【doc】从进口泰国斑节对虾苗检出副溶血性弧菌的报告

【doc】从进口泰国斑节对虾苗检出副溶血性弧菌的报告 从进口泰国斑节对虾苗检出副溶血性弧菌 的报告 一 检疫节R,撒-j踅钿瓶期 从进口泰国斑节对虾苗检出副溶血性弧菌的报告 陆季严陈汉水 (汕头动植物检疫局) 副溶血弧菌广泛存在于海中水,是各种 海洋动物普遍的致病菌. 它是对虾危害最大,造成损失最严重的 疾病之,.因为,它影响虾类的全生育期. 在养殖环境中,本病极易发生暴发性流行, 一 旦在群体中暴发,死亡率可达100%. 斑节对虾(P.monodon)又称草虾.87 年以来,{lli头口岸从台湾,泰国,新加坡多 批次引进亲虾和仔虾. 去年2月12日.汕特xX公司从泰国 进口草虾苗42万尾,长约1.5—2公分,该 批虾苗因患病和长途运输,抵抗力下降,放 .我们取原包 入虾苗池后次日死亡约8o镉 装水和病虾作实验检验.经分离纯苗.作生 化试验,电镜拍片,回归试验.确诊为副溶 7f_ 血性弧菌(Vibridpamhem0】a】s).现报导 如下: 一 现场检疫 现场检疫,见患病虾苗之特点:1.活 力差.将虾苗放在烧杯中,见其游动缓慢, 活力减弱,易沉杯底;2.虾苗呈弯曲状, 肌肉变成乳白色,透明度降低;3.体色改 变,加深,部分虾苗尾节变红,有的出现附 肢坏死. 二检验程序 因为副溶血弧菌能在TCBS(见注1)平 板上生长,呈绿色反应,而一般细菌(如氧 单胞菌)则不能生长.根据弧菌之生长特性 及其他试验之需要.特制定下列程序: 一 Pringshdn 豢善一I兰:i 取原包装水和濒死虾苗,以无菌操作磨 碎,待澄清后,吸取上清液滴于11cBs平板 上4—5滴,倾斜平板,使之均匀涂布其上. 然后于3oqc培养,2,4.h后观察,在1?Bs上 长成约2?m的绿色菌溶(若为溶藻性弧菌 则呈黄色).这是弧菌在11cBs上的特殊颜 色反应. 为获取一定数量的菌苔,分离纯茵,观 察菌落形态.挑生长于麟上单一绿色菌 落,接种于pfin~r&ein(见注2)斜面及平板 (该培养基PH8,5,含胰蛋白胨,符合副溶 血弧菌生长之要求).经3oqc,24h培养, 挑Pring~in斜面上的茵苔作生化试验.经 检验,本菌符合副溶血弧菌之生化特性,则 分离菌为纯菌. 三培养特性 取纯菌接种下列培养基,观察其生长特 性: 一 动植物检疫1996年第2期总第2l期 1.在Pting,hein溶液中,经24h.30? 培养呈中度混浊,面有薄菌膜;在Pring. shein平板上,经24h培养,菌落透明,稍 隆起,湿润,边缘整齐,大小约2—3毫米. 2.在1sI上.在不舍Nac}的1sI上不 长,在含2.5%Nacl上生长良好,经24h培 养,柱层微产酸,斜面碱性,不产生H2s. 3.在1cBs平板上.纯菌经24h培养, 菌落较少,约2毫米,呈涂绿色. 4.其他性状.取纯菌涂片,G染色, 镜橙,为多形态G一短杆菌.取18h培养液 测定动力,在显微镜下,见其运动活泼,呈 穿梭状或流星状运动. 四,生化试验 取培养于蹦s}曲斜面的纯菌作生化 和耐盐性试验.结果+见下表: 产酸Nael浓度硝氧靛 }1酸化基恤VP玛ST哑 l葡萄糖乳糖麦芽糖l甘露醇蔗糖0%:2%l4%l0%盐酶质 副溶血弧菌+ l+一I+l+I{ ll』溶蒹性弧菌+ }+一l{} 说明:+:产酸或阳性.一:职性 副溶血弧菌,溶藻性弧菌的生化反应, 菌落形态极其相似.主要区别在于:前者不 利用蔗糖,VP试验阴性,在代8s上长成绿 色菌落;而后者则利用庶糖,vP试验阳性, 在TCBS上长成黄色菌落. 五,回归试验 取健康草虾20尾,洗净,体表消毒. 在玻璃缸中观察二天无异常,均分成二组, 试验用水配成2.5%盐度.一组倒入经18h 堵养的纯菌培养液约4o毫升.另一组作对 照.试验组24h后观察,游动力下降;48h 观察,死亡五尾,第三天全部死亡.对照组 正常.从试验虾分离到形态与染色特性与被 检菌完全一致的细菌. 六,电镜检查 副溶血弧菌为极生鞭毛,因不同种可一 根,二根或多根.我们取纯菌接种Pril~- shein18h培葬液,到汕头大学医学院作电镜 拍片.在电子显微镜下观察,菌体稍弯曲呈 弧状,可见一端有极生鞭毛(见附图). 七,小结 1.根据教检菌的菌体形态,染色特性, 生化反应,电镜拍片均符合副溶血弧菌之特 性.故确诊之. 2.据有关资料报导,从许多虾的虾体 中均可分离到弧菌.因为该菌普遍存在于海 水中,分离菌是否致病,必须作感染试验, 经作回归试验,证明被检葛为病原菌. 3.本菌在不含盐的培养基中不生长. 田:病虾分离的副溶血敷菌(×~oooo) /一) 浅谈常见出口饲料毒素的检测及允许量 彭钰欣郭安明 (镇江动植物检疫局) 我国每年都有上百万吨饼粕饲料出口 至世界各地.随着进口国对我国出口饲料 的要求越来越高,饼粕中毒素含量成为进 口商越来越关注的重要因素.为此略谈常 见出口饲料中毒素的检测及允许量. 在我国大量出口饲料中以棉籽饼 (粕),大豆饼(粕),菜籽饼(粕)最为 常见.其中棉籽饼粕中毒素主要有棉酚 (gossypo1),棉酚紫(gomypumpauri),棉酚 青色素(gossyeaemlin),棉绿素等.大豆 饼粕中有毒成分是胰蛋白抑制因子 (TrypsinInhibitor,TI),皂角甙(saponln), 脂氧化酶(1ipoxidase)及抗维生素因子 (anti一~itamlns).菜籽饼粕中的毒素主要 有硫葡萄糖苷及其降解产物异硫氰酸盐, 恶唑烷硫酮腈,芥子碱,植酸,单宁等. 1毒素检测方法 1.1棉籽饼粕毒素的检测方法有多 种,但各有利弊,其中棉籽饼粕中主要有 g{+ 毒素棉酚的测定分总棉酚和游离棉酚两 种.游离棉酚测定是用70%丙酮水溶液或 在3一氨基一1丙醇存在下,用异丙醇和 正巳烷的混合溶剂提取后,用比色法,高 效液相色谱法(眦)测定.比色法有 苯胺法,三氯化锑法,间苯三酚法,紫外 分光光度法等.其中苯胺分光光度计法准 确度和精密度均好,我国饲料中游离棉酚 测定的国家标准亦采用此法. 1.2测定大豆及其饼粕中抗胰蛋白 酶因子,常用方法有以下几种:1.测尿 酶活性(UA).2.测定抗胰蛋白酶 (TW).3氮端指数(NBI).4.蛋白质溶 解度(PS).5.享特(Hunter)色值.6. 染料结合测定法,如:甲酚红和橘红G. 1987年以来,我国根据IS0—55o6—19g7 (E)国际标准法制定了"大豆制品中尿素 酶活性测定方法"的国家标准.测尿酶活 性,美国,日卒,前苏联等国家还用PH 本试验用的生长堵养基和糖类发酵管均为自 己配制.各种培养基加入25%Nacl,校 PH8.0—8.5,使用效果良好. 注1:'rEBS琼脂配方:(单位:g) 酵母膏5.0蛋白胨lO0蔗糖200 Nael10.0Na2S203'5H2O100柠檬酸钠 10.0牛胆汁5.0牛胆酸钠30溴麝香 草酚蓝0.o4蒸馏水1000ral琼脂2%校 {8.5. 各成份加热溶解,校PH值,煮沸2分 钟,不要高压. 注2:pringshein培养基:(单位:g) 胰蛋白胨O.4酵母膏O.4牛肉膏0.4 CH3COONa0.2海盐20蒸馏水1.000ml 校PH8.O一8.5 若要制成固体加2%璩脂. 15磅30分钟高压灭菌 参考文献 ※本文承蒙汕头太学医学院范益华检验师协助 诊断.特致感谢. 31