一囊肿,大小分别为3cm×3cm和5cm×4cm,表面光 滑.翻转镜头观察腹壁内侧处有两切口疝,分别约7cm× 5cm,4cm×3cm大小.两切口疝之间有一宽2cm以上的分隔 带.在左上,下腹分别再插入一个穿刺套管后用超声刀游离 双卵巢血管,给予外科夹和钛夹夹闭后切断.用无菌手套自 制成取物袋,放入腹腔将卵巢纳入其中,提至腹壁后在手套 内吸净囊肿液体后将双卵巢取出送冰冻病理检查.30min 后冰冻病理为双卵巢浆液性囊腺瘤.从左下腹穿刺套管口 插入卷成条状的聚丙烯和e.PTFE复合补片(bardcomposix 补片,15cm×20cm大小).腹腔镜下将补片铺平,补片聚丙 烯毛糙面对腹膜,.在腹壁先设计好的疝周结实组织位置 (距疝环超过2cm)用强生腔内缝合器将补片固定到前腹壁 上,固定结实完成疝修补. 1.4结果腹腔镜下利用腹壁4个穿刺套管口(1—1.5cm 小口)完成了腹腔探查,腹腔内黏连松解,应用复合补片顺利 修补复发巨大切口疝(双疝囊)和双卵巢切除.无手术并发 症,手术时间75min,术中出血30ml.术后疼痛轻微,排便, 排气时间为34h,术后第二天进食.术后住院天数为7d.患 者随访至今未见复发和不适. 2讨论腹腔镜下应用的BardComposix补片是由两层聚 丙烯补片和一层膨化四氟乙烯(e.FTFE)构成的新型复合补 片.聚丙烯层利于组织向内生长,而微孔的e.FrFE不易与 腹腔组织产生黏连,因此将聚丙烯作成外层,e.FrFE作成内 层的BardComposix补片是理想的腹腔内疝修复补片. 腹腔镜下腹部切口疝修补手术难度高,其技术难点在于 伸入的器械和修补材料的固定均在腹壁同一水平面上,且常 需要翻转镜头来观察腹壁内侧面,操作上不方便,故在国内 尚未开展.本患者在术中发现为两处疝,且两切口疝之间有 一 宽2cm以上的分隔带.如果采用常规开口方法很可能只 修补一处切口疝,造成病灶遗漏而使手术失败.腹腔镜下可 清楚观察腹壁情况,不会有病灶遗漏.术中应用腔内缝合器 沿补片边缘钉合牢靠,符合无张力疝修补原则,未后不易复 发.本患者合并双侧卵巢囊肿,腹腔镜下不需增加腹壁的穿 刺口就同时完成了双侧卵巢切除术,体现了腹腔镜手术的微 创优越性.