人工复制犬瘟热和细小病毒混合感染病例的血常规变化研究

人工复制犬瘟热和细小病毒混合感染病例 的血常规变化研究 马猛 （云南农业大学动物科学技术学院，昆明 650201） 摘    要 为了系统的了解犬瘟热和犬细小病毒混合感染发病过程中血常规的变化，本文通过对人工复制犬瘟热和犬细小病毒混合感染的试验犬进行系统的血常规检测，从中发现本病血常规的变化规律。试验结果明，犬瘟热感染早期白细胞总数和淋巴细胞数减少；犬瘟热继发犬细小病毒混合感染早期白细胞总数升高，粒细胞百分比下降；犬瘟热和犬细小病毒混合感染的中后期白细胞总数、红细胞总数显著减少，血红蛋白含量明显下降，淋巴细胞百分比严重升高；犬瘟热和犬细小病毒病混合感染晚期血常规各项指标普遍升高。犬瘟热和犬细小病毒病混合感染发病的各个阶段血常规变化有一定的规律，可以为犬瘟热和细小病毒病混合感染的诊断和治疗提供依据。 关键词：犬瘟热；犬细小病毒；血常规；混合感染 人工复制犬瘟热和细小病毒混合感染病例 的血常规变化研究 1 引言 随着我国宠物犬、试验用犬、军犬和警犬饲养量的大幅度增加，以及犬只异地交流的增多，犬传染病在我国犬中的发病率和致死率均有升高的趋势[1]。在兽医临床工作中，有人通过对犬常易患疾病，特别是传染病的调查统计得出，犬瘟热、犬细小病毒病的发生较多，对养犬业的发展造成严重威胁[2]。犬瘟热是一种传染性很强的疾病，发病率高，临床症状多样，容易继发其他细菌、病毒的混合感染和二次感染。犬细小病毒也同样具有很强的传染性，可以单独致病，也可以和犬瘟热、冠状病毒、细菌、寄生虫混合感染。在临床上犬瘟热和犬细小病毒混合感染的情况时有发生[3.4]。 犬瘟热(canine distemper，CD)是由犬瘟热病毒(canine distemper virus，CDV)引起的一种高度接触性传染病。CDV属于副黏病毒科，抵抗力不强，对热、干燥、紫外线和有机溶剂敏感，易被日光、酒精、乙醚、甲醛等杀死，pH值4.5以下和pH值9.0以上的酸碱环境也可使其迅速灭活。在2～4℃可存活数周，室温可存活数天，低温冻结可保存几个月，冷冻干燥则可保存数年[5]。犬瘟热一年四季均可发生，在冬季多发，无地区性，有一定周期性，根据报道每隔3年流行一次[4]。各种品种和年龄的犬均可感染本病，其中4～12月龄的幼犬发病率高。病犬是本病重要的传染源，其眼鼻分泌物、唾液和粪尿中均含有大量病毒，主要通过空气飞沫或被污染的物体传播，经呼吸道和消化道感染[6]。本病潜伏期随机体的免疫状况和所感染病毒的毒力与数量而不同，一般为3～6d，多数于感染后的第4天体温升高，少数于第5天，极少数于第3天或第6天。多数病例首先表现为上呼吸道的感染症状，体温升高，食欲降低，倦怠，眼、鼻流出水样分泌物，并常在1～2d内转变为黏液性，脓性；血液检查则可见淋巴细胞减少，白细胞吞噬功能下降，偶尔可在淋巴细胞和单核细胞中检出CDV抗原和包含体。此后有2～3d的缓解期，病犬体温趋于正常，精神食欲有所好转，此时如不加强护理和防治继发感染等全身性治疗，很快就会发展为肺炎、肠炎、脑炎、肾炎等全身性炎症[3]。 犬细小病毒病(canine parvovirus infection)是由犬细小病毒(canine parvovirus，CPV)引起的犬的一种急性传染病。CPV属于细小病毒科细小病毒属，对外界因素的抵抗力较强，在60℃环境可存活1h，在偏酸或偏碱的环境中病毒仍有感染性，在粪便或固体污染物上的病毒可存活数月至数年，于低温环境，其感染性可长期保持[4.7]。CPV 还具有较强的血凝性，不仅能凝集猪的红细胞．而且能凝集恒河猴、马、猫和仓鼠的红细胞。病毒凝集红细胞的最适pH值为7.2，但在PH值为6.0～8.0之间病毒都能凝集红细胞[8]。CPV主要感染犬，各种年龄、性别和品种的犬均易感染。断乳前后的仔犬易感性最高，往往以同窝暴发为特征。犬细小病毒病一年四季均可发生，以冬、春季多发。病犬是本病主要传染源，其腹泻物、尿、唾液和呕吐物中均含有病毒。康复犬也可能从粪、尿中长期排毒，从而加剧了本病的传播。本病潜伏期为7～14d，多数呈现肠炎综合征，少数呈现心肌炎综合征。肠炎型病犬表现为经1～2d的厌食、软便，间或体温升高之后，迅速发展为频繁呕吐和剧烈腹泻，排除恶臭的酱油样或番茄汁样血便，并迅速出现眼球下陷，皮肤失去弹性等脱水症状，很快出现耳鼻发凉、末梢循环障碍、精神高度沉郁等休克症状。血液检查可见红细胞压积增加，白细胞减少。常在3～4d内昏迷而死。心肌炎型病犬多见于流行初期，或缺少母源抗体的4～6周龄的幼犬。常突发先兆的心力衰竭，或在肠炎康复之后，突然充血性心力衰竭。表现为呻吟、干咳，结膜发绀，呼吸极度困难。心有杂音，心跳加快，常在数小时内死亡[3.4]。 犬瘟热和犬细小病毒混合感染方面的研究极少，但在临床上却时有发生，主要临床表现为高热、咳嗽、呕吐、腹泻、拉血便。犬瘟热和犬细小病毒混合感染治疗难度大，死亡率高，应及早诊断，在早期发现治愈率可能性大，后期才发现治愈率较低[9]。现在在临床上主要用犬瘟热病毒抗原诊断盒、犬细小病毒抗原诊断盒对犬瘟热、犬细小病毒病进行诊断，犬瘟热和犬细小病毒病混合感染后犬瘟热和犬细小病毒的抗原检测均为阳性[10]。 血常规检测作为兽医诊断和治疗的辅助检查手段在临床上使用已经多年，是动物疾病诊断和治疗中最常用和重要的检查项目之一。犬瘟热和犬细小病毒混合感染后病犬血液的红细胞总数、白细胞总数、淋巴细胞数等指标会出现明显的变化，所以血常规检测对犬瘟热和犬细小病毒混合感染的早期诊断和治疗有重要意义[11]。然而在实践中兽医工作者遇到的病犬往往只处在疾病发病过程中的某个阶段，所以在临床上很难系统的了解到犬瘟热和犬细小病毒混合感染发病过程中病犬血常规的变化，为了研究本病血常规的变化规律，本试验通过对人工复制犬瘟热和犬细小病毒混合感染的试验犬进行系统的血常规检测，从中得到规律，为本病的诊断和治疗打下基础。 2 材料与方法 2.1 材料 2.1.1 试验动物 购于本地市场外表健康的约60日龄土犬作为试验动物。 2.1.2 主要仪器及试剂 动物自动血液细胞仪（南京普朗医用设备有限公司生产）； 微量移液器（上海求精生化试剂仪器有限公司，规格：WDY型100ul）； 一次性20ul定量采血管（江苏省姜堰市荣飞器械厂生产）； CDV-Ab检测卡、CPV-Ab检测卡（韩国SD公司生产）； CDV抗原快速检测试剂盒、CPV抗原快速检测试剂盒（韩国SD公司生产）； 无氰溶血素（南京普朗医用设备有限公司生产）； 氯化钠注射液（贵州天地药业有限公司生产，生产批号：0707363A）。 2.1.3 接种病料 确诊为犬瘟热病犬的唾液、眼、鼻分泌物稀释液5ml，作为人工复制犬瘟热的接种病料；确诊为犬细小病毒的病犬的粪便稀释液5ml，作为人工复制犬细小病毒病的接种病料。 2.2 方法 从市场购得的试验犬，隔离观察一周，精神、食欲、粪便、呼吸，体温等正常后，抽血制备血清用CDV-Ab和CPV-Ab检测卡作抗体检测，结果均为阴性，说明该犬未注射过犬瘟热和犬细小病毒疫苗，也未曾感染过犬瘟热和犬细小病毒，可作为试验用犬。接下来每隔一天对试验犬进行一次血常规检测，一直到试验结束。测试验犬正常阶段的6次血常规后，用取自农大动物附属医院确诊为犬瘟热病犬的病料稀释液5ml分点皮下注射给试验犬，第二天同法再接种一次。接种后第5天试验犬开始出现类似感冒症状，用CDV抗原快速检测试剂盒检测呈阳性（图1），说明人工感染犬瘟热成功，在此阶段检测试验犬血常规3次后，用取自农大动物附属医院确诊为细小病毒的病犬病料稀释液5ml灌喂给试验犬，第二天同法再接种一次。接种后第10天试验犬开始出现犬细小病毒感染的初期临床症状，用CPV抗原快速检测试剂盒检测呈阳性（图2），说明人工感染犬细小病毒成功。此后每天监测体温，同时分析测得试验犬血常规各项指标的变化。 图1 CDV抗原诊断测试板   Figure 1 CDV antigen diagnostic test board 图2 CPV抗原诊断测试板     Figure 2 CPV antigen diagnostic test board 3 结果与分析 3.1 试验结果 以下各图表均以第1次测量试验犬血常规的日期作为图表中测量时间的第1d，试验犬接种CDV的时间为以下各图表的第12d和第13d，试验犬接种CPV的时间为以下各图表的第22d和第23d，试验犬在第42d死亡，试验得到的数据见表1。 表1  试验犬血常规各项指标数据表 Table 1  Dog blood test indicators data tables 测量时间 (d) RBC (1012/L) HGB (g/L) WBC (109/L) LY％ (％) MO％ (％) GR％ (％) LY# (109/L) MO# (109/L) GR# (109/L) 1 6.41 136 8.67 22.0 3.5 74.3 1.90 0.30 6.44 3 6.37 133 8.73 20.8 3.3 75.7 1.81 0.28 6.60 5 6.40 135 8.68 21.7 3.1 75.2 1.88 0.26 6.52 7 6.35 133 8.66 22.1 3.4 74.1 1.91 0.29 6.41 9 6.38 134 8.69 21.9 3.5 74.5 1.90 0.30 6.47 11 6.41 136 8.70 21.2 3.7 75.0 1.84 0.32 6.52 13 6.24 132 8.75 21.1 3.9 74.8 1.84 0.34 6.54 15 6.17 129 7.64 16.9 5.1 75.9 1.29 0.38 5.79 17 6.05 123 5.07 12.9 6.4 80.6 0.65 0.32 4.08 19 6.11 127 4.13 10.7 7.9 81.1 0.44 0.32 3.34 21 6.09 125 4.02 10.5 8.1 81.3 0.42 0.32 3.26 23 6.16 128 7.72 12.7 9.2 77.9 0.98 0.71 6.01 25 6.03 120 9.81 14.9 9.3 75.4 1.46 0.91 7.39 27 5.88 114 14.62 21.2 9.5 69.2 3.09 1.38 10.11 29 5.43 104 19.31 35.4 9.9 54.6 6.83 1.91 10.54 31 4.43 89 13.87 43.5 10.1 46.1 6.03 1.40 6.39 33 3.31 73 7.63 54.8 10.3 34.7 4.18 0.78 2.64 35 2.30 62 3.99 59.7 10.3 29.8 2.38 0.41 1.18 37 2.29 62 1.88 69.5 10.7 19.5 1.30 0.20 0.36 39 3.76 81 9.87 68.6 11.1 19.9 6.77 1.09 1.96 41 5.04 102 23.2 70.2 13.1 16.7 16.28 3.03 3.87 为了能更直观的分析试验过程中试验犬血常规各项指标的变化规律，把表1中得到的数据绘成曲线图（图3到图11）进行分析。 图3  WBC变化曲线图 Figure 3  WBC curve of change 从图3可以看出，试验犬的白细胞总数在第1～11d变化不大，第11～21d出现明显下降，第21～29d出现明显升高，第29～37d又出现明显下降，第37d出现最小值，第37～41d再次明显升高，第41d出现最大值。 图4  RBC变化曲线图                    图5  HGB变化曲线图       Figure 4  RBC curve of change            Figure 5  HGB curve of change 从图4和图5可以看出，试验犬的红细胞总数和血红蛋白含量的曲线变化大致相同，第1～27d两者变化都不大，第27d开始两者都出现明显下降，在第37天两者都出现最小值，第37～41d两者又同时出现一定的升高。 图6  LY％变化曲线图                    图7  LY# 变化曲线图       Figure 6  LY％ curve of change            Figure 7  LY# curve of change 从图6和图7可以看出，试验犬的淋巴细胞百分比和淋巴细胞数在第1～31d的变化基本一致，都是第1～11d变化不大，第13～21d出现明显下降，第23～31d出现明显升高。第31d后两者的变化出现了明显差异，淋巴细胞百分比在第31～41d一直明显升高，而淋巴细胞数则在第31～37d出现明显下降，第37～41又出现明显升高。 图8  MO％变化曲线图                  图9  MO# 变化曲线图       Figure 8  MO％curve of change          Figure 9  MO# curve of change 从图8和图9可以看出，试验犬的单核细胞百分比和单核细胞数在第1～11d变化不大，此后单核细胞百分比在13～41d一直升高，单核细胞数则在第13～21d变化不大，第21～31d出现明显增多，第31～37d出现明显减少，第37～41d又一次出现明显增多。 图10  GR％变化曲线图                  图11  GR# 变化曲线图       Figure 10  GR％ curve of change          Figure11  GR# curve of change 从图10和图11可以看出，试验犬的粒细胞百分比和粒细胞数在第1～11d变化不大，第13～21d粒细胞百分比升高，粒细胞数下降，第21～41d粒细胞百分比一直下降，粒细胞数则在第23～29d出现明显升高，第29～37d出现明显下降，第37～41d又出现升高。 3.2 分析 3.2.1 未感染犬瘟热和犬细小病毒阶段 本试验的第1～11d由于试验犬没有接种任何病毒，所以这个阶段的数据反应的是试验犬血常规各项指标的正常值，本试验在这个阶段得到的试验犬血常规的各项指标变化不大，并且都在正常范围，为接下来观察试验犬血常规各项指标的变化提供了对照依据。 3.2.2 感染犬瘟热病毒阶段 本试验的第12～21d试验犬只接种了CDV，所以这个阶段反应的是试验犬单独感染犬瘟热早期血常规各项指标的变化规律。在此阶段试验犬的WBC、LY％、LY#、GR#下降，试验犬的MO％、GR％升高，试验犬的RBC、HGB 、MO#变化不明显。试验犬单核细胞数变化不明显而单核细胞百分比却升高，粒细胞数下降粒细胞百分比却升高，这说明单核细胞百分比和粒细胞百分比的升高是由淋巴细胞百分比下降引起。淋巴细胞百分比下降是白细胞总数和淋巴细胞数减少共同影响产生的结果，所以在犬瘟热感染早期，试验犬血常规的主要变化是白细胞总数和淋巴细胞数减少。本试验在这个阶段试验犬白细胞总数减小后出现的最小值为4020个/MM3，淋巴细胞数减小后出现的最小值为420个/MM3。 3.2.3 犬瘟热和犬细小病毒混合感染阶段 本试验的第22～41d试验犬即感染了CDV又感染了CPV，此阶段为犬瘟热和犬细小病毒的混合感染阶段。在本试验的第23～29d试验犬的WBC、LY％、MO％、LY#、MO#、GR#升高，试验犬的RBC、HGB 、GR％下降。其中WBC、LY％、LY#、GR#是在此阶段由明显下降变为明显升高，GR％则由明显升高变为明显下降。白细胞总数的升高会使淋巴细胞数、单核细胞数、粒细胞数随之升高，所以在犬瘟热继发犬细小病毒混合感染的早期血常规最主要的变化是白细胞总数升高和粒细胞百分比下降。这个时期试验犬白细胞总数升高后出现的最大值为19310个/MM3。 本试验的第29～37d，试验犬的RBC、HGB 、WBC、GR％、LY#、 MO#、GR#下降，LY％、MO％升高。试验犬的白细胞总数在这个阶段由升高变为下降，并且下降非常明显，这说明白细胞总数显著减少是犬瘟热和犬细小病毒混合感染的中后期血常规一个显著的变化。在这个阶段淋巴细胞数和单核细胞数减少，而淋巴细胞百分比和单核细胞百分比却升高，特别是淋巴细胞百分比出现严重升高，说明淋巴细胞百分比出现严重升高也是犬瘟热和犬细小病毒混合感染的中后期血常规一个明显的变化。此外试验犬的红细胞总数和血红蛋白含量在第27d开出现明显减少，说明这两项指标也能反应犬瘟热和犬细小病毒混合感染中后期血常规的变化。在这个阶段试验犬白细胞总数下降后出现的最小值为1880个/MM3，淋巴细胞百分比升高后出现的最大值为69.5％,红细胞总数下降后出现的最小值为2290000个/MM3,血红蛋白含量下降后出现的最小值为62g/L。本试验的第37～41d，试验犬血常规的所有指标除粒细胞百分比外都出现明显升高，说明血常规各项指标普遍升高是犬瘟热和细小病毒混合感染晚期血常规的主要变化。 4 讨论 4.1 犬瘟热继发细小病毒混合感染早期白细胞增多的原因 犬瘟热在发病早期，白细胞减少，但后期如细菌性继发感染未被控制，则出现明显的白细胞增多[4]。在本试验中试验犬接种CPV后的7d内白细胞总数出现明显增多，CPV不可能导致试验犬白细胞总数增多，所以笔者认为引起这几天试验犬白细胞总数增多的原因是细菌感染。由于试验犬感染犬瘟热后机体免疫力和抵抗力下降引起细菌感染，细菌感染后未被控制导致白细胞总数升高，所以出现瘟热继发犬细小病毒混合感染早期白细胞总数增多的现象。 4.2 试验犬红细胞总数和血红蛋白含量下降的原因 犬瘟热和犬细小病毒混合感染的中后期，试验犬红细胞总数和血红蛋白含量显著减少，在这个时期试验犬出现血便，拉血会使试验犬的红细胞大量损失，从而引起试验犬血液中红细胞减少，进而导致血红蛋白含量减少，所以笔者认为犬瘟热和犬细小病毒混合感染的中后期出现试验犬红细胞总数和血红蛋白含量下降的原因是试验犬拉血。 4.3 犬瘟热和犬细小病毒混合感染晚期各项指标升高的原因 血浆中水分丢失，血液浓缩可以导致血液中红细胞总数和血红蛋白含量相对增多[10]。犬瘟热和犬细小病毒混合感染的晚期，试验犬血常规的各项指标除粒细胞百分比外都出现明显升高。在这个时期验犬拉血的症状并没有改善，而血常规检测红细胞总数和血红蛋白含量却升高，笔者认为引起这个时期红细胞总数和血红蛋白含量升高的原因是试验犬严重脱水，血液浓度严重升高，导致红细胞总数和血红蛋白含量相对增多。其他指标升高的原因除了试验犬严重脱水外，严重继发细菌感染也是一个重要原因。 5 结论 本试验是对人工复制犬瘟热和犬细小病毒混合感染的试验犬进行系统的血常规检测，反应出在犬瘟热和犬细小病毒混合感染发病过程中试验犬血常规各项指标的变化规律，通过试验得到以下结论：1，单独感染犬瘟热的早期白细胞总数和淋巴细胞数减少；2，犬瘟热继发犬细小病毒病混合感染的早期白细胞总数升高，粒细胞百分比下降；3，犬瘟热和犬细小病毒混合感染的中后期白细胞总数、红细胞总数显著减少，血红蛋白含量明显下降，淋巴细胞百分比出现严重升高；4，犬瘟热和犬细小病毒混合感染的晚期，血常规的各项指标除单核细胞百分比外都出现升高。 犬瘟热和犬细小病毒病混合感染发病的各个阶段血常规变化有一定的规律，可以为犬瘟热和犬细小病毒病混合感染的诊断和治疗提供依据。在临床实践中，如果遇到血常规检查白细胞总数、淋巴细胞数减少，并且伴有呼吸道症状的情况，应考虑犬瘟热感染的可能性，如果遇到血常规检查白细胞总数、红细胞总数明显减少，血红蛋白含量明显下降，淋巴细胞百分比严重升高，并且伴有消化道、呼吸道症状的情况，应该考虑犬瘟热和犬细小病毒混合感染的可能性。 参考文献 [1] 李阳友.犬瘟热的研究进展[J].技术与市场,2007,21(9):72-75. 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