【doc】中满分消丸质量标准研究

【doc】中满分消丸质量标准研究 中满分消丸质量标准研究 2008年第17卷第1期 中满分消丸质量标准研究药物鉴定 张春辉,杨钊 (山东省青岛市药品检验所,山东青岛266071) 摘要:目的建立中满分消丸的质量标准.方法对厚朴,姜黄,白术,黄连进行薄层色谱 (TLC)鉴别;用高效液相色谱(HPLC)法测定黄芩苷 含量,色谱柱为瑞士SpherigelODS柱(250mmx4.6mm,5m),流动相为甲醇一水一磷 酸(47:53:0.2),检测波长为280nm,柱温为 40?,流速为1,0mL/min.结果在TLC中能够检出厚朴,姜黄,白术,黄连,阴性对照无 干扰;黄芩苷进样量在0.03851,0.77024g范 围内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率为98,74%,RSD=1.57%.结论定性,定 量方法简便,可靠,重现性好,可用于中满分消丸的 质量控制. 关键词:中满分消丸;质量标准;黄芩苷;薄层色谱法;高效液相色谱法 中图分类号:R284.1:R286.0文献标识码:A文章编号:1006—4931(2008)01—0017— 03 StudyonQualityStandardforZhongmanfenxiaoPill ZhangChunhui,Zhao rQingdaoInstituteforDrugControl,Qingdao,Shandong,China266071 Abstract:ObjectiveToestablishthequalitystandardforZhongmanfenxiaoPil1.MethodsTh eTLCmethodforidentificationofCortex MagnoliaeOfficinalis,RhizomaCureumaeLongae,RhizomaAtractylodisMacrocephalae ,RhizomaCoptidisinthesepillswereestablished.Baicalin wasdeterminedbyHPLC.OnSpherigelODScolumn(250mmx4,6mm,5txm),theUVdetect orwassetat280nm.Thecolumntemperature wasat40?.Themobilephasewasmethanol—water— H3PO4(47:53:0.2)andtheflowratewas1,0mL/min.ResultsCortexMagnoliae Officinalis,RhizomaCurcumaeEongae,RhizomaAtractylodisMacrocephalae,Rhizoma Coptidiscouldbedetected,Thecalibrationcurveshowed goodlinearity.Theaveragerecoveryrateofbaicalinwas98.74%,RSD=1.57%.ConclusionT hemethodissimple,rapidandreproducible. ItissuitableforthequalitycontrolofZhongmanfenxiaoPil1. Keywords:ZhongmanfenxiaoPill;qualitystandard;baicalin;TLC;HPLC 中满分消丸由15味中药组成,主要药味为黄芩,陈皮,枳实 等,具健脾行气,利湿清热功效,用于脾虚气滞,湿热郁结引起的脘 腹胀痛,烦热口苦,倒饱嘈杂,二便不利的治疗.中满分消丸收载于 《卫生部药品标准?中药成方制剂(第十三册)》,但原标准中无鉴 别,含量测定项目.为了控制产品质量,笔者建立了厚朴,姜黄,白 术,黄连的薄层色谱鉴别(TLC)法和黄芩苷含量测定的高效液相色 谱(HPLC)法. 1仪器与试药 安捷伦1100型高效液相色谱仪.黄芩苷对照品(批号为 110715—200212),厚朴对照药材(批号为121285—200301),姜黄 素对照品(批号为110823—9802),白术对照药材(批号为 120925—200407),黄连对照药材(批号为120913—200407),盐酸 小檗碱对照品(批号为110713—200208),均购自中国药品生物制 品检定所;甲醇为色谱纯,其他试剂均为纯;中满分消丸(上海 雷允上封浜制药有限公司,批号为060301,060302,060303).硅胶 G(青岛海洋化工厂). 2方法与结果 2.1TLC鉴别 厚朴:取本品3g,研细,加乙醚1OmL, 超声处理15min,滤过,滤液蒸干,残渣加 氯仿1mL使溶解,作为供试品溶液;另取 厚朴酚,和厚朴酚对照品,加甲醇制成各含 1mg/mL的混合溶液,作为对照品溶液;模 拟制剂处方比例与,按供试品溶液制 备方法制备不含厚朴的阴性对照品溶液. 照TLC法【2005年版《中国药典(一部)》附 1.阴性对照品溶液 2.对照品溶液 35.供试品溶液(批号分别 为060301,060302,060303) 图l厚朴的薄层色谱图 ,m,,,,,,-,,…,,,,l,,,'',,',l,,,,,,,,,,'',,,''',''''''',,,,,,',,,''',,''','''''',,,'',,'''','''m''?''''m 平行测定5次.结果葛根素含量为28.6mg/袋,RSD为0.9%(n=5).量,结果批号为060102,060201,060305的样品中葛根素含量平均 加样回收试验:取已测得含量的供试品(批号为060201),研值分别为27.5,28.3,27.9mg/袋. 匀,取约0.5g(9份),精密称定,置锥形瓶中,精密加入葛根素对照3讨论 品溶液1.6,2.0,2.4mL,按供试品溶液制备方法制备待测溶液,依3.1以甲醇一水(10:90)为流动相,在同一色谱条件下同时测定 法测定.结果见2.2,3,5,4一四羟基二苯乙烯一2—0一B—D一葡萄糖苷与葛根素的 表2葛根素加样回收试验结果(n=9) 样品含量测定:取样品3批,依法制备供试品溶液并测定含 中国药业ChinaPharmaceuticals 含量,方中其他成分在2,3,5,4一四羟基二苯乙烯一2—0一B— D一葡萄糖苷峰位置处有干扰,且葛根素保留时间较长,很难同时 测定两种成分的含量,故采取两种色谱条件分别在其最大吸收波 长处测定,结果准确. 32本实验选择方中君药何首乌及臣药葛根中的主要有效成分 作为含量测定的指标成分,建立了专属性强,灵敏度高的测定方 法,为本制剂的质量控制提供了依据. 参考文献: 【1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)fM].北京:化学工业出 版社,2005:122,233,527. (收稿日期:2007—04—02:修回日期:2007—07一II) ? 17? 药物鉴定 录?B]试验,吸取上述两种溶液各5,分别点于同一硅胶GF2 薄层板上,以氯仿一苯一乙酸乙酯(5:4:1)为展开剂,展开,取出, 晾干,至紫外灯(254nm)下检视.供试品溶液色谱中,在与对照品 溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点, 阴性对照品溶液色谱无干扰,见图1. 姜黄:取本品3g,研细,加乙醚10mL, 超声处理15min,滤过,滤液蒸干,残渣加氯 仿1mL使溶解,作为供试品溶液;另取姜 黄素对照品,加氯仿制成0.5mg/mL的对 照品溶液;模拟制剂处方比例与工艺,按供 试品溶液制备方法制备不含姜黄的阴性对 照溶液.照TLC法【2005年版《中国药典(一 部)》附录?B]试验,吸取上述3种溶液各 2,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯 仿一甲醇一甲酸(96:3:1)为展开剂,展开, 取出,晾干,分别置日光及紫外灯(365nm) 下检视.供试品溶液色谱中,在与对照品溶 液色谱相应位置上分别显相同颜色的斑点 或荧光斑点,阴性对照品溶液色谱无干扰, 见图2. 白术:取本品3g,研细,加正己烷20mL, 超声处理15min,滤过,滤液蒸干,残渣加正 己烷1mL使溶解,作为供试品溶液;另取 白术对照药材0.5g,按供试品溶液制备方 法制备对照药材溶液;模拟制剂处方比例 与工艺,按供试品溶液制备方法制备不含 白术的阴性对照品溶液.照TLC法[2005年 版《中国药典(一部)》附录?B]试验,吸取 上述新制备的3种溶液各10L,分别点于 同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60— 90?)一乙酸乙酯(50:1)为展开剂,展开, 取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液, 105?下加热至斑点显色清晰.供试品溶液 色谱中,在与对照药材溶液色谱相应位置 上显相同颜色的斑点,阴性对照品溶液色 谱无干扰,见图3. 黄连:取本品3g.研细,加甲醇10mL, 超声处理15min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲 醇1mL使溶解,作为供试品溶液;另取黄 连对照药材50mg,按供试品溶液制备方法 制备对照药材溶液;再取盐酸小檗碱对照1.阴性对照品溶液 品,加甲醇制成0.5mg/mL的溶液,作为对2-4.供试品溶液(批号分 照品溶液;模拟制剂方比例与工艺,按供5. 0 对 60 照 30 品 1溶,06 液 0..'... 试品溶液制备方法制备不含黄连的阴性对6.对照药材溶液 照品溶液.照TLC法【2005年版《中国药典图4黄连的薄层色谱图 (一部)》附录?B]试验,吸取上述4种溶液各1ILL,分别点于同一 硅胶G薄层板上,以正丁醇一冰醋酸一水(7:1:2)为展开剂,展 开,取出,晾干,置紫外灯(365nm)下检视.供试品溶液色谱中,在 与对照品溶液色谱相应位置上显一个相同黄色的荧光斑点,阴性 对照品溶液色谱无干扰,见图4. 2.2含量测定 2.2.1色谱条件与系统适用性试验 ? 18? 2008年第l7卷第l期 色谱柱:瑞士SphefigelODS柱(250mm×4.6mm,5m);流动 相:甲醇一水一磷酸(47:53:0.2);检测波长:280nm;柱温:40~C; 流速:1.0mL/min.理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于2500.依照 高效液相色谱法操作,中满分消丸其他成分对黄芩苷测定无干扰, 结果见图5. O5lOl5 A 05lOl5 B 1.黄芩苷 l』\ O5lOl5 C A.供试品溶液B.对照品溶液C.阴性对照品溶液 图5高效液相色谱图 2.2.2溶液制备 精密称取6o?下减压干燥4h的黄芩苷对照品适量,加甲醇 制成30p,g/mL的对照品溶液;取本品6g,研细,取0.25g,精密称 定,精密加入70%乙醇50mL,称定质量,加热回流1h,放冷,再称 定质量,加70%乙醇补足减失的质量,摇匀,滤过,得供试品溶液; 按处方比例及工艺配制缺黄芩的中满分消丸,按供试品溶液制备 方法制备阴性对照品溶液. 2.2.3方法学考察 线性关系考察:取黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成 38.512la,g/mL的溶液即可.精密吸取上述溶液1,3,5,7,10,15, 20,注入高效液相色谱仪,依法测定,以黄芩苷峰面积积分值对 进样量进行线性回归,得回归方程Y=127.72X+36.073,相关系 数r=0.9992.黄芩苷进样量在0.03851,0.77024范围内与 峰面积线性关系良好. 精密度试验:取同一黄芩苷对照品溶液(38.512p,g/mL),连续 进样6次.结果黄芩苷峰面积积分值的平均值为1327.564,RSD= 0.44%(n=6). 重现性试验:分别取同一批样品(批号为060303)6份,按供试 品溶液制备方法制成供试品溶液,依法测定黄芩苷含量.结果平均 值为7.14mg/g,RSD=1.06%(rt=6). 稳定性试验:精密吸取供试品溶液,每隔一定时间进样1次, 测定黄芩苷峰面积值.结果的RSD=1.46%(n=7),表明供试品溶 液在3d内稳定. 加样回收试验:精密称取中满分消丸(批号为060303,含量为 7.14mg/g),分别精密加入黄芩苷对照品适量,按供试品溶液制备方 法制备溶液,并按上述色谱条件进行测定,计算回收率,结果见表1. 查!苎至茎堑里些苎竺竺墨!:! 样品含量(g)加入量(g)测得量(g)回收率(%)(%)RSD(%) 2.2.4样品含量测定 取3批样品重量差异项下的内容物,依法测定含量,结果批号 为060301,060302,060303的样品中黄芩苷含量分别为7.23, 7.21,7.14mg/g(n=3). 2008年第17卷第1期药物鉴定 动态浊度法测定间苯三酚注射液中细菌内毒素含量 吕海华,李敏 (浙江省宁波市药品检验所,浙江宁波315040) 摘要:目的探讨间苯三酚注射液的细菌内毒素定量分析法.方法采用2005年版《中 国药典(二部)》中的动态浊度法.结果供试品稀释 50倍可以排除干扰.回收率在50%,200%范围内,试验结果与家兔升温法的一致. 结论用动态度法测定闯苯三酚注射液的细菌内毒 素含量准确有效. 关键词:动态浊度法;间苯=--i~注射液;内毒素;干扰试验 中图分类号:R927.12;R975.7文献标识码:A文章编号:1006—4931(2008)01—0019 —02 BacterialEndotoxinTestforPhloroglucinolInjectionbyDynamicTurbidimetricAssay LuHaihua,LiMin (Ningbobtstitt~teforDrugControl,Ningbo,Zhefiang,China315040) Abstract:0bjectiveTostudytheinterferenceofPhloroglucinolInjectioninbacterialendotoxintestandtoestablishtheassaymethodof bacterialendotoxinbydynamicturbidimetry.MethodsInterferingtestsforbacterialendotoxintestwereusedaccordingtoChinaPh0r. macopoeia(edition2005).Results1:50solutionofPhloroglucinolInjectionshowednoinferenceinthetest,andtheendotoxinrecovery ratewasmorethan50%andlessthan200%ConclusionDynamicturbidimetricassaymethodcanbeusedaccuratelyandeffectivelyto determinequantitivelybacterialendotoxinforPhloroglucinolInjection. Keywords;dynamicturbidimetricassay;PhloroglucinolInjection;bacterialendotoxin;interferingtest 间苯三酚为亲肌性非阿托品非罂粟碱类纯平滑肌解痉药,直 接作用于胃肠道和泌尿生殖道平滑肌,临床主要用于治疗消化系 统尤其是胆道功能障碍引起的急性痉挛性疼痛.在国家药品监 督管理局药品标准中该药的热原检查方法为家兔升温试验法,此 方法不但费时,而且易受药品本身药理,毒理等作用的干扰.因此, 现在国内外均主张以细菌内毒素检查法代替家兔升温试验法. 细菌内毒素检查是利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的 细菌内毒素,通常有凝胶法和光度测定法,后者包括动态浊度法和 显色基质法.动态浊度法系根据细菌内毒素与鲎试剂反应过程中 的浊度变化进行定量检测的一种体外试验方法,具有快速,简捷及 定量准确等优点】. 1仪器与试药 EL808型酶标仪(Bio—TekInstrumentInc),96孔除热原酶标 板(BiostarInc.).细菌内毒素检查用水(BET水,批号为0408200, 内毒素含量<0003EU/mL,湛江安度斯生物有限公司);动态浊 度法鲎试剂(批号为0312250,A=006EU/mL,22mL/瓶, 湛江安度斯生物有限公司;批号为P2701E,A=0.06EU/mL,规格 32mL/瓶,CharlesRiverEndosafe,Div.ofCharlesRiverLaboratories, Inc.);细菌内毒素工作标准品(批号为2003—3,150EU/mL,中国 药品生物制品检定所);间苯三酚注射液(批号为20060802, 20060803,20060804,规格4mL/40mg,宁波天真制药有限公司). 2方法与结果 2.1供试品内毒素限值确定 内毒素限值公式为L=/M,K为给药途径,静脉给药时K= 5.0EU/(kg?h),成人体重按60计,根据临床上的用量,间苯三 酚注射液静脉滴注1次的最大剂量为80mg,故L=5.0/(80/60)= 3讨论 3.1本试验对主要药味陈皮,枳实进行薄层鉴别,结果中满分 消丸中有其他成分干扰,斑点不够清晰,未收入正文. 3.2根据黄芩苷的理化性质,考虑到水丸的特性,参照文献【1—2】 和试验结果,确定了用70%乙醇回流1h的提取方法. 作者简介:张春辉(1976一),女,理学学士,主管药师,从事中 药检验工作,(电话)0532—85735184(电子信箱)zhangchh0305@ 3.75EU/mgo 2.2标准曲线绘制 用BET水对细菌内毒素标准品进行稀释,使其最终浓度分别为 10000,05000,02500,01250,00625EU/mL,各取0.1mL, 加到酶标板孔中,每种浓度3管,使用2批鲎试剂(每孔加入0ImL) 进行试验.同时做2管阴性.结果批号为0312250的鲎试剂的直线 回归方程lgT=26863—02267lgc(方程中为反应时间,C为 内毒素浓度J,lrl=0.9967;批号为P2701E的鲎试剂的直线回归 方程lgT=26565—0.2751lgC,lrl_09964.而且阴性对照在 检测时间外,故曲线成立. 2.3干扰试验? 干扰预试验:间苯三酚注射液的最大有效稀释倍数()= 625,将批号为20060802的间苯三酚注射液用BET水依次稀释5, 50,500倍,记为A.液,同时另取3管进行同样倍数的稀释,但在稀 释液中添加标准曲线中点浓度A=0.25EU/mL的细菌内毒素的 标准溶液,作为供试品阳性对照液,记为B液.分别取上述各液 表1问苯三酚注射液干扰预试验结果 注:干扰预试验,标准曲线制作及可靠性试验同步进行,故鲎试剂的标 准曲线回归方程同前. hotmail.corno 参考文献: [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出 版社,2005:211. [2】谢萍,王艳华,毕开顺.清热汤Of,j中黄苓苷的含量测定[J】.中国中药 杂志,2002,27(1):67. (收稿日期:2007—10—17) ? 19?