盐酸左氧氟沙星滴眼液质量标准研究

盐酸左氧氟沙星滴眼液质量标准研究 长春工业大学人文信息学院毕业(论文) 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 摘 要 目的:建立盐酸左氧氟沙星滴眼液质量标准研究。盐酸左氧氟沙星眼液是抗菌素，在眼部没有感染症状(如有多量分泌物、眼睛红痛)时，是不需要点的。点多了对眼睛刺激大，严重时引起药物性的结膜炎、菌群失调就不好了，不适合长期用。中国药典收录的只有盐酸左氧氟沙星的片剂，注射剂的质量测定方法，但对其滴眼液含量测定方法却没有标准，故本文探究盐酸左氧氟沙星滴眼液质量标准研究。 方法:用卡波姆等辅料，以盐酸左氧氟沙星为原料制备盐酸左氧氟沙星凝胶。 腈(85?采用反相高效液相色谱法，以枸橼酸(用三乙胺调节 ,,值为 4.0)15)为流动相，检测波长:293,,，检查其有关物质，并测定其中左氧氟沙星的含量。 结果 盐酸左氧氟沙星在2.18,174.4μ,/,,浓度范围内线性关系良好，,=0.9991;盐酸左氧氟沙星平均回收率(,=9)分别为 99.5,(RSD,0.85,)，100.0,(RSD,1.07,)，99.7,(RSD,0.99,)用卡波姆等药用辅料可制备出理想的盐酸左氧氟沙星凝胶，制定的质量标准可保证质量 关键词 左氧氟沙星,盐酸 滴眼液 制备 反相高效液相色谱法 I 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) ABSTRACT Objective: To suudy the quality standand of levofloxacin hydrochloride gel(. Methods: Levofloxacin hydrochloride was used to prepare Levofloxacin hydrochloride gel with carbomer as the adjuaant. An RP_HPLC metbod wan established with the mobile phase of eitric acid(pH adjusted to 4.0 with triethylamine (85:15), the plow rate 1.0mL/min and the detective wavelength 293nm to detect related sudstauces and the content of levofloxacin hydrochloride in the gel Results: A good linearity was obtained at a concentratron raouge of Levofloxacin hydrochloride within 21.8-174.4μg/ml .The average recoveries (n=9)were 99.5, (RSD=0.85,),100.0,(RSD=1.07,),99.7,(RSD=0.99,),respectively. Keywords Levofloxacin hydrochloride RP_HPLC II 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 目 录 第一章 文献综述 ......................................................................................................... 3 1.1细菌性角膜炎的发病原因 ............................................................................. 3 1.2.1临床现 ............................................................................................ 3 1.2.2.症状 .................................................................................................... 3 1.2.3.体征 .................................................................................................... 3 1.3药代动力 ........................................................................................................ 4 1.4盐酸左氧氟沙星的药理作用 ......................................................................... 4 1.5本课题研究的内容及意义 ............................................................................. 5 第二章 材料与仪器 ..................................................................................................... 6 2.1 仪器与试剂 ................................................................................................. 6 2.1.,仪器 ................................................................................................. 6 第三章 实验内容 ......................................................................................................... 7 3.1盐酸左氧氟沙星滴眼液的制备及工艺稳定性考察 ....................................... 7 3.2 工艺稳定性考察 ................................................................................... 7 3.2.1 离心实验 ........................................................................................... 7 3.2.2耐冻性及耐热性实验 ......................................................................... 7 3.3 质量研究 ....................................................................................................... 7 3.3.1 性状 本品为淡黄绿色透明液体。 ................................................... 7 3.3.2 鉴别 ................................................................................................... 7 3.4 检查 ............................................................................................................... 8 3.4.1 PH值 .................................................................................................. 8 3.4.2 装量差异及卫生学检查 .................................................................... 8 3.5 右旋异构体的检查 ........................................................................................ 8 3.5.1 色谱条件与系统适用性实验 ............................................................ 8 3.6 有关物质 ....................................................................................................... 9 3.6.1检测波长的选择 ................................................................................. 9 3.6.2色谱条件及系统适用性实验 ............................................................. 9 I 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 3.6.3限的测定 ............................................................................................ 9 3.6.4 酸、碱、氧化破坏实验 .................................................................... 9 3.6.5 测定方法 ......................................................................................... 10 3.7 含量测定最 ................................................................................................. 10 3.7.1线性关系实验................................................................................... 10 3.7.2 回收率实验 .............................................................................................. 11 3.7.3 重复性实验 .............................................................................................. 12 3.7.4样品溶液的稳定性实验 ............................................................................ 13 第四章讨论 ................................................................................................................. 14 谢 ......................................................................................................................... 15 致 参 考 文 献 ............................................................................................................... 16 II 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 第一章 文献综述 盐酸左氧氟沙星系第 ,代喹诺酮类合成抗菌药，是氧氟沙星中的左旋光学异构体，其活性是右氧氟沙星的 ,,,,,倍，是外消旋体的 ,倍，其不良反应发 [1]生率也比氧氟沙星低得多。盐酸左氧氟沙星局部用药可避免全身用药所致的肾功能障碍、肝酶升高、血细胞和血小板减少、胃肠功能障碍等不良反应。近几年已不 [2.]断开发研制出左氧氟沙星的多种局部用药新制剂，并进行临床应用。笔者用盐酸左氧氟沙星制成外用凝胶剂，相同剂量下可成倍提高氧氟沙星凝胶的治疗作用，从而更能有效地治疗皮肤及其软组织细菌感染性疾病。笔者采用反相高效液相色谱法测定左氧氟沙星含量，并同时对其有关物质进行了控制。 1.1细菌性角膜炎的发病原因 多为外伤后感染或剔除角膜异物后感染所致。由于抗生素和糖皮质激素的过度使用，一些条件致病菌如草绿色链球菌、克雷白杆菌、类白喉杆菌等引起的感染日渐增多。 1.2.1临床表现 起病急，常在角膜外伤后24,48小时发病。 1.2.2.症状 眼红、疼痛、畏光、流泪、视力降低、眼睑痉挛及分泌物增多等。 1.2.3.体征 眼睑肿胀、球结膜水肿、睫状充血或混合充血。病变早期角膜上出现一个界线清楚的上皮溃疡，溃疡下有边界模糊、致密的灰黄色浸润灶，周围组织水肿。浸润灶迅速扩大，形成溃疡。角膜溃疡向深层发展，即将发生穿孔时，在溃疡基底可出现一薄层透明组织，向前膨出，称为后弹力膜膨出。当角膜穿孔时患者即感觉到剧 33 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 烈的疼痛和“热泪”(房水)流出，穿孔后前房。较重的角膜炎症或角膜溃疡，其毒素进入前房可刺激虹膜睫状体发炎。虹膜睫状体充血、水肿，血管的渗透性改变，细胞渗入房水内，轻者房水混浊，或有角膜后沉着物;重者有大量脓性渗出物，沉积于前房底部，称前房积脓性角膜溃疡，如不及时治疗可产生虹膜后粘连。 1.3药代动力 给予15名健康成人志愿者15天的QUIXINTM滴眼液，测定不同时间点左氧氟沙星血浆浓度。用药后1小时左氧氟沙星平均血药浓度的范围为0.86ng/ml(第1天),2.05ng/ml(第15天)。开始2天每2小时滴眼一次，每天共8次，第4天测得左氧氟沙星平均最大血药浓度为2.5ng/ml。平均最大血药浓度第1天为0.94ng/ml,第15天增加至2.15ng/ml，低于报道的左氧氟沙星标准口服剂量最大血药浓度1000倍以上。30名健康成人志愿者滴入一滴QUIXINTM滴眼液，测定不同时间点泪液中左氧氟沙星的浓度，结果60分钟内平均泪液浓度为34.9μg/ml至221.1μg/ml，滴眼后4、6小时平均泪液浓度分别为17.0μg/ml和6.6μg/ml。这些浓度的临床意义尚不清楚。 1.4盐酸左氧氟沙星的药理作用 左氧氟沙星为氧氟沙星的左旋体，其抗菌活性约为氧氟沙星的两倍，它的主要作用机理是通过抑制细菌拓朴异构酶?及DNA旋转酶(均为?型拓朴异构酶)的活性，阻碍细菌DNA的复制而达到抗菌作用。左氧氟沙星具有抗菌谱广、抗菌作用强的特点，对大多数肠杆菌科细菌，如大肠埃希菌、克雷白菌属、沙雷氏菌属、变形杆菌属、志贺菌属、沙门氏菌属、枸橼酸杆菌、不动杆菌属以及铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、淋球菌等革兰阴性细菌有较强的抗菌活性。对部分甲氧西林敏感葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌、溶血性链球菌等革兰阳性菌和军团菌、支原体、衣原体也有良好的抗菌作用，但对厌氧菌和肠球菌的作用较差。遗传毒性:左氧氟沙星Ames试验、CHO,HGPRT突变试验、小鼠微核试验、大鼠程序外DNA合成试验(UDS)、小鼠体内姐妹染色体交换试验结果均为阴性。体外CHL细胞株染色体畸变试验、CHL,IU细胞株姐妹染色体交换试验结果均为阳性。生殖毒性:大鼠妊 44 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 娠前、妊娠初期经口给药剂量达360mg/kg(相当于眼科临床上最大推荐剂量的2900倍)时，对雌、雄动物的生殖能力和胎儿均未见影响。大鼠在器官形成期给药，剂量达90mg/kg时，对胎儿和新生儿均无明显影响。家兔经口给药50mg/kg时，未出现胚胎、胎儿致死以及胎儿生长迟缓作用，也未出现致畸作用。大鼠围产期、授乳期经口给药达360mg/kg时，对动物的分娩、授乳以及出生儿均未见明显影响。致癌作用:大鼠掺食法给予左氧氟沙星高达100mg/kg/天，连续给药2年，未见致癌作用。 1.5本课题研究的内容及意义 盐酸左氧氟沙星滴眼液的有效成分是盐酸左氧氟沙星，含增稠剂玻璃酸钠。盐酸左氧氟沙星滴眼液具有抗菌谱广、抗菌作用强的特点，对多数肠杆菌科细菌，如肺炎克雷白菌、变形杆菌属、伤寒沙门菌属、志贺菌属、部分大肠杆菌等有效强的抗菌活性，对部分葡萄球菌、肺炎链球菌、流感杆菌、绿脓杆菌、淋球菌、衣原体等也有良好的抗菌作用。 盐酸左氧氟沙星眼液是抗菌素，在眼部没有感染症状(如有多量分泌物、眼睛红痛)时，是不需要点的。点多了对眼睛刺激大，严重时引起药物性的结膜炎、菌群失调就不好了，不适合长期用。中国药典收录的只有盐酸左氧氟沙星的片剂，注射剂的质量测定方法，但对其滴眼液含量测定方法却没有标准，故本文探究盐酸左氧氟沙星滴眼液质量标准研究。 55 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 第二章 材料与仪器 2.1 仪器与试剂 2.,, 仪器 美国 Agilent1100高效液相色谱仪，77215定量阀，可变波长紫外检测器;UV265 FW 型分光光度计(日本岛津);AUW 220D 型双量程分析天平。 2.1.2 试剂 左氧氟沙星(购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号:22020601)。盐酸左氧氟沙星原料(江苏昆山双鹤药业有限责任公司，批号:040204)。盐酸左氧氟沙星凝胶(批号:040422，040423，040424，自制)。 2.1.3材料 盐酸左氧氟沙星对照品(四川圣奥医药有限公司，批号030511)，盐酸左氧氟沙星(四川圣奥医药有限公司，批号030623)，767针用活性炭(上海活性炭厂)。 66 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 第三章 实验内容 照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录?D)测定。 3.1盐酸左氧氟沙星滴眼液的制备及工艺稳定性考察 3.1.1制备方法 取注射用水约600ml，加盐酸左氧氟沙星搅拌至溶解，滴加1mol/l氢氧化钠适量调节PH值至6.0左右，过滤，加入玻璃酸钠，搅匀，再加注射用水至1000ml，搅匀，分装，即得 。 3.2 工艺稳定性考察 3.2.1 离心实验 取本品10g，装入带刻度的离心管内，在转速 2500r/min 的离心机上离心0.5h，无分层现象。样品稳定。 3.2.2耐冻性及耐热性实验 取本品密闭、避光包装后在冷藏(-10?)和高温(60?)条件下各放置 1个月，此凝胶剂的均匀度、稠度、澄明度、PH值均无变化，卫生学检查符合规定。 3.3 质量研究 3.3.1 性状 本品为淡黄绿色透明液体。 3.3.2 鉴别 分别精密量取含量测定项下的供试品溶液及对照品溶液各 10μl，分别注入高效液相色谱仪，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保 留时间一致。同法制备的空白凝胶溶液在 293nm波长处无吸收，对鉴别无干扰。 77 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 3.4 检查 3.4.1 PH值 取本品5g(约相当于左氧氟沙星 25mg，加水 20ml振摇均匀，依法测定(《中华人民共和国药典》2000年版二部附录 ?H)。PH值应为 6.0~7.5，3批样品 PH值分别为 6.68，6.96，6.75。 3.4.2 装量差异及卫生学检查 取本品适量，依法测定(《中华人民共和国药典》2000年版二部附录 XF及 XIJ)，3批样品均符合规定。 3.5 右旋异构体的检查 3.5.1 色谱条件与系统适用性实验 1.32g， 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇:手性溶液(取l-苯丙氨酸硫酸铜 1g，加水 1000ml溶解后，用氢氧化钠试液调节 ph值至 3.5，摇匀，即得)(16?84)为流动相，流速1ml/min，检测波长293nm 数按左氧氟沙星峰计算应?2500旋异构体之间的分离度应 ,1.5。 取本品适量，加流动相制成每1ml氧氟沙星 0.5mg为供试品溶液;取氧氟沙星原料，用流动相制成每1ml氟沙星0.1mg为对照溶液。取对照溶液 10ul样，各组分出峰顺序依次为氧氟沙星的左旋异构体和右旋异构体，调节检测灵敏度，使主成分峰峰高为满量程的 40~50取供试品溶液 10ul液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积计算，含右旋异构体应不得过 1.0,3旋异构体含量分别为0.88,84,0.77,。 88 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 3.6 有关物质 3.6.1检测波长的选择 称取盐酸左氧氟沙星对照品适量，加流动相溶解，在 200~400nm扫描。左氧氟沙星在 293nm ，因此确定检测波长为 293nm 3.6.2色谱条件及系统适用性实验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈0.05mol/l枸橼酸溶液(用三乙胺调节 ,,值至 4.4(15:85) 为流动相;理论塔板数按左氧氟沙星峰计算为 4839 ,2.0 3.6.3限的测定 称取盐酸左氧氟沙星对照品10.0mg，置100ml棕色容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，再不断用流动相稀释后测定其峰面积，进样10ul，记录色谱图。当信噪比为3:1时的浓度为100ng/ml，确定其最低检测限为1.0ng。 3.6.4 酸、碱、氧化破坏实验 酸破坏实验:取本品适量(约相当于盐酸左氧氟沙星 ,(,,,)，置 ,,,,棕色容量瓶中，加流动相适量使溶解，加入饱和盐酸各 ,,,，,,?烘箱中放置 ,,,，冷却至室温，调节 ,,值至,,,，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤，进样,,μ,，记录色谱图。同法进行空白辅料酸破坏实验。碱破坏实验:取本品适量(约相当于盐酸左氧氟沙星 ,(,,,)，置 ,,,,棕色容量瓶中，加流动相适量使溶解，加入饱和氢氧化钠溶液 ,,,，,,?烘箱中放置 ,,,，冷却至室温，调节 ,,至 ,,,，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤，进样 ,,μ,，记录色谱图。同法进行空白辅料碱破坏实验。氧化破坏实验:取本品适量(约相当于盐酸左氧氟沙星 ,(,,,)，置 ,,,,棕色容量瓶中，加流动相适量使溶解，加,(,,,,,?,高锰酸钾溶液,滴，放置于,,?烘箱内 ,,,，取出冷却，调节 ,,值至 ,,,，加流动相至刻 99 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 度，摇匀，用微孔滤膜过滤，进样 ,,μ,，记录色谱图。同法进行空白辅料氧化破坏实验。破环实验结果显示本品经酸、碱、氧化等破环后，所产生的降解 产物峰与主峰的分离度良好。 3.6.5 测定方法 精密称取本品约 ,(,,，置于 ,,,,棕色容量瓶中，加流动相振摇并稀释至刻度，滤过，制成每 ,,,中含,,,的溶液为供试品溶液。另取供试品溶液 ,(,,,，置 ,,,,棕色容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。精密量取对照溶液,,μ,，注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分的峰高约为满量程的 ,,, ,,,,;另取供试品溶液 ,,μ,注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间,倍，供试品溶液的色谱图中各杂质峰面积之和不得超过对照溶液主成份峰面积的 20,。3批供试品的测定结果为 0.05,，0.80,和 0.06,。 3.7 含量测定最 3.7.1线性关系实验 精密称取盐酸左氧氟沙星对照品 12.5mg，置 25ml棕色容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。再分别准确量取 0.5，1.0，2.0， 3.0,4.0ml，分别置于10ml棕色容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别进样 10ul，记录色谱峰图。对浓度和其相应的峰面积进行回归处理。在 24.0~192.0ug/ml浓度范围内，回归方程为:S=57191.0C，85.8r,0.9999(n=5)。。结果表明:浓度与峰面积呈良好的线性关系。 1010 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 表3-1 含量测定的线性试验 浓度(mg/ml) 峰面积 峰面积平均值 0.025 637187 636232 637282 636900.33 0.050 1246103 1257667 1261181 1254983.67 0.099 2668085 2667398 2665424 2666969 0.199 5366272 5362279 5366974 5365175 0.497 13255270 13249868 13256345 13253827.7 2y=3E+07x-18487 R=0.9999 3.7.2 回收率实验 按处方量分别精密称取盐酸左氧氟沙星对照品，加按处方比例的各辅料制成空白凝胶，按样品测定项下的方法制成含左氧氟沙星 80,，100,与 120的供试品溶液。另按样品测定项下配制对照品溶液。分别取 10ul进样，记录色谱图。结果平 均 回 收 率 分 别 为 99.5, (RDS ,80.85,)，100.0,(RDS,1.07,)，99.7,(RDS,0.99,)。 1111 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 表3-2回收率测定 浓度(,) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(,) 80, 7.83 7.86 100.47 7.96 8.03 100.83 8.00 8.15 101.82 101.0 100, 9.71 9.64 99.30 9.98 10.03 100.46 9.99 9.86 98.61 99.5 120, 11.66 11.49 98.52 12.02 11.87 98.73 12.18 12.13 99.62 99.0 平均回收率的RSD(,),1.15,。结果表明，该方法回收率较好。 3.7.3 重复性实验 取同一批号样品以含量测定项下的方法，连续测定 5份样品，结果 RDS为 0.22,。 结果表明，该方法用于测定重复性良好。 1212 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 表3-3 重复性试验结果 组别 峰面积 含量(mg/ml) 对照组1 2607349 对照组2 2669457 实验组1 2642800 0.101 实验组2 2632905 0.100 实验组3 2636672 0.100 实验组4 2631161 0.100 实验组5 2629155 0.100 RSD 0.22 3.7.4样品溶液的稳定性实验 取样品溶液，于室温(20~25?)下放置，分别于 0.2.4，6.8，10h不同时间段内取 10ul进样，峰面积的RDS为 0.43,。说明供试溶液在放置 10h内稳定。 1313 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 第四章讨论 玻璃酸钠是一种高分子多糖，具有高度粘滞性、可塑性、渗透性和良好的生物相容性。可作为滴眼剂的增稠剂和润滑剂，可延长药液在角膜前表面的停留时间，增加药物的吸收，提高疗效，减少用药次数，具有良好的缓释性能和抗菌效果，同时，其保湿性和润滑性，还可明显改善眼部的干涩症状，改善滴眼液的物理性能，使眼部对主药有良好的适应性。 该法配制工艺简单，质量容易控制，适合医院制剂使用。酸左氧氟沙星见光容易分解，因此配制对照品及供试品溶液时须用棕色瓶。与分光光度法比较，本研究介绍的方法具有专属性强、定量准确的优点，更很好满足质量控制的要求，可用于盐酸左氧氟沙星滴眼液的含量测定 1414 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 致 谢 论文的写作过程有痛苦，也有快乐～四年里感谢各位老实的恩情和教导，而立之年的我却无以为报，倍感惭愧。在论文即将完成之际，我的心情无法平静，从开始进入课题到论文的顺利完成李顺福老师一直在助我修改完成论文。在这里请接受我诚挚的谢意～ 1515 长春工业大学人文信息学院毕业设计(论文) 参 考 文 献 [1]闫双银(左氧氟沙星外用制剂的研究和应用,,,(海峡 药学，2002，14(5):29—30 [2]Jin-PilBurm,Jun-ShikChoi,StanfordS1Jhee,etal1Stabilityofpaclitaxel and fluconazoleduringsimulated Y-siteadministration ，2010,51(11):2704 [3] 钟华,张杰,李建和.氟康唑滴眼液的研制及质量控制.中国药房。2003,14(4):215. 中华人民共和国药典(一部).2010版.北京:中国医药利[4] 国家药典委员会编. 一技出版社.2010: 548. [5] 张丽荣，冷玉敏，贺艳丽，等,眼用溶液的载休8玻璃酸钠的 作用机理和应 ,,中国生化药物杂志，1999,2005;215 用,J 罗明生,高天惠.药剂辅料大全[M].四川科学技术出版社，1993: 485-486. [6] <341>ANTIMICROBIAL AGENTS-CONTENT.USP30,153及译文. [7] Uen T Fujimoto.In vitro activity of DR-3355 and optiocally active [8] ofloxacin ,J,Antimicrob Agent Chemother ,1998 32(10);1336-13374 1616