RP-HPLC法测定牡丹皮和杞菊地黄丸中丹皮酚的含量

RP-HPLC法测定牡丹皮和杞菊地黄丸中丹皮酚的含量 RP-HPLC法测定牡丹皮和杞菊地黄丸中丹 皮酚的含量 ? 2O6? 文章编号:1009—2811(2005)04—206—02 空军总医院2005年第21卷第4朔 RP.HPLC法测定牡丹皮和杞菊地黄丸中丹皮酚的含量 梁贵键,朱莉,张华,张蔚君,张福成,吕冬.,端裕树 (空军总医院药学部,北京100036;北京岛津中心,北京100020) 摘要:目的建立牡丹皮和杞菊地黄丸中丹皮酚含量测定方法方法采用HPLC法测 定杞菊地黄丸中丹皮酚的含 量,固定:CIO-ODS柱(15Omm×4.6mm),流动相:甲醇一磷酸缓冲盐(pH3.1)(42:58),检测波长299nm,柱温3o~C,流速 1.oml/min,丹皮酚保留时间7.5min.结果牡丹皮和杞菊地黄丸中的丹皮酚与其他成 分分离良好,丹皮酚线性范围 5,5Offg/I,r=0.9997(n:6).牡丹皮药材中丹皮酚平均回收率为97.86Voo,RSD=0.64结论本法分析简便,灵敏, 迅速,准确. 关键词:色谱法,高压液相;丹皮酚/分析;牡丹皮/分析;杞菊地黄汤/分析 中国分类号:R283.6;R289.5;R446.9文献标识码:A DeterminationofthecontentsofPaeonolinCortex MuotanandQijudihuangPillsbyRP-IHPLC LIANGGui-jian,ZHULi,ZHANGHua,etal (DepartrnentofPharmacy,GeneralHospitalofAirForce,Beijing100036,China) Abstract:ObjectiveToestablishamethodforthequantitativedeterminationofthecontentsof Pae— onolinCortexMuotanandQijudihuangPills.MethodsPaeonolwereseparatedanddetermin edbyre— versedphasehighperformanceliquidchromatography(RP—HPLC),withaCLO— ODScolumn(150× 4.6mm)andamixtureofmethanol— phosphatebuffer(pH3.1)(42:58)asmobilephase(particlesize5 microns).Theflowratewas1ml/min.Thecolumntemperaturewas30?.Thedetectionwavelengthwas 299nm.TheretentiontimeforPaeonolwas7.5min.ResultsPaeonolinCortexMuotanhasago od linearity,andtheaveragerecoverywithRSD(一6)is97.86%? 0.64%forpaeono1.Thelinearcalibra— tioncurveforPaeonolwasobtainedintherange5.0, 5O.0microgramswiththecorrelationcoefficient 0.9997.ConclusionThemethodissimple,sensitive,rapidandaccurate. Keywords:Chromatography,highpressureliquid;Paeono/analysis;Cortexmoutan/analys is;QijuDi— huangdecoction/analvsis 常用中药牡丹皮为毛莨科植物牡丹(paeonia suffriticosaandr)的干燥根皮.具有清热凉血,活血 散瘀之功效,常用于跌打损伤,瘀血肿痛.根皮主要 含有丹皮酚(又称牡丹酚,paeono1)等挥发油.现代 药理研究证明丹皮酚具有抗炎,镇静,降压,抗氧 化,保护心肌细胞及抑制血小板凝集等作用.牡 收疆日期:2003—04—21 丹皮的主要活性成分中,以丹皮酚含量最高.丹皮 酚含量测定方法有气相色谱法"l_】',紫外分光光度 法[3和高效液相色谱法[4等.中国药典2000版中 对牡丹皮含量测定采用水蒸气蒸馏提取丹皮酚,用 紫外分光光度法测定.该法操作繁琐,且不适合大 多数制剂中丹皮酚的测定.杞菊地黄丸具有滋肾养 肝的功效,是临床上常用中成药.有文献采用 HPLC法测定了杞菊地黄丸中齐墩果酸,熊果酸的 空军总医院2005年第21卷第4期 含量,但HPIC测定杞菊地黄丸中丹皮酚的含量的 方法及论文仍未见报道.笔者采用高效液相色谱法 测定了牡丹皮药材及杞菊地黄丸中丹皮酚的含量. 1仪器与材料 LC一10A高效液相色谱仪(日本岛津科学仪器 公司),配有SPD-10MA二极管阵列紫外检测器, CLASS—M10A色谱工作站.PHS一3B精密pH计 (上海雷磁仪器厂).甲醇(天津四友化学公司,色谱 纯),磷酸(JL京化工厂,优级纯),丹皮酚对照品(中 国药品生物制品检定所),牡丹皮(市售品),杞菊地 黄丸(北京同仁堂制药二厂,市售品). 2色谱条件 固定相:CLO—ODS色谱柱(4.6mm×15O mm,5gm日本岛津科学仪器公司),流动相:甲醇 磷酸缓冲盐(pH一3.1)(42:58),流速: 1.0ml/min,柱温:室温,检测波长:274rim,进样 2O1,定量计算方法采取峰面积.牡丹皮药材及杞 菊地黄丸样品HPLC色谱图见图1. 3对照品线性关系 3.1对照品溶液的配制精密称取丹皮酚对照晶 12.5mg,用适量甲醇溶解,置于25m1量瓶中,用 4O%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得丹皮酚对照品贮备 液(O.5mg/m1).同法得内标物贮备液.分别准确 吸取0.10,0.20,0.40,0.60,0.80和1.0ml丹皮酚 贮备液于5个1Om1量瓶中用流动相定容至刻度, 即成5,10,20,30,40和50g/ml丹皮酚对照品系列 工作液. 3.2峰面积与浓度的线性关系按给定色谱条件, 分别进样,记录丹皮酚浓度与峰面积,在所测5.0, 50gg/ml范围内,峰面积(A)与浓度(C)呈良好的 线性关系,相关系数r一0.9997,线性回归方程A= 181+24256C. 4回收率试验 取已知丹皮酚含量的牡丹皮生药样品10mg, 精密称定,添加适量丹皮酚,按样品测定方法操作, 所测丹皮酚总量减去牡丹皮药材中丹皮酚的量,计 算回收率.结果为97.86,RSD=0.64,见表1. 5精密度试验 取20gg/ml丹皮酚对照品工作液2O1,1d中 连续进样6次,或8d内分别进样1次,分别计算日 内误差和日间误差.结果为日内误差RSD一 1.13(一6),日间误差RSD=1.62(一8). 6样品制备与测定 精密称取样品适量(药材粉末0.5g,中成药丸 则切碎取5g,置于5Oml具塞三角瓶中,加2Oml 乙醇,称重,浸泡过夜,超声提取20min后,用乙醇 补足重量,摇匀,静置,取0.5m1提取液置离心管, 在13000转/min下离心10min,准确取上清液 101进样,测定结果见表2. 表1回收率试验 图1I-IP1c色谱图a:牡丹皮提取液;b:杞菊地黄丸;c:丹皮酚对照品;1:丹皮酚 (下转第210页) 情况. 4.3增加母体孕期钙的摄人量和维生素D的摄人 量,以期减少骨吸收,缓解骨密度的下降.r4] 参考文献 [1] E2] [3] [5] 林守清.中华医学会骨质疏松症新进展学习班讲义[M3.北 京:中华医学会,1999.03.[6] AnnPrentice.Maternalcalciumrequirementsduringpregnan— cyandiactation[J].AmJClinNutr,1994,59(supp1):$477— 483. HruberHE,GutteridgeDH,BaylinkDJ,eta1.Osteoporosis 空军总医院2005年第21卷第4期 associatedwithpregnancyandlactation.Bonebiopsyandskel, etal{eaturesinthreepatients[J].MetabBoneDisRelDis, 1984.5(3):159—165. 何玉香,何代璇,张惠英,等.不同孕期及分娩后妇女血清骨钙 素浓度的变化[J].中华妇产科杂志,1994,z9(2):97—98. Sowers.Roleofcalciotrophichormoonesincalciummobiliza- tionoflactation[J].AmJClinNutr,1998,67(2),284—291. CrOSSNA,HillmanLS,AlienSH,eta1.Calciumhomeostasis andbonemetabolismduringpregnancy,lactation,andpostw— eaning,alongitudinalstudy[J].AmJClinNutr,1995,61(3): 514-523. (上接第207页) 表1样品中丹皮酚含量(rag/g~SD,n一3) 7讨论 笔者比较了采用水和乙醇二种不同溶剂提取液 中HPLC色谱图的差异.水提取液中丹皮酚含量 甚微,水蒸馏法提取液色谱图较干净,但丹皮酚含量 低于乙醇超声提取.这是因为丹皮酚水溶性差的缘 故.丹皮酚具有较强的挥发性,在室温下放置10d, 含量下降6.7,6o?下放置1周后挥发超过7o. 所以在操作提取时温度不宜过高,样品制备好后,宜 及时测定,或置冰箱冷藏. 所测中药化学成分丹皮酚上的酚羟基具有一定 的酸性,故在选择色谱流动相时,应调整在酸性范 围,抑制酚羟基的电离,有利于丹皮酚峰形的对称 性. 经我们在药物色谱保留行为数据库I8上查询 后得知,丹皮酚HPLC保留行为的保留规律是,在 ODS柱上,当甲醇百分浓度(,V/V)大于5O时, 中药中的丹皮酚峰会受到中药样品中的其他成分的 干扰,不能达到基线分离.当甲醇百分浓度(V, V/V)小于3O%时,丹皮酚色谱峰的保留时间过长, 保留因子k不在理想的3,5之间.经多种因素考 虑优化,故最终选择的流动相为甲醇一磷酸缓冲盐 (42:58,PH一3.1). 参考文献: [9] [103 叶阳明,王富英.气相色谱法测定徐长卿牡丹皮及其制剂中 丹皮酚含量的研究口].药物分析杂志,1995,15(增刊):4IO. 段玲.毛细管气相色谱法测定牡丹皮中丹皮酚的含量口]. 中国药科大学,1989,20(5):271. 中华人民共和国药典[^们.北京:化学工业出版社,2000.137. 李晔,李彤晖.RP—HPLC测定骨刺宁胶囊中丹皮酚的含量 口].华西药学杂志,2004,19(2):139—141. 孙言才,沈玉先,孙国平,等.反相高效液相色谱法检测小鼠 血清中丹皮酚浓度口].中国医院药学杂志,2004,24(1);7-9. 黄玉芬,张秀芝,姚华,等.高效液相色谱法测定星翳明片 中丹皮酚含量口].沈阳药科大学,2003,20(1):1516. 房杏春.HPLC法测定丹皮中丹皮酚的含量口].中国药科大 学,1989,20(2):109. 徐德然,王峥涛,罗红云,等.HPLC法测定杞菊地黄丸,金匮 肾气丸中齐墩果酸,熊果酸的含量[J].中药材,2002,25(7): 503—504. 梁贵键,朱莉.二百种药物HPLC色谱行为测试及其数据库 的建立与应用口].中国药学杂志,1995,(增刊):48. 梁贵键,朱莉,邹风君,等.根据色谱保留值与流动相pH值 的关系对212种药物常用药物的分类[J].色谱,1996, 14(3):197. 叫嘲嘲嘲嘲嘲