早期诊断宫颈上皮内病变及宫颈鳞癌的标记物――Ki-67

早期诊断宫颈上皮内病变及宫颈鳞癌的标记物――Ki-67 [摘要] 目的:探讨宫颈上皮内病变及宫颈鳞癌的标记物――Ki-67的达及意义。方 法:应用免疫组化S-P法检测14例宫颈鳞癌、77例宫颈上皮内病变、23例正常宫颈组织中 Ki-67的表达水平，并加以。结果:?Ki-67阳性表达率在宫颈鳞癌中最高(100,)，宫 颈上皮内病变次之(93.33,,100,)，正常宫颈组最低(39.13,)。宫颈上皮内病变及宫颈鳞 癌与正常组比较，差异有统计学意义(P,0.01)。?从正常宫颈组织、宫颈上皮内病变到宫颈 鳞癌，Ki-67的表达强度逐渐增强，两者呈正相关(r=0.770 8)。结论:Ki-67参与宫颈上皮 内病变、宫颈鳞癌的发生。作为早期诊断宫颈上皮内病变及宫颈鳞癌的标记物, Ki-67的检 测可提高宫颈鳞癌的早期诊断率。 [关键词] Ki-67;早期诊断;宫颈上皮内病变;宫颈鳞癌 [中图分类号] R737.33[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2008)08(c)-034-03 Ki-67――the marker of early diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia and cervical squamous carcinoma ZHANG Ya-jing, CHEN Rong-Hua (Department of Pathology, Affiliated Chinese Medicine Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi830000, China) [Abstract] Objective: To investigate the expression and significance of Ki-67――a marker of the cervical intraepithelial neoplasia and cervical squamous carcinoma. Methods: Immunohistochemical S-P assay was used to detect the expression of Ki-67 in 14 cases cervical squamous carcinoma and 77 cases cervical intraepithelial neoplasia and 23 cases normal cervix. Results: ?The positive expression rates of Ki-67 in cervical squamous carcinoma, cervical intraepithelial neoplasia and normal cervix were 100%, 93.33%,100% and 39.13% respectively, and it showed a significant difference compared with normal cervix group(P,0.01). ?The expression intensity order of Ki-67 was normal cervix, cervical intraepithelial neoplasia and cervical squamous carcinoma from down to up，and they were in a positive correlation(r=0.770 8). Conclusion: Ki-67 involves in the occurrence of cervical intraepithelial neoplasia and cervical squamous carcinoma. As a marker of early diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia and cervical squamous carcinoma, the determination of Ki-67 could enhance the early diagnosis rate. [Key words] Ki-67; Early diagnosis; Cervical intraepithelial neoplasia; Cervical squamous carcinoma 宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，在全球妇女恶性肿瘤中排第二位，极大地威胁着妇 女健康，早期诊断和早期治疗能降低其死亡率。子宫颈上皮细胞的不典型增生被认为是宫颈 癌的癌前病变[1]。宫颈上皮内病变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)?、?、?级，简称CIN ?级(轻度不典型增生)、CIN ?级(中度不典 型增生)和CIN ?级(包括重度不典型增生和宫颈原位癌)，又称低度上皮内病变(包括CIN ? 级)和高度上皮内病变(包括CIN ?级和CIN ?级)。本研究应用免疫组化方法检测宫颈上皮 内病变中细胞核增殖抗原(Ki-67)的表达，以期寻找其生物学标记物。 1材料与方法 1.1材料来源 收集自治区中医医院活检或手术切除的子宫颈组织标本，其中，宫颈鳞状细胞癌14例，宫颈上皮内病变77例(CIN ?级15例，CIN ?级28例，CIN ?级34例)，设为实验组;非宫颈病变手术切除的正常宫颈组织标本23例为对照组。 1.2主要试剂 Ki-67抗体(即用型)、SP免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒均购自福州迈新公司。 1.3检测方法 所有标本均经10,甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片厚 0.4 μm。常规HE染色，在光镜下进行细胞形态学观察，以确定病理诊断及分组。免疫组化染色采用S-P法，按#说明#操作。阳性对照片为已知的胃癌阳性片，阴性对照片为PBS代替一抗。 1.4结果判断 Ki-67表达阳性为细胞核内出现棕黄色颗粒，按其染色有无及强弱程度划分为:无阳性细胞为阴性(-);阳性细胞 ,25%为弱阳性(+);阳性细胞在26%,50%为阳性(++);阳性细胞在51,,75,为较强阳性(+++);阳性细胞,75,为强阳性 (++++)。 1.5统计学方法 将染色结果和临床病理资料应用SPLM统计软件包分析，免疫组化结果比较采用χ2检验、确切概率法和等级相关分析。P,0.05表示差异有统计学意义;P,0.01表示差异有高度统计学意义。 2结果 2.1 Ki-67在宫颈鳞状上皮正常组、CIN ?,?级组、宫颈鳞癌组中的表达(表1) 由表1可以看出，Ki-67阳性表达率在宫颈鳞状上皮正常组为39.13%(9/23)(图1)，CIN ?级组为93.33%(14/15)(图2)，CIN ?级组为96.43%(27/28)，CIN ?级组为100%(34/34)(图3)，宫颈鳞癌组为100%(14/14)(图4)。Ki-67在宫颈正常组、CIN ?,?级组及宫颈鳞癌组中阳性表达率经χ2检验具有统计学意义(总χ2=52.866 8，P,0.01)。 2.2 Ki-67在宫颈正常组织、CIN ?,?级及宫颈鳞癌中的表达强度 表2为宫颈正常组、CIN ?,?级组、宫颈鳞癌组与Ki-67表达强度的相关性分析。由表1、2可知，Ki-67阳性表达率在宫颈鳞状上皮正常组为39.13%(9/23)、CIN ?级组为93.33% (14/15)、CIN ?级组为96.43%(27/28)、CIN ?级组为100%(34/34)、鳞癌组为100,(14/14)，表达强度逐渐加强，呈正相关(r=0.770 8)。 3讨论 宫颈肿瘤的发生是一个多因素、多步骤的长期过程，其中增生常被认为是与癌前病变及宫颈恶性肿瘤相关的早期指标。Ki-67可特异性识别增殖期核蛋白，在细胞周期的,0期缺如，在,、,2、,期均可表达，是全面可靠地反映细胞群体增殖活性的客观指标。在宫颈癌前病变中，表达细胞增生活性的灵敏标记物是Ki-67[2]。本实验中Ki-67在宫颈癌前病变CIN及宫颈鳞癌组织中广泛表达,其阳性表达率明显高于正常组，差异具有统计学意义(P,0.01)，与Zanotti等[3]的结果一致,提示Ki-67的高表达是正常宫颈组织-宫颈癌前病变-宫颈癌发 生过程中的早期事件。 本实验结果发现，Ki-67在CIN ?级组及宫颈癌组中表达较强，在部分正常宫颈及CIN? 级组中也有表达，但表达程度较弱，多表达于鳞状上皮的基底细胞层附近;而在宫颈上皮内 病变、宫颈鳞癌组织中的表达强度远远高于正常宫颈组织，并且随病变严重程度的增加而增 加。与正常组比较，宫颈上皮内病变及宫颈鳞癌中Ki-67的表达差异具有显著性(P,0.01)， 这与Kruse等[4]的结果一致。Ki-67在不同级别的宫颈上皮内病变中阳性表达率有差异,提 示Ki-67可用于CIN的分级。 病理学主要是根据细胞学形态评价细胞增殖状态和肿瘤分类分级。因此，可以考虑应用 Ki-67标记物监测正常宫颈组织-CIN-癌的进展情况，以协助诊断宫颈上皮内病变或宫颈癌， 其检测方法简单、快速，特异性高,试剂价格适中,还能有效避免主观因素，减少实际工作中 的漏诊率和误诊率，从而为提高癌前病变及宫颈癌的诊断率提供依据。 [参考文献] [1]Richart RM. AModiedterminology for Cervical Intraepithial Neoplasia [J]. Obster Gynecol,1990,75:131. [2]Kuo KT, Chang HC, Hsiao CH, et al. Increased Ki-67 proliferative in dex and absence of p16INK4 in CIN-HPV related pathogenic pathways different from cervical squamous intraepithelia lesion [J]. Br Jophthalmol,2006,90(7):894-899. [3]Zanotti S, Fisseler EA, Mannherz HG. Changes in the topologicalexpression of markers of differentiation and apoptosis in definedstages of human cervical dysplasia and carcinoma [J]. Gynecol Oncol,2003,89(3):376-384. [4]Kruse AJ, Gudlaugsson E, Helliesen T, et al. Evaluation of prospective, routine application of Ki-67 immuno-quantitation in early CIN for assessment of short term progression risk [J]. Anal Quant Cytol Histol,2004, 26(3):134-140. (收稿日期:2008-03-20) 注:本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF阅读原文