[整理]甲基红,石蕊牛乳,明胶液化,淀粉水解,吲哚,柠檬酸盐利用,分解尿素产氨,[整理]甲基红,石蕊牛乳,明胶液化,淀粉水解,吲哚,柠檬酸盐利用,分解尿素产氨,
部分生化试验:
1、甲基红(M.R)试验
M.R试验用于测定细菌分解葡萄糖产酸的程度。若所产生的酸是以降低pH值到4.5或更低,此时加入的甲基红指示剂呈红色。甲基红指示剂的变色范围为pH4.2(红色)-6.3(黄色)。
培养基:葡萄糖蛋白胨水
蛋白胨 1g 磷酸氢二钾 1g
葡萄糖 1g 蒸馏水 200ml
将上述各成分混合于蒸馏水中,加热溶解,调节pH至7.2,加热煮沸,待冷却后用滤纸过滤。分装试管,115?灭菌20min。
试剂:0...
[整理]甲基红,石蕊牛乳,明胶液化,淀粉水解,吲哚,柠檬酸盐利用,分解尿素产氨,
部分生化试验:
1、甲基红(M.R)试验
M.R试验用于测定细菌分解葡萄糖产酸的程度。若所产生的酸是以降低pH值到4.5或更低,此时加入的甲基红指示剂呈红色。甲基红指示剂的变色范围为pH4.2(红色)-6.3(黄色)。
培养基:葡萄糖蛋白胨水
蛋白胨 1g 磷酸氢二钾 1g
葡萄糖 1g 蒸馏水 200ml
将上述各成分混合于蒸馏水中,加热溶解,调节pH至7.2,加热煮沸,待冷却后用滤纸过滤。分装试管,115?灭菌20min。
试剂:0.1g甲基红溶于300ml95%乙醇中,加蒸馏水至500ml即成。
试验方法及结果:将纯种细菌接种葡萄糖蛋白胨水中,37?培养2-7 d,以每5ml培养基滴加5-6滴甲基红指示剂,呈鲜红色者为阳性,呈橘黄色者为弱阳性,阴性反应者不变色。
2、石蕊牛乳试验:
牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白,在其中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊是在中性时呈粉红色;碱性是呈蓝色;还原时,则自下而上使牛奶褪色还原成白色。乳酸细菌发酵乳糖产酸,石蕊变红,当酸度很高时,可使牛奶凝固。如试验菌产生蛋白酶,使
酪蛋白分解,则使牛奶变得较澄清略透明,表明牛奶已胨化。
培养基:脱脂乳粉100g溶于1000ml蒸馏水中。每100ml脱脂牛奶加入4ml浓度为25g/l(石蕊2.5g,100ml蒸馏水,放置一夜或更长时间,过滤)的石蕊牛奶。分装试管,牛奶高度4-5cm。113?高压蒸汽灭菌15-20min。
3、明胶液化试验:
培养基:在营养肉汤中加入10-15%的明胶,调节pH至7.2,115?高压灭菌20min。
在装有营养明胶的试管中穿刺接种,于20-25?培养30d(培养5-7d,每天观察一次)。若菌种在25?生长不好,应将试管放置在最合适的温度下培养。
结果
:如果空白对照使馆仍是固态而测试培养基被液化,则表明发生了水解作用,记录下明胶液化的程度和形状。如果试管在高于25?进行培养,在检查是否发生水解之前,要将培养物在冰水中浸泡5min。
4、淀粉水解试验:
培养基:可使用固体或液体培养基进行测试,使用淀粉琼脂培养基可能更为方便。淀粉琼脂培养基是在营养琼脂中加入0.2%(或0.5g)的可溶性淀粉组成。在最佳生长温度培养2-14d(1-2d)。
试剂:用于革兰氏染色的革兰氏碘液。
取培养液少许置于比色盘内,同时取未接种的培养液作为对照,分别在其中滴加卢格氏碘液。如不显色表示淀粉水解,显黑色或蓝紫色时,表示淀粉未水解或水解不完全。
5、靛基质(吲哚)试验:
原理:某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸,产生靛基质。靛基质与试剂中的对二甲氨苯甲醛相作用,形成可见的红色化合物,及玫瑰吲哚。
培养基:蛋白胨水
蛋白胨 1g 氯化钠 0.5g 蒸馏水 100ml
将上述成分混合于蒸馏水中,加热溶解。调整pH至7.6,加热煮沸待冷却过滤,分装试管,每管约3ml。15磅高压灭菌20min。
试剂:对二甲氨苯甲醛1g、95%乙醇95ml、浓盐酸20ml。配置时,应先用乙醇溶液溶解对二甲氨苯甲醛,再缓慢加入盐酸即成。此试剂不能久存,宜少量配制,并避光保存于冰箱中或阴凉处。
试验方法及结果:将细菌纯培养物接种到蛋白胨水培养基中,37?培养24-72h后,沿管壁缓慢加入2-3ml的试剂于培养物的液面上。在两层液体交界面出现红色环者为阳性,阴性反映者不变色。
为了使颜色明显,在加入试剂之前,先向培养物种加入1ml乙醚,
并充分振荡,使靛基质溶于乙醚中。静置片刻,使乙醚层浮于培养物的液面。此时,再按上述方法徐徐加入试剂5-10滴,并观察判定结果。
6、柠檬酸盐利用试验:
培养基:硫酸镁 0.2g 磷酸二氢铵 1.0g
磷酸氢二钾 1.0g 枸橼酸钠 5.0g
氯化钠 5.0g 琼脂 15.0g
1%溴麝香草酚蓝酒精溶液 8.0ml
蒸馏水 990ml
制法:将各物(除溴麝香草酚蓝溶液外)混合于蒸馏水内,加热溶解,校正pH7.0,再加入溴麝香草酚蓝液,混匀后分装试管,121?20min高压灭菌后摆成斜面。培养基呈淡绿色。培养基摆成斜面。
将培养物划线接种。在最佳生长温度培养7d。
结果记录:微生物利用柠檬酸何在柠檬酸琼脂上的生长导致了碱性反应,因此培养基中的溴百里芬兰指示剂由绿色变为亮蓝色;如果微生物没有利用柠檬酸且在柠檬酸琼脂上没有生长,则培养基的颜色不发生变化。
7、分解尿素产氨:
培养基:蛋白胨 1.0g 0.2%酚红溶液6.0ml
氯化钠 5.0g 琼脂 20g
磷酸二氢钾 2.0g D-葡萄糖 1.0g
蒸馏水 1000ml
加热溶解各成分于蒸馏水中。分装于试管,121?灭菌15min,冷却至50?,在每支试管中无菌加入足量20%灭菌尿素溶液(预先过滤灭菌),使最终含量为2%,将培养基制成斜面,放置,备用。
按斜面接种培养方法接种,同时将不加尿素的基础培养基接种作为对照,以证明氨的产生式来自尿素而非蛋白胨水。在最佳生长温度培养1-7d。
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