汉防己甲素防护环孢素A肾毒性的实验研究

汉防己甲素防护环孢素A肾毒性的实验研究 汉防己甲素防护环孢素A肾毒性的实验研 究 ? 卜 中华器官移植杂志1997年lO月第18卷第4期?2O1? 汉防己甲素防护环孢素A肾毒性的实验研究 万江华莫华柜方玉华汪泽厚f,』.2f- 摘要本文观察了中药钙拮抗剂汉防己甲素对大鼠环孢素A肾毒性(CsA—NT)的防护作 用.雄性Wistar大鼠用CsA50mg?kg/d灌胃7天导致急性CsA—NT,现为血清肌酐(cr)升 高34.8+内生肌酐清除率(Ccr)下降39,4,组鲲学检查发现近曲小管大片空泡变性.同时,肾 度质丙二醛(MDA)合量显着升高,超氧化特歧化酶(SOD)活性显着下降.大鼠每日用CsA灌胃 酋3O舟钟,给予汉防己甲素lOmg/kg腹腔注射,能使上述指标明显改善,组身}学损伤也明显减 轻.实验结果提示汉防已甲素能从功能和形态上防护大鼠急性CsA—NT. 关键词环孢素A肾毒性汉防己甲素 ExperimentalstudyontheprotectiveeffectoftetrandrineoncyclosprineAnephroto~dtytnra ts Wandianghua,MoHuagen,FangYuhua,a1.DepartmentofUrology.DapingHospita1.The 7MilitaryMedicalCollege,Chongqing630042 AIJetractThepresentexperimentalstudyinvestigatestheeffectoftetrandr~ne,acalciuman- tagonistextractedfromtheChinesemedicinalherb,oncyclosporineAnephrotoxity(CsA—NT)in theFats.AdministrationofCsA5Omg?kg/d,tOamaleWistarratbygavagefor7daysresult— edinacuteCsA— NT,witha34.8%increaseinseru]flficreatinlneanda39.4%decreaseincreati- nineclearance(Ccr).Histologicalexaminationdemonstratedanextensivevacuolizationinproxl— maltubule.1lladdition,renalcorticalmalondlaldehyde(MDA)wasincreasedsignificantly,while theactivitiesofrenalcorticalsuperoxidedismutsse(SOD)decreasednoticeably.Inprotectiveex- periment,tetrandrine(1Omg?kg, /d,i.p)wasadministeredapproximately30minpriortoCsA, Sevendayslater,incoadministeredtetrandrinewithCsAgroups,thevaluesoftheparameters mentionedabove,aswellashistologicaldamage,weresignificantlyimproved.Itwasindicated thattetrandrinecouldfunctionallyandstructurallypreventacuteCsA—NTinrats. KeywordsCyclosporineANephrotoxicityTetrandrine 近来中药汉防己甲紊(Tet)被证实为一 种钙拮抗剂.本研究采用急性环孢紊A肾 毒性(CsA—NT)模型,观察Tet在防护CsA— NT中的作用,并探讨其可能的机制,为临 床应用提供依据. 材料与方法 一 ,药物及试剂 CsA(瑞士Sendoz公司产品)+121服剂型用橄榄 作者单位:630042重庆,第三军医大学太坪医院野战外科研 究所泌碌外科[万江毕,方玉毕]第三军医大学新桥医院珏尿井科 [羹毕根征泽覃] 油稀释成50mg/ml.汉防己甲素(浙江盒华药厂产 品),医用粉剂,纯度>98,按文献方法制成 2.Stag/m|的安瓿备用. 硫代巴比妥酸,四己氧基丙烷均为美国Sigma 公司产品,超氧化物歧化酶(SOD)放免测定药盒 (成都同位素应用技术研究所翻品),CsA单克隆抗 体荧光编振免疫测定药盒(美国Abbot公司产品). 二,动物分组及给药方法 lstar大鼠,雄性W体重290~34Og,随机分成 4组.第1组:橄榄油组,n一10;第2组:橄榄油+ 汉防己甲素组+n一10;第3组:环孢素A组,n一 12;第4组:环孢素A+汉防己甲素组,n盆12.第 1,2组每日晨分别用4ml/kg生理盐水,]Omg/kg ?202? 汉防己甲素(Tet)静脉注射,30分钟后均用lml/kg 橄榄油灌胃;第3,4组于每日晨分别用4ml/kg生 理盐水,10mg/kg"let静脉注射.30分钟后均用 50mg/kg(1ml/)环孢素A(CsA)灌胃,每目给药 前均用电子台秤给大鼠准确称重.给药共7天.其 中第7天将大鼠置于代谢笼中,留取24小时尿. 三观察指标及测定方法 实验第8天.大鼠用30mg/kg戊巴比妥钠静脉 注射麻醉后,打开胸腹腔.心脏穿刺抽血,迅速取 肾测定下列指标.并将部分肾组织固定于150g/L 甲醛中.常规石蝽包埋切片.HE染色,光镜下观察 形态学变化. 1.肾皮质丙二醛(MDA)及SOD含量 取肾皮质0.3,06g,制成1o匀浆,3000r/ rain离心15rain.取上清约05ml甩日立7150自动 生化测定仪作蛋白定量.其余置于一2o?冰箱供测 定MDA和SOD用.MDA测定用硫代巴比妥酸比 色法,以每毫克蛋白质所含MDA摩尔数(nmol/ mg)表示.SOD用放射免疫药盒测定.以毫克蛋白 所含SOD量(ng/mg)表示. 0.血清肌酐(cf)和尿素氯(BUN),尿Cr:取 血清或尿液zoo;a.用日立7150自动生化仪测 定血清Cr(~mol/L)和BUN(mmol/L),尿cf (~mol/L),并结合尿量计算出内生肌酐清除率 (Ccr). 3.全血CsA浓度:取大鼠肝素抗凝全血2ml, 应甩美国Abbot公司的CsA单克隆抗体荧光偏振 药盒及自动分析仪(TDx)测定. 四,数据处理 实验数据;土s表示.采用,检验及秩和检验 进行分析,P<0.05为相差显着. 结果 一 ,肾功能比较(表1) Tet对橄榄油灌胃大鼠肾功能无明显影 响.第3组与第l组比较,血BUN升高 106,l,升高34.8,Ccr下降39.4, Tet能显着地防护CsA引起的肾功能损害, 第4组的值与第2组相差不显着,与第3 组相比,第4组Ccr升高了48.4. 二,MDA和SOD比较(表2) Tet对橄榄油灌胃大鼠的MDA和sOD 显着影响.CsA组与撖榄油组比较, ChiaJ0i-[ganTransplant,October1997.Vol18,No.4 裹1各组大鼠肾功能比较 BUNCrCcr 组别( 『rImI几)(I,L)(m1.?in一'/kg) 注?与第1组比较.P<0.01E*与第3组比较tP<0.01 裹2各组大鼠肾皮质MDA和SOD比较 注:?与第l组比较.尸<0.01{*与第3组比较tP< 0.01;#与第2组比较,P<0.05 MDA升高67.1,sOD下降46.2,Tet 能显着防护CsA灌胃引起的MDA升高和 SOD下降.与第2组相比,第4组MDA无 明显差异,但SOD含量仍明显降低(P< 0.05). 三,全血csA浓度比较 第3组和第4组全血csA浓度分别为 5.62士0.48gg/ml和5.74士0.52ttg/ml,相 差不显着.. 四,织形态学比较 第1,第2组光镜下未见异常改变.第3 和第4组肾小球及肾血管无明显病变,皮髓 质交界处近曲小管上皮细胞出现片状空泡变 性,刷状缘紊乱.第3组呈大片状,第4组 呈小片状空泡变性.按肖胜广等0的半定量 方法,第3组为+++,第4组为+,++, 与第3组相比,第4组病变明显减轻(P< 0.O1) 讨论 雄性大鼠用CsA50mg?kg/d灌胃7 天造成急性CsA—NT是最常用的研究CsA— NT的模型之一.本实验CsA组血升高 34.8,Ccr下降39.4,并出现了近曲小 ? 生华器官移植杂志1997年10月第l8眷第4期 管上皮细胞空泡变性,表明已导致了急性 CsA—NT. 汉防己甲紊是从防己科植物粉防己的根 中提取的有效成份,为双苄基异喹啉衍生 物,药理作用十分广泛,在我国早已用于高 血压病,风湿性关节炎及矽肺的治疗,在国 外近来主要作为一种新型广谱抗炎药研究, 尚未用于临床.最近研究证实了1'et是一种 钙拮抗剂,尽管其结构与经典钙拮抗剂没有 相似之处,但Tet对心血管系统的药理作用 与维拉帕米十分相似. 急性CsA—NT病理生理表现主要是血 cI和BUN升高,肾血管阻力(RvR)增大, 肾血流量(RBF),肾小球滤过率(GFR)和超 滤系数降低.目前,大多数学者认同,肾入 球小动脉(AA)收缩是导致CsA—NT的主要 原因.钙拮抗剂通过阻止细胞外钙离子内 流,抑制血管平滑肌细胞收缩,其扩张肾血 管部位主要在AA.因此,Tet可能是通过 扩张肾血管,尤其是AA,减低RVR,提高 RBF,增加肾有效滤过压,使GFR升高.这 与文献报道Tet具有较强的扩张肾血管的作 用是一致的. 脂质过氧化在肾缺血/再灌注损伤中的 作用已为人们所熟知.CsA—NT发生过程与 肾缺血/再灌注损伤十分相似.CsA达到一 定的体内血浓度后,肾血管收缩,RVR增 大,RBF和GFR下降,随着血中CsA浓度 下降.肾血管收缩缓解.最近有学者证实脂 质过氧化参与了CsA-NTE.本研究发现 Tet能防护CsA引起的大鼠皮质脂质过氧 化损伤,这与文献报道Tet具有防护动物 心,脑,肾脂质过氧化损伤的药理作用是一 致的].Tet发挥防护脂质过氧化损伤机制 可能与钙拮抗剂防护肾缺血/再灌注损伤的 ?203? 脂质过氧化机制相似,即可能是间接地影响 了氧自由基产生,如阻止ca,内流可避免细 胞内ca"促使ATP降解,黄嘌呤氧化酶生 保护 成和磷脂酶激活以减少氧自由基来源,线粒体功能而有利于氧的四价还原以减少氧 自由基产生等.当然,Tet通过扩张AA,改 善CsA引起的肾缺血,切断氧自由基产生 的始动环节,纠正园缺氧导致的SOD和其 它防御性酶类的生成不足,也是其防护CsA 引起的肾皮质脂质过氧化损伤的重要原因. 急性csA—NT病理组织学表现在光镜 下主要是近曲小管上皮细胞各种空泡变性, 以皮髓交界处为重,即主要是S.和s段的 肾小管上皮细胞.Tet防护CsA—NT的组织 学损害,可能是通过改善CsA引起的肾缺 血,从而纠正了CsA—NT的血流动力学紊乱 和切断了脂质过氧化损伤的起始环节而实现 的. 参考文献 1LinQY,KarpinskiE,PangPKT.Tetrandrineinhi- bitsbothTandLcalciumel~unelcurrentsinventrieu- larcells.JCarclvaBcPharmacol,1992.20i919. 2SewWK,FerranteA,Su~orsA.ets1.Compara- tiveeffectsoftetranddneandberbamine0nproduefion ottheinflammatorycytoklnesinterleukin一1andtumer necr?factor.LifeSci,1992,5O:5a. 3削挂广,赵明堂,张云汉.-l}唑和丹参对太鼠环孢素A 肾毒性的防护作用的实验研究.中华器官移植杂志, 1993,14:71. 4W0lfA,ChmannN,FrieauffW,eta1.Roleofm tiveoxygenf0rmatJoninthecycl~porin-A-mediated impairmeat0fremtfunetions.Trar~pProc,1994,261 2902. 5陈树元,钱忠秀,叶桧柏.特防己碱,硝荦地平和卡托 普利对肾性高?压太鼠氧自由基与前列辣素代谢的影 响.中国药理学与毒理学杂志,1993,7:263. (收稿:1995—1Oh06崔回,1995—11—21)