植物甾醇酯的亚急性毒性和致突变性研究

植物甾醇酯的亚急性毒性和致突变性研究 浙江预防医学2007年第19卷第1l期ZhejiangPrevMed,NovemberQ,olQ: 植物甾醇酯的亚急性毒性和致突变性研究 宋燕华严峻郑云燕蔡德雷夏勇吴惠玲 【摘要】目的研究植物甾醇酯的亚急性毒性和致突变性.设0.54,1.08,2.17g/kg 体重3个剂 量,观察亚急性毒性.设0.5,2.0和5.0g/kg体重3个剂量观察对小鼠骨髓细胞微核 和小鼠精子畸形的影响. 结果各剂量组各项指标均未见有明显的亚急性毒性.各剂量组对小鼠未见有明显 的致突变性.结论在本 实验条件下,植物甾醇酯无亚急性毒性和致突变性. 【关键词J植物甾醇酯;亚急性毒性:致突变性 中图分类号:R一33文献标识码:A文章编号:1007-0391(2oo7)11-0005-03 SubacuteToxicityandMutagenicityStudyonPhytosterolEsterInVivo SONGYah— hua,YANJun,ZHENGYtm-yanelal,(TheCenterforDiseasePreventionandControlofZhejia,gProvince, H~hou,咖,310009,China.) 【Abstract】 ObjectiveTostudythesubacutetoxicityandmutagenieityofphytostemlester.MethodsAsubacutetoxic studymperformedbysetting3differentdosegroupswithO.54,1.08,2.17g/KS.3differentdosegroupswithO,5,2.0, 5.0g/KSWel'~settingforobservingtheinfluenceofphytosterolesteronmicronucleusofbonenm瑚wcellsandsperm abnormalitiesinmice.ResultsTherewenOobvioussubaellletoxicityandmutagenlcityinalltreatedgroups.Condusions Underthisexperimentalconditions,phytosterolesterhadnosubacutetoxicityandmutagenic ity. 【Keywords】Phytosterolester;Subacutetoxicity;Mutagonicity 植物甾醇脂肪酯具有比游离植物甾醇更好的脂溶性, 同时植物甾醇酯的开发大大提高了植物甾醇和植物甾烷醇 降胆固醇效果,使其按多种形式添加到食品中去成为可 能【1.2J.植物甾醇酯主要用于涂抹食品,色拉调料,休闲食 品和软胶性食品添加剂.随着对植物甾醇酯的深入研究, 植物甾醇脂肪酯必定成为一种十分重要的功能性食品.本 研究旨在对这种新型的功能性食品的亚急性毒性和致突变 性进行探讨. 材料与方法 1材料 1.1植物甾醇酯由浙江某厂家提供,瓶装,类白色液 体.实验时,用食用玉米油为溶媒配成试验剂量浓度临用 前配制. 1.2实验动物和检测条件实验动物房合格证号:医动字 第220010015号.实验用动物均由浙江省实验动物中心提 供,清洁级,动物饲料由浙江省实验动物中心提供.检测 环境条件:温度范围20~C24~C,相对湿度范围45% 65%. 2方法[3?4】 2.1亚急性毒性试验 作者单位:浙江省疾病预防控制中心,浙江杭州 310009 ? 5? ,清洁级,体重55,75g, 2.1.1实验动物sD大鼠8O只 随机分4组,每组20只,雌雄各半,大鼠单笼饲养,自由 进食,饮水. 2.1.2剂量和给药方法植物甾醇酯对大小鼠急性经口 LD50雌雄两性均大于20.0g/kg体重,属于无毒类.亚急性 实验设三个剂量组和一个对照组,低,中,高三个剂量分 别为0.54,1.08,2.17g/kg体重,相当于人推荐量的25倍, 5O倍和100倍,每日经口灌胃给予. 2.1.3观察指标大鼠连续观察3O天,每周记录体重. 实验期末尾静脉取血进行血液学检查,断头取血进行血生 化检查,对每只大鼠进行脏器大体观察,同时取肝,肾, 脾,睾丸(卵巢)称重并计算脏体比,并取这些脏器进行 病理组织学检查. 2.2小鼠骨髓细胞微核试验 2.2.1验盐物ICR小鼠,体重25—30g,雌,雄各半. 2.2.2剂量和给药方法试验设O.5,2.0和5.0s/ks体重 三个剂量组.另设阴性对照(食用植物油)和阳性对照组 (环磷酰胺60mCkg体重).采用间隔24小时两次经口灌胃 给予植物甾醇酯,末次给予后6h处死动物,取其胸骨骨髓 制片,固定,Giemsa染色. 2.2.3观察指标镜检时每只动物计数1000个嗜多染红 细胞(PCE),计算微核千分率(MN%0). 2.3小鼠精子畸形试验 2.3.1实验动物雄性ICR小鼠,体重25—35g. ? 6?浙江预防医学2007年第19卷第11期 ZhejiangPreyMed,November2007,Vol19,No.11 2.3.2剂量和给药方法试验设0.5,2.0和5.0g/kg体重 3个剂量组.另设阴性对照(食用植物油).和阳性对照组 (丝裂霉索C1.5nv/kg体重).每组7只雄性小鼠.植物甾 醇酯以灌胃方式给予,连续5天,对照组也相同处理,在 首次给予的第35天,颈椎脱臼处死小鼠,随机选5只小鼠 取二侧附睾,放入盛有适量的生理盐水的平皿中,剪碎, 吸滤,涂片,干燥,固定,用1%伊红染色. 2.3.3观察指标高倍镜下检查精子形态,每只小鼠检查 完整精子1000个,记录畸变精子类型和数目,计算精子畸 形率(%). 3统计方法采用SPSS10.0forWindows统计软件对实验 数据进行. 结果 1对体重的影响实验期间,各组大鼠均未见异常症状和 体征,也无死亡,实验各时间点三剂量组大鼠体重和对照 组比较差异均无显着性(方差分析,P>0.05). 2对血液生化学指标的影响各剂量组大鼠红细胞计数, 血红蛋白,白细胞计数,白细胞分类淋巴,单核,粒细胞 和对照组比较差异均无显着性(方差分析,P>0.05).各 剂量组大鼠血清谷丙转氨酶,谷草转氨酶,尿素氮,肌酐, 胆固醇,甘油三酯,血糖,总蛋白,白蛋白,球蛋白,白/ 球比和对照组比较差异均无显着性(方差分析,P>0.05), 见1,表2. 表1植物甾醇酯对大鼠血生化的影响(X4-SD) 剂量甄丽{丽_丽(l(g)(U/L)(U/L)( nnnol/L)(?L)(mmol/L)(mmol/L) 堡丝塾 谷丙转氮酶谷草转氨酶尿素氮肌酐胆固醇甘油三酯 (U/L)(U/L)(nrnol/L)(umol/L)(nrrol/L)(nm~ol/L) 对照组 0.54 1.08 2.17 P 201.O?40.4 201.8?28.3 199.04?27.1 l95.2?34.1 0.970 7.7?1.458.8?3.91.94?0.20.96?0.3 7.1?1.456.2?3.41.98?0.21.02?0.2 7.4?1.256.6?2.41.98?0.30.94?0.3 7.5?0.856.0?3.01.?0.41.00?0.3 0.7170.2070.9760.874 48.4?6.0192.0?31.1 44.5?5.4196.0?39.0 49.8?8.3193.6?31.5 43.2?8.1181.4?29.3 0.1360.766 7.5?1.5 7.1?1.4 7.2?1.1 7.1?O.8 O.869 56.8?3.6 55.9?2.9 54.1?2.1 54.7?2.8 O.175 1.91?0.30.93?0.3 2.00?0.21.01?0.3 1.92?0.30.99?0.2 1.89?0.30.99?0.2 0.7740.897 表2植物甾醇酯对大鼠血生化的影响(x4-SD) 表3植物甾醇酯小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果 3对大鼠脏体比影响各剂量组大鼠肝重,肝/体比,肾/ 体比,肾重,脾重,脾/体比和对照组比较,差异均无显着 性(方差分析,P>O.05). 4病理组织学检查少量大鼠肝小叶中央静脉,小叶中央 区肝血窦轻度淤血,肝脏小叶内可见点灶状炎细胞浸润, 肝脏汇管区可见少量淋巴样细胞浸润.少量大鼠肾脏局部 6989 2150.伽 浙江预防医学2007年第l9卷第l1期ZheiiangPrevMed,November2007,窆!N0: 肾近曲小管上皮细胞轻度肿胀,肾脏皮质问质血管扩张充 血.个别大鼠脾脏脾窦轻度扩张充血.少量大鼠胃粘膜下 层血管扩张充血.个别大鼠睾丸曲细精管内生精细胞偏少. 这些改变在程度和范围上与对照组间差异不明显. 5小鼠骨髓细胞微核试验各剂量组与阴性对照组比较微 核率差别均无着性(P>0.05),见表3.植物甾醇酯对小鼠 骨髓嗜多染红细胞无致微核作用. 6小鼠精子畸形试验植物甾醇酯各剂量组与对照组小鼠 精子畸形率,见表4.各剂量组精子畸形率和阴性对照组比 较,经秩和检验统计,差异无显着性(P>O.05).植物甾 醇酯小鼠精子畸形试验结果为阴性. 表4植物甾醇酯小鼠精子畸形试验结果 讨论 美国食品药物局(FDA)已正式确认甾醇酯和甾烷醇酯 ? 7? 为GRAS(一般公认安全食品);在欧盟,已允许添加植物 甾醇人造奶油在市场销售;在日本d三批准含植物甾醇食用 油和人造奶油作为特定保健用食品上市.目前,植物甾醇 酯不少国家已经作为功能性食品添加剂使用,主要用于降 低血浆胆固醇.植物甾醇酯的更好的脂溶性和降胆固醇作 用无疑会使其在更广阔的领域得到应用.本研究表明每日 以2.17g/kg体重植物甾醇酯给予大鼠,连续3O天,未发现 其有明显的亚急性毒性,在最高达2O体重的剂量下未 见增加小鼠的骨髓嗜多染红细胞的徽核数,亦未增加小鼠 精子细胞的畸形率. 参考文献 [1]吴时敏,吴谋成.植物崮醇的研究进展与趋向(1)一植物崮 醇的基础研究[J].中国汕脂,2002,27(2):73—75. 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