犬子宫积液的细菌分离和鉴定

犬子宫积液的细菌分离和鉴定 52中国兽医杂志2007年(第43卷)第6期ChineseJournaIofVeterinaryMedicine 犬子宫积液的细菌分离和鉴定 孙玉国,吕占军,林巍,余波 (东北农业大学动物医学院,黑龙江哈尔滨150030) 中图分类号:$858.292文献标识码:B文章编号:0529—6005(2007)06—0052—01 子宫积液是犬常见的产科疾病.根据B超图像 特征结合临床症状,可将子宫积液大致分为二类:一 是子宫积水,子宫壁很薄,宫腔内液体回声很低(暗 区),除有的病例腹围增大外,一般无临床症状;二是 子宫积脓,子宫壁较厚,宫腔内液体部分有一定强度 的回声,多数病例有临床症状,如食欲不佳,体温升 高,精神不振,行为反常等I1]. 犬子宫积液及子宫积脓已成为影响犬繁殖能力 和引起犬死亡的疾病之一.通过临床疾病诊治的记 录可以看出,犬子宫积液发病率逐渐提高,发病年龄 也由老犬向青年犬过渡,对此为防止本病的扩大,本 试验采集临床病犬子宫积液病料,进行细菌的分离, 鉴定,确定子宫积液中的病原菌及这些细菌与子宫 收稿日期:2006—04—06 通讯作者:吕占军 积液之间的关系,为探明其发病机理和临床上更好 地防治本病提供了理论依据. 1实验与方法 1.1试验病料子宫内容物来源于东北农业大学 动物医院就诊的病犬,选择临床症状符合子宫积液 的病例.经过体检,血液学检验和超声波检查确诊后 对其实施卵巢子宫切除术获得子宫及其内容物.共 采集5只犬的病料. 1.2培养基及试剂分离培养基为普通琼脂培养 基,羊鲜血琼脂培培养基,鲜血一葡萄糖琼脂培养基, 营养肉汤和血清肉汤,麦康凯琼脂培养基;生化鉴定 培养基及试剂为尿素酶高层斜面,明胶培养基,蔗 糖,乳糖,葡萄糖发酵管,葡萄糖蛋白胨水,甲基红试 剂,V—P试剂,吲哚试剂,过氧化氢试剂,硫化氢试剂 和枸橼酸盐试剂等. 图3肠遭切片被横断的虫体(×4,H.E.) 5其他病原检查用犬瘟热及细小病毒抗原试剂 盒检测均为阴性,由于主诉此犬按期进行了犬六联 苗的防疫,所以排除病犬是犬瘟热及细小病毒感染. 根据临床症状,血常规,粪便检查,死后病 理学检查和其他病原检查结果,诊断为蛔虫和钩虫 混合感染,造成该犬严重贫血,消瘦并导致死亡. 6病例分析犬蛔虫病和钩虫病是较为普遍的犬 肠道寄生虫病,更容易感染幼犬,并且致病性较强, 容易引起出血性胃肠炎,肠道损伤严重或继发细菌 感染,则引起体温升高,白细胞总数明显上升.大量 的虫体寄生于肠道,不仅严重损伤肠道,而且可能阻 塞肠道,引起胃肠道功能紊乱,出现呕吐症状.幼虫 在体内移行,可以进入肺脏,使病犬还可现出咳 嗽,脓样鼻分泌物等呼吸道症状.钩虫的成虫吸附在 犬的小肠黏膜上吸血,并且能分泌抗凝素,延长凝血 时间,引起大量出血,出现血便,再加上虫体有变换 吸咬部位的习性,以致伤口不断出血,造成宿主严重 的贫血现象,黏膜苍白,血红蛋白明显偏低. 母犬感染蛔虫或钩虫后,由于年龄免疫而不表 现症状,但是存在母犬组织内的虫体可以通过吮乳 或胎盘感染幼犬.幼犬还可以经吞食感染性虫卵和 捕食带有感染性幼虫的啮齿类动物等途径感染蛔虫 和钩虫,另外钩虫也可以通过皮肤感染.因此要保持 犬舍,食槽,食物和饮水的清洁卫生,及时清理粪便, 并对粪便实施生物热处理,保持环境清洁干燥.定期 对犬舍等环境进行火焰消毒,杀灭环境存在的幼虫. 进行灭鼠,控制转运宿主传播蛔虫和钩虫病.对成年 犬(包括母犬和公犬)和幼犬采取定期的驱虫措施,母 犬在怀孕后第4O天和产后14天用芬苯哒唑或伊维菌 素等药物驱虫,幼犬出生后2周进行驱虫,2周后再驱 虫,2月龄时再次给药以驱除出生后感染的虫体,驱 虫期间要及时清理粪便,并进行无害化处理. 在临床上,注意肠道寄生虫病与犬细小病毒感 染引起的出血性肠炎的区别,可使用犬细小病毒快 速诊断试纸盒作鉴别诊断. ChineseJournalofVeterinaryMedicine中国兽医杂志2007年(第43卷)第期53 1.3试验方法 1.3.1细菌的分离由于脓汁的含菌量较多,采用 分区划线法将病料接种到灭菌羊血营养琼脂培养基 和普通琼脂培养基并于37C培养24h,用革兰氏染 色法涂片镜检,观察.同时分别挑取单个菌落接种于 麦康凯培养基后观察. 1.3.2细菌的纯化将挑选出来的细菌,按革兰氏 染色特点和细菌的形态分类,再次接种于普通鲜血 琼脂培养基上培养纯化,纯培养后镜检无杂菌者保 存于斜面保菌培养基中,经37C培养8,24h,再置 于4C冰箱保存.以备生化鉴定. 1.3.3细菌的生化鉴定主要的生化试验有革兰 氏染色,溶血试验,各种糖发酵试验,过氧化氢试验, 甲基红试验,V—P试验,吲哚试验,硫化氢试验,明胶 液化试验,尿素酶试验,石蕊牛乳试验和枸橼酸盐 试验. 2试验结果 2.1分离培养的结果肉汤均匀浑浊,有絮状沉 淀,液面有菌环.在普通琼脂上培养可见圆形,稍隆 起,表面光滑,边缘整齐,无色或接近灰白色的菌落. 血琼脂平板上生长形成圆形凸起,光滑,湿润,半透 明,灰白色菌落,直径为2,3mm.在麦康凯琼脂上 形成红色菌落. 2.2生化鉴定的结果经革兰氏染色可见革兰氏 阴性的短杆菌,两端钝圆.散在或成对存在.型溶 血,无溶血环.生化鉴定的结果见表1. 表1革兰氏阴性杆菌的鉴定结果 2.3细菌鉴定结果经分离培养和生化鉴定,查细 菌鉴定手册第8版确认,分离出的是埃希氏大肠杆 菌.经分离培养和生化鉴定,5种病料结果均为埃希 氏大肠杆菌. 3讨论 3.1细菌的致病性和来源大肠杆菌是人和温血 动物肠道正常菌群,随粪便排出体外,也是环境常在 菌.试验所分离出的埃希氏大肠杆菌毒力很弱,是一 种条件致病菌,受到某些诱发因素的刺激下,就可能 导致宿主内环境发生异常,引起发病.正常生理情况 下犬阴道内也存在这些常在菌,从阴道正常菌群中 分离出大肠杆菌和子宫内分离出的大肠杆菌属同种 类型.在发情前期和发情期细菌通过子宫颈进入子 宫,造成污染,是一种正常现象.由于发情期时犬的 子宫颈处于开放状态,此时阴道的常在菌有很大机 会进入子宫,如果此时子宫内膜已经处于增生的状 态,则入侵的细菌很可能会导致子宫内的炎症过程, 促进子宫积液的发生. 3.2细菌与子宫积液的关系Feldman_2j,Dhali— wallE,ChenE等均用机械划伤的方法成功造成黄 体期子宫内膜韵局部增生,将从子宫积液犬的子宫 中分离出的埃希氏大肠杆菌接种到这些犬的子宫腔 内,结果有很大比例的犬可以发展为子宫积液.因此 他们断定,一定存在某些与子宫内膜创伤或刺激有 关的因素,与细菌共同作用,产生了引发子宫积液的 适宜刺激.现已证明这种影响因素就是孕酮和雌激 素.显然长期或反复因孕酮和雌激素刺激引起子宫 病理性变化是子宫积液发生的主要机制和初始原 因.虽然细菌尤其大肠杆菌是子宫积液中经常分离 到的细菌,但其不可能是发生子宫积液的初始原因, 因为正常犬子宫污染时并不会引起该病.而且子宫 积液初期子宫内容物常为无菌状态,只有子宫内膜 被某些因素如孕酮,雌激素等预处理后,造成黄体期 子宫内膜的局部增生,子宫内膜的腺体会产生大量 分泌物,才有利于细菌的入侵和大量繁殖,然后细菌 才分泌毒素并刺激子宫内膜,促进子宫积液量的增 加而引起疾病的进一步发展. 3.3只分离出大肠杆菌的可能原因一是子宫的 防御机制,在疾病的初期细菌侵入子宫后,机体释放 各种激素如雌激素,它可提高白细胞向子宫腔移动 的速率,增加子宫腔杀菌的能力,这样某些细菌就可 能被子宫的一些防御机制所清除.二是子宫中的无 菌环境可能与抗生素的应用有关,因为病犬发病后 采用过抗生素治疗,降低了细菌的检出率.而子宫内 膜和子宫肌层内存在特异性的大肠杆菌受体,从理 论上增加了其在子宫内建群的可能性,所以最终只 有大肠杆菌被检出. 3.4发病的主要原因由试验结果看,5只病犬的 病料经分离鉴定均为大肠杆菌,而大肠杆菌又不能 直接引发子宫积液,由此看子宫积液的主要发病机 制还应是长期或反复孕酮刺激和雌激素的共同作用 的结果.细菌作用只不过是一种继发因素. 参考文献: [1]论士春,陈兆英.130例犬猫疾病超声诊断分析[J3.中国兽医 杂志,1994,24(1O):39. [2]FeldmanEC,NelsonRW.Chapter21:Cysticendometral hyperplasia/pyometracomplexandinfertilityinfemaledogs. In:CanineandFelineEndocrinologyandReproduction[M]. Philadelphia:W.B.Saunders,1996.61:1549—1557. [3]DhaliwalGK,EnglandGC,NoakesDE.Theeffectsof endometrialscarificationonuterinesteroidreceptorsbacterial floraandhistologicalstructureinthebitch[J].AnimReprod Sci,2002,69(3—4):239—249. [4]ChenYM,WrightPJ,LeeCS.Amodelforthestudyof cysticendometrialhyperplasiainbitchs[J].JReprodFertil Suppl,2001,57:407—4i4. [5]JubbKV,FmkennedyPC,PalmerN.Pathologyof DomesticAnimal[M].40dedt.HarcourtBraceJovanovich, Publishers,In.I,ondon,1985.3:370—385.