病毒TCID50滴度

病毒TCID50滴度 PFU:plaque forming unit，空斑形成单位。感染性滴度的单位一般示为PFU/ml。由于测定pfu往往重复性较差，因此近些年许多研究又开始采用TCID50来计算病毒的感染单位。因此建议也可使用TCID50法。 MOI :multiplicity of infection，感染复数。传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为pfu。一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值。 然而，由于病毒的数量单位有不同的表示方式，从而使MOI产生了不同的含义。能产生细胞裂解效应的病毒例如单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu表示病毒数量，因此其MOI的含义与传统的概念相同。 传统意义上的MOI的测定，其原理是基于病毒感染细胞是一种随机事件，遵循Poisson分布规律，可计算出感染一定比例的培养细胞所需的感染复数(MOI)。其公式为: P = 1- P(0) ,P(0) = e-m 或m = -InP(0)。 其中: P 为被感染细胞的百分率 P(0)为未被感染细胞的百分率 m为MOI值 例如，如果要感染培养皿中99%的培养细胞，则: m = -In(0.01)= 4.6 pfu/cell。 P(0) = 1% = 0.01 TCID50 Protocol: 1:制备96孔板单层细胞 2:将病毒做系列稀释，横向接种单层细胞板，每稀释度重复3孔 3:每日观察细胞病变，记录高于50和低于50,病变孔的病毒稀释度， 4:计算比距，获得TCID50 计算比距: (高于50,的病变率,50,)/(高于50,病变率,小于50,病变率),比距; 比距与接近50%病变率的病毒的稀释度的指数相加，就获得了指数。 比如:比色计算或者显微镜观察病毒的TCID50在10的负7和8次方之间，那么，指数,8与比距相加，获得的新的指数，就是TCID50的指数，TCID50=10的-7.几次方 TCID50与 PFU换算: PFUs,0.7×TCID50的滴度 病毒TCID滴度的计算: 50 组织培养半数感染量是病毒感染一半组织细胞时的病毒的稀释度，一般使用Reed-Muench方法计算，详细过程见表 稀释度 阳性数目阴性数目 阳性数 阴性数 比率 阳性数百 (1) (2) (3) (4) (5) 分比(6) 10,4 4 0 11 0 11/11 100 10,4.5 4 0 7 0 7/7 100 10,5 3 1 3 1 3/4 75 10,5.5 0 4 0 5 0/5 0 1(计算各病毒稀释度阳性孔数目(1)和阴性孔数目(2) 2(计算阳性和阴性孔的累积数 阳性孔累计数由下向上累积(3);阴性孔累积由上向下累积(4) 3(计算阳性孔的百分比:比率(5)=(3)/[(3)+(4)]; (6)=(5)×100 4(计算距离比 距离比例=(大于50%的阳性百分比-50)/(大于50%的阳性比-小于50%的阳性 百分比)=(75-50)/(75-0)=0.3 TCID的对数=大于50%的阳性百分比的最高稀释对数+距离比例x稀释系数的50 对数 =5+0.3×0.5=5.15 -5.15TCID=10/100微升 50 -3.15100TCID/100微升=10 50 -3.15-3.15+0.3-3.15100TCID/50微升=10/2=10=10=1:1631 50 5(稀释系数的对数 1:10稀释为1;半对数稀释为0.5;倍比稀释为0.3;1:5稀释为0.7