药学论文-高效液相色谱法测定康妇灵胶囊中苦参碱、氧化苦参碱的含量

药学论文-高效液相色谱法测定康妇灵胶囊中苦参碱、氧化苦参碱的含量 药学论文-高效液相色谱法测定康妇灵胶囊中苦参碱、氧化 苦参碱的含量 【摘要】 目的:建立康妇灵胶囊的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法。 色谱柱:Agilent Technologies ZORBAX Extend-C18 4.6×250mm,5μm,流动相: 乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液:PH6.8::16: 16:68:,流速:1.0ml?min,1,检测 波长:220nm,柱温:30?。结果:苦参碱在0.02,0.40mg?ml,1范围内线性关 系良好:r=0.9995:;平均加样回收率为98.2%,RSD=1.4%:n=6:;氧化苦参 碱在0.01,0.20mg?ml,1范围内线性关系良好:r=0.9997:;平均加样回收率 为97.6%,RSD=2.2%:n=6:。结论:该方法简便易行,结果准确可靠,可适用 于康妇灵胶囊的质量控制。 【关键词】 高效液相色谱法 康妇灵胶囊 苦参碱 氧化苦参碱 含量测定 Determination of Matrine Oxgmatrine content in Kangfuling capsules by HPLC 【Abstract objective】To set up a method for quality control of Fuyankang tablets. METHOD:HPLC method was developed to quantitative determination. The separation was performed on Agilent Technologies ZORBAX Extend-C18 4.6×250mm,5μm.The mobile phase was acetonitrile-methanol-phosphate buffer (pH=6.8) (16:16:68).The flow rate was 1.0ml?min-1 .The UV detection wavelength was 220nm. The column temperature was 30?.RESULTS:The linear range of Matrine and Oxgmatrine were at 0.02,0.40 mg?ml-1 (r=0.9995) and 0.01,0.20 mg?ml-1 (r=0.9997) respectively, the average recoveries(n=6) were 98.2% and 97.6% with RSD 1.4% and 2.2%. CONCLUSION The method is simple and accurate, it can be used for quality control of Kangfuling capsules. 【Key words】HPLC; Kangfuling capsules;Matrine;Oxgmatrine; Determination 康妇灵胶囊为《国家药品监督管理局:试行:》收载的品种,由苦参、 杠板归、黄柏、益母草、鸡血藤、红花龙胆、土茯苓、当归等8种中药组成。具 有清热燥湿、活血化瘀、调经止带的功效,为妇科常用中药[1]。苦参含有苦参 碱、氧化苦参碱等成分,我们采用高效液相色谱法测定制剂中苦参碱、氧化苦参 碱的含量,该项方法操作简便、快速、准确可靠,可用于康妇灵胶囊的质量控制。 1 仪器与试药 1.1 仪器 LC-2010A高效液相色谱仪,CLASS-VP色谱工作站。 1.2 试药 苦参碱对照品:批号:100078-200414:,氧化苦参碱对照品:批 号:110780-200004:,由中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用;康妇 灵胶囊为市售样品:贵州和仁堂药业有限公司,规格:0.4g?粒,1,批号:20061108, 20061202,20061216:。乙腈、甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:Agilent Technologies ZORBAX C18 4.6×250mm,5μm,流动相:乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液:PH6.8:Extend- :16:16:68:,检测波长:220nm,流速:1.0ml/min,柱温:30?。 2.2 溶液配制 2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的苦参碱对照品和氧化苦参碱对照品各适量,分别加甲醇制成每1ml各含0.4mg的对照品贮备液;再精密量取苦参碱对照品贮备液和氧化苦参碱对照品贮备液各适量,加甲醇制成每1ml含苦参碱0.2mg、氧化苦参碱0.1mg的混合溶液,作为对照品溶液。 2.2.2 样品溶液的制备 取康妇灵胶囊10粒内容物,研细,取约1.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨溶液2ml使湿润,再加三氯甲烷:CHCl3:30ml,超声处理:功率250W,频率33KH2:20分钟,滤过,取滤液,再用三氯甲烷洗涤残渣、容器及滤器4次,每次5ml,滤过,滤液合并,置水浴上蒸干,残渣用甲醇溶解并转移至25ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。 2.2.3 阴性对照溶液的制备 取除苦参以外的处方中其余药材的十分之一量,按法制成片,再按样品制备方法,制成阴性对照溶液。 2.3 专属性试验 分别精密吸取样品溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各10μl,注入液相色 :。由图1可见,供试品色谱中,在与对照品色谱相应谱仪,记录色谱图:图1 的位置上,有相同保留时间:1氧化苦参碱:6.866min;2苦参碱:15.422min:的色谱峰,阴性试验无干扰,证明本法可行。 2.4 线性范围考察 精密吸取对照品贮备液各适量,分别加甲醇配成浓度分别为苦参碱:0.02、0.05、0.10、0.20、0.30、0.40mg?ml,1,氧化苦参碱:0.01、0.03、0.05、0.10、0.15、0.20mg?ml,1的溶液,摇匀,滤过,精密吸取续滤液各10μl,注入液相色谱仪,记录峰面积。以峰面积:A:为纵坐标,其浓度:C:为横坐标,线性回归,苦参碱回归方程为:A=4.34×105C,3.87×102,r=0.9995;氧化苦参碱回归方程为:A=1.21×104C,8.07×102,r=0.9997。结果明,苦参碱在0.02,0.04mg?ml,1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系;氧化苦参碱在0.01,0.20mg?ml,1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。 2.5 精密度 取样品:贵州和仁堂药业有限公司,批号:20061108:按“2.2样品溶液的制备”方法制备样品溶液,重复进样5次,进样量10μl,在上述色谱条件下求得苦参碱峰面积RSD为0.9%,氧化苦参碱峰面积RSD为1.2%,表明精密度较好。 2.6 稳定性试验 取样品:贵州和仁堂药业有限公司,批号:20061108:溶液,在0、2、4、 8、24h分别进行测定。结果表明样品溶液在24h内基本稳定,苦参碱峰面积 的RSD为1.1%,氧化苦参碱峰面积的RSD为0.8%。 2.7 重复性试验 取样品:批号:20061108:共6份,分别按“2.2样品溶液的制备”方法制备样品溶液,进行测定,求得苦参碱含量的RSD为0.7%,氧化苦参碱含量的RSD为1.6%,表明重复性较好。 2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品:贵州和仁堂药业有限公司,批号:20061108,苦参碱含量3.01mg?g,1,氧化苦参碱含量2.42mg?g,1,平均装量0.3916g?粒,1:适量,共6份,分别置具塞锥形瓶中,分别精密加入苦参碱对照品溶液:0.2001mg?ml,1:、氧化苦参碱对照品贮备液:0.1000mg?ml,1:各适量,挥去甲醇,按“2.2样品溶液的制备“方法操作,得回收率试验溶液,依法测定,结果见表1。 2.9 样品含量测定 分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定三批样品中苦参碱、氧化苦参碱峰面积,按外标法计算其含量:n=5:,结果见表2。根据三批样品所测结果,暂定每粒康妇灵胶囊的苦参碱含量质控定量限为1.8mg,氧化苦参碱含量质控定量限为0.5mg。表1 苦参碱、氧化苦参碱加样回收率试验表2 三批样品含量测定结果 3 讨论 3.1 流动相的选择 笔者选择了三种流动相:?乙腈-0.1%磷酸溶液:20:80::三乙胺调节PH值至8.0:[2];?乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液:PH6.8:-三乙胺:18: 18:70:0.1:[2];?乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液:PH6.8::16: 16:68:。经多次测试结果表明,前两种流动相所得峰形较宽,含杂质多,而采用?乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液:PH6.8:为流动相所得样品峰形好,干扰成分少,故选此做为含量测定的流动相。 3.2 溶剂的确定 笔者比较了用甲醇溶解供试品及用流动相溶解供试品,结果以甲醇为溶剂分离效果好,且保留时间短。 3.3 通过对3批样品中苦参碱、氧化苦参碱的测定,结果表明苦参碱最高含量为1.38mg?粒,1,最低为1.18mg?粒,1;氧化苦参碱最高含量为1.08mg?粒,1,最低为0.94mg?粒,1。综合考虑确定限量,每粒含苦参碱不得低于1.8mg,含氧化苦参碱不得低于0.5mg。 本方法结果准确,方法简便,重现性及回收率均理想,可以有效地控制产品质量。 【参考文献】 [1] 《国家药品监督管理局标准:试行:》[S]〃2002〃 [2] 中国药典[S]〃2005,497,498〃