离子对HPLC测定牙周康胶囊中甲硝唑和芬布芬含量

离子对HPLC测定牙周康胶囊中甲硝唑和芬布芬含量 [摘要]目的:建立同时测定牙周康胶囊中甲硝唑和芬布芬含量的离子对HPLC方法。方法:采用依利特Hypersil ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，以0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇(80?20，含0.01 mol/L庚烷磺酸钠)，用磷酸调pH至3.5为流动相，检测波长285 nm，采用峰面积外标法。结果:甲硝唑和芬布芬线性范围分别为21,100 μg/ml(r=0.9999)和16,79 μg/ml(r=0.9999);平均回收率分别为100.2% (RSD=0.93%)和100.4%(RSD=0.44%)。结论:采用离子对HPLC法测定牙周康胶囊中甲硝唑和芬布芬含量，方法准确，操作简便，回收率高。 [关键词]离子对HPLC;甲硝唑;芬布芬 [中图分类号]R917[文献标识码]A[文章编号]1673-7210(2007)04(b)-148-02 牙周康胶囊是由甲硝唑和芬布芬组成的复方制剂，为抗厌氧菌药物，用于治疗溃疡性牙龈炎、牙周炎、龈脓肿以及梭状杆菌引起的急性牙感染等，临床效果较好。其中甲硝唑含量用紫外分光光度法测定，芬布芬含量用中和法测定，操作繁琐，亦有采用分光光度法、高效液相色谱法同时测定其含量的报道[1-4]。本文建立了离子对HPLC法同时分离、测定该制剂中甲硝唑和芬布芬含量的方法，操作简便、快速、准确、重现性好。 1 仪器与试药 SP8800型高效液相色谱仪，SP100型紫外检测器(美国光谱物理公司);N2000色谱工作站(浙江大学智能信息研究所);日本岛津UV,2401PC型紫外-可见光分光光度计。 甲硝唑对照品、芬布芬对照品均为中国药品生物制品检定所提供;庚烷磺酸钠;甲醇为色谱纯，其他试剂均为纯，样品为市售。 2 实验方法和结果 2.1 色谱条件 色谱柱:依利特Hypersil ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)，大连依利特科学仪器有限公司提供;流动相:0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇(80?20，含0.01 mol/L庚烷磺酸钠)，用磷酸调pH至3.5;检测波长:285 nm;柱温:40?;流速:1.0 ml/min;灵敏度:0.01 AUFS;进样量:10 μl。分离结果见图1。 2.2 线性范围 2.2.1 甲硝唑和芬布芬曲线精密称取105?干燥至恒重的对照品甲硝唑25 mg和芬布芬20 mg，置100 ml量瓶中，加流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 ml分别置25 ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，分别过0.45 μm滤膜，依次进样20 μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积(A)对浓度C(μg/ml)进行回归分析。结果甲硝唑和芬布芬分别在21,100 μg/ml和16,79 μg/ml浓度范围内呈良好线性关系，回归方程分别(n=5)为:A= 0.89+17.34 C (r=0.9999)，A=0.36+24.17 C(r=0.9996)。 2.2.2 稳定性试验取样品溶液，分别在0、1、2、3、4、5 h精密吸取20 μl进样，按上述色谱条件记录峰面积，甲硝唑和芬布芬6次峰面积的RSD分别为0.42%和0.37%。 2.3 重复性试验 按样品测定项下方法，对同一批样品进行测定，按峰面积计算，甲硝唑RSD=0.87%，芬布芬RSD=0.54%(n=6)。 2.4 回收率试验 取已知甲硝唑和芬布芬含量的样品5份(相当于甲硝唑25 mg或芬布芬20 mg)，精密称定，各精密加入甲硝唑10.0 mg和芬布芬 5.0 mg，按样品测定项下方法测定，结果平均回收率和RSD:甲硝唑为100.2%和0.93%，芬布芬为99.8%和0.44%。 2.5 样品测定 2.5.1 对照品溶液的制备取105?干燥至恒重的甲硝唑25 mg，芬布芬 20 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加水超声溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml，置25 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀即得。 2.5.2 供试品溶液的制备取本品20片精密称定，研细，精密称取(相当于甲硝唑25 mg或芬布芬20 mg)，置100 ml量瓶中，加水70 ml超声溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5 ml，置25 ml量瓶中用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 2.5.3 测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液20 μl，注入色谱仪，按上述色谱条件，以峰面积外标法计算含量，结果见表1。 3 讨论 采用ODS柱，选择磷酸二氢钾、庚烷磺酸钠液-甲醇-三乙胺(85?15?0.4)，用磷酸调pH至2.8为流动相，被测物质分离效果最佳(分离度,1.5)，保留时间适当，峰形好，系统稳定，重现性好。 由于甲硝唑处方量高于芬布芬近4倍，因此我们选择285 nm作为测定波长，提高芬布芬的检测灵敏度。 由方法学考察可见，采用离子对HPLC法同时测定牙周康胶囊中甲硝唑和芬布芬含量，精密度高，线性关系好，回收率满意，故认为该方法简便、灵敏、准确、可行。 本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。