血小板保存

血小板保存 血小板保存 血小板保存 2011年10月06日 血小板是血液重要的组成成分参与机体凝血过程发挥正常的止血功能防止损伤后血液丢失因此血小板输注在临床血液输注中也占有很大比例。血小板采集主要有2种方法从全血中分离制备血小板机器采集献血者血小板机采血小板。2006年8月卫生部出台《关于限期停止有偿机采血小板的通知》要求各地献血办不得下达指令性无偿捐献机采血小板的指标或以发放补贴为由变相有偿机采血小板为补充无偿机采血小板的不足各采供血机构要充分利用已经采集的“无偿献血”血液资源开展手工分离制备血小板工作。目前手工分离制备血小板的方法有富含血小板血浆法PRP法和去白膜法BC法2种。由于PRP法分离制备浓缩血小板时移走富含血小板血浆后的红细胞悬液层含有大量白细胞这些白细胞会引起诸如发热、过敏等非溶血性输血反应此外红细胞悬液层中由血小板和白细胞形成的微聚物也会进一步对受血者造成危害因此BC法分离血小板的使用越来越广泛。BC法的原理是全血首先经重离心后分离白膜层再将白膜层经轻离心后移走红细胞和白细胞即得到浓缩血小板。与PRP法制备的血小板相比BP法制备的血小板具有白细胞残留量较低、血小板膜表面CD62p的表达率显著降低以及提高ATP水平和低渗性休克反应能力等优点。对血小板功能来说BP法制备的血小板糖分解率可降低一半提高氧代谢率维持二氧化碳水平使pH保持恒定尤其适合长期储运。这可能是由于血小板离心时是隔着红细胞和白细胞的“生理垫”这样的分离制备过程对血小板的损伤较低表现为反映血小板激活指标——血小板膜表面糖蛋白分子CD62p的表达率降低。因此手工分离血小板尤其是BC法制备的血小板首先可以使手工采集全血中的血小板得到充分利用避免资源的浪费其次价格低廉患者容易接受第三从全血中分离白膜再获得血小板可以降低全血保存后微聚物的形成降低受血者发生肺部、脑部栓塞的危险性减少非溶血性输血反应的发生。 血小板采集后如果不能较快用于临床必须保存起来。血小板在新鲜血中特别是在4?储存时活性很快下降6h后还有约40的活性12h后活性仅剩2050。负载海藻糖的血小板冻干后保存了血小板的完整性同时通过蒸汽后的血小板再水化存活率达到85再水化冻干血小板对凝血酶1U/ml、胶原蛋白2μg/ml、ADP20μmol和瑞斯托菌素1.6mg/ml的反应与新鲜血小板对照组几乎完全相同。通过傅立叶变换红外光谱学分析表明这种再水化冻干血小板的膜以及膜蛋白成分与新鲜血小板极其相似。海藻糖能与血小板形成氢键代替空间结构所必需的水分子即生物体内的蛋白质、核酸、糖类、脂质类及其它生物大分子周围均包着一层水膜这层水膜是维持生物大分子的结构、功能必不可少的物质基础当干燥、冷冻等条件下失去水膜时海藻糖分子能在失水部位与血小板以氢键连接形成一层保护膜以代替失去的结构水膜而不至于使血小板丧失活性另外干燥时海藻糖紧密地包住相邻近的血小板形成一种糖玻璃体使其扩散系数很低分子运动和分子变性非常微弱从而能够使血小板维持一定的空间结构。 3.2 血小板冷冻干燥保存技术 1 37?条件下负载冻干保护液4h冻干保护液中血小板20—50、海藻糖0.5—2、白蛋白0.5—2干燥体积厚度1cm、最佳0.5cm。2冷冻?自由降温至15??由15?降至40?降温速度1—5?/min最佳1?/min?60?以下维持1h以上。3 干燥?一级干燥35?10—100mT?二级干燥18?10—100mT?一级干燥和二级干燥之间采用快速直接升温避免梯度升温。4 真空干燥完毕后充入保护气氮后封装保存需要时复水后使用。 3.3 冰冻干燥保存血小板功能检测 使用CD62p、PAC-1、GP?b、GP?b /?a等指标均可作为冻干血小板功能检测的指标。应用流式细胞仪检测加入可逆性激活抑制剂后血小板的功芙峁允狙 甯涸睾,逄?h后CD62p表达率高于负载前加入可逆性激活抑制剂后其表达率显著下降与负载前比较没有显著性差别而PAC-1的表达率在血小板负载海藻糖前后、添加和未添加可逆性激活抑制剂的条件下均未发生显著性改变。因而CD62p被认为是反映血小板激活后期1个最为灵敏的指标而PAC-1活化的GP?b /?a复合物是反映血小板激活早期的1个灵敏度较低的指标。冻干血小板可以准确的粘附在剥脱的内皮下组织上而与完整的血管壁不发生粘附即使经过固定和脱水处理后血小板表面的GP?b还是完整的并在粘附过程中承担着控制因子的作用且冻干血小板中的GP?b依然保持着粘附控制的作用。在GP?b /?a的表达上通过单克隆抗体和流式细胞术分析再水化冻干血小板中很少