人感染猪链球菌病【精品-doc】

人感染猪链球菌病【精品-doc】 人感染猪链球菌病 重症链球菌感染是由链球菌,Streptococcus,感染引起的预后较差的一类疾病的总称,主要指链球菌中毒休克综合征,STSS,。人和多种动物均可感染链球菌而发病。由于链球菌的血清群繁多,其感染宿主和致病力也不尽相同,因此所引起的人和动物的疾病也多种多样。其中,由猪链球菌II型引起的人畜疾病是一种重要的人畜共患病。 二十世纪中期,由于大量抗生素的使用,重症链球菌感染极为少见。但80年代中期以来,欧美各国相继报道A群链球菌,如化脓性链球菌,病的发病率上升,病死率增加,特别是侵袭性重型A群链球菌病发病率增加,该病能迅速破坏组织,引起坏死性筋膜炎和肌炎,并多伴有STSS而死亡。 近二十多年,国内少有重症链球菌感染的报道。1984年底,内蒙古乌海市某矿发生一起由接触污染生猪肉引起的以手、臂局部皮肤为主的化脓性感染暴发流行,其病原为化脓性链球菌。1992年,新疆托里县某连官兵,食用了一头自养的病仔猪肉及内脏后,导致了以胃肠道症状为主的集体食物中毒,经证实为链球菌所致。 一、病原学 链球菌为圆形球菌,呈单个、成对或数个排列的短链,也可排列成串珠状长链。一般无鞭毛,不运动,D群某些菌株除外,,不形成芽胞。有的菌株在病料中或含血清的培养基内能形成菌膜。革兰氏染色一般为阳性,老龄培养物则多为阴性。致病链球菌在含血清和鲜血的培养基上生长良好。一般常用鲜血琼脂培养观察溶血现象。本菌为兼性厌氧,但在无氧时溶血明显。培养最适温度为37?。菌落细小,直径1-2毫米,透明,发亮,光滑,圆形,边缘整齐。致病性链球菌多属于溶血性链球菌,β群,。 本菌具有一种特异性的多糖类抗原,又称为C抗原。用温热稀盐酸浸出的这种抗原与特异性抗血清作沉淀反应,可将溶血性链球菌进行血清学分类。按兰氏分类,目前确定的血清群有从A至V共20个群,其中缺I、J群,。每个群结合生化和培养特性又分为若干型或亚型。化脓性链球菌是兰氏A群中唯一对人类致病的细菌,但A群链球菌对动物的致病性不强。几乎所有的菌群,都是从病猪体内分离得到。引起猪病并偶尔经伤口感染人的链球菌主要有,D群的猪链球菌II型,F群的咽峡炎链球菌,L、R、S、T、U、V群链球菌等。国外近二十年报道较多,引起猪病并偶尔感染人,导致人重症感染的,主要是猪链球菌II型,它能引起人和猪的脑膜炎、败血症和关节炎,还可引起人的知觉性耳聋和中毒性休克综合征等。 二、流行病学 ,一,流行概况 1. 猪群中发病情况 - 1 - 猪链球菌?型可引起猪的发病,现为急性败血症、脑膜炎、关节炎、支气管炎、心内膜炎,可导致急性死亡。多于4,12周龄猪群中发生暴发,病死率很高,发病没有明显的季节性,全年都有发生。病原体广泛存在于猪的呼吸道及扁桃体中。妊娠母猪的子宫和阴道中可带菌,其产下的仔猪出生后常发生感染。 但猪链球菌II型不一定都具有致病性,毒力可能与夹膜多糖、MRP、EF等多种毒力因子有关。据我国江苏兽医研究所最近做的一次调查表明,正常猪群中猪链球菌II型的带菌率很高,平均为42.6%。而澳大利亚和新西兰的研究表明75%的健康猪携带有猪链球菌,3%的健康猪血液培养阳性,但不发病。 猪群饲养密度过大、卫生条件、长途运输、气候变化等各种应激因素都可诱发猪链球菌病的发生与流行。畜牧业针对该病在猪群中流行的预防措施是,应用猪链球菌多价灭活菌苗和猪败血性链球菌活菌苗进行免疫接种,以及在饲料中添加强力霉素、阿莫西林等抗生素的方法进行药物预防。 2. 人群中发病情况 人感染猪链球菌并引起发病的情况比较少见,1968年丹麦学者首次报道了人体感染猪链球菌导致脑膜炎的病例,1975年荷兰也曾有个别病例报道。此后,在香港、英国、加拿大、德国、法国和瑞典也陆续报道了人感染猪链球菌的病例。目前全球已有200余例猪链球菌感染病例报告,地理分布主要在北欧和南亚一些养殖和食用猪肉的国家和地区。近年来,美国、澳大利亚、比利时、巴西、西班牙、日本、泰国、中国台湾、江苏等地等先后有过报道。 通常情况下,从病例中分离到的猪链球菌多为II型。但克罗地亚于2000年报道2例因猪链球菌I型感染的病例。 国外多数学者认为猪链球菌感染是人类一种的物源性职业病。据Arends JP等报道,在1968—1984年间,荷兰在30位脑膜炎病人中分离到猪链球菌,有25例病人(83,)从事猪肉业,据估计在屠夫和养猪者中,患猪链球菌性脑膜炎的年发病率约为3,10万,患猪链球菌感染的发生率是不从事猪肉加工业者的1500倍。 据Kay R等报道,1984,1993年在香港的2家医院收治了25名猪链球菌感染病例,其中,15人与猪或猪肉有职业性接触,4人在住院前16天有明显的皮肤破损史,21个病人的脑脊液检查均证实为脑膜炎。其余没有进行腰穿的4例病人,主要表现为关节炎、支气管炎,心内膜炎和胸膜炎。死亡的病例多表现为中毒性休克,并伴有脑膜炎和弥漫性血管内凝血,DIC,。 1998年,我国江苏南通地区发生的猪链球菌疫情,病人在发病前2日内均与病、死猪或来源不明猪肉有直接接触史, 19人有屠宰病、死猪的历史(占76.0,),有3人有销售猪肉史(占12.0,),另有3人有 洗、切死猪肉或剥猪头皮史(占12.0,)。25人中有7 - 2 - 例有明显的手指皮肤破损史,有20例病家周围有病、死猪的发生史。提示人类感染发病与病猪接触密切相关。 由于人们对猪链球菌认识还不够,且该菌的形态和生化特征易发生改变,给该菌的分离鉴定带来很大的困难。据此,国外一些学者认为该菌实际感染率比人们报道的要高得多。 文献报道显示,人类感染猪链球菌多为亚临川感染,发生临床病例非常少见。Robertson ID等(1989)建立了测定猪链球菌II型抗体的ELISA方法,在新西兰对兽医学生、农夫、肉品监督员和养猪者进行检测,发现猪链球菌II型抗体阳性率分别为0,、9,、10,和21,。可见,抗体的产生不仅说明隐性感染的发生,而且与猪或猪肉制品的职业接触有关。 ,二,流行特征 1. 潜伏期及传播途径 ,1,潜伏期, 调查显示,我国江苏猪链球菌II型感染的疫情中,病例的潜伏期较短,均在3日以内,最短的从接触到发病只有4个小时,27例病人中20例在暴露后2日内发病。 ,2,传播途径, 猪链球菌II型感染病例的感染来源为猪,国外也有野猪的报道。人在接触病死猪时,致病菌经破损皮肤等侵入人体,在几小时至几天内发病。猪链球菌引起的链球菌感染综合征虽为感染性疾病,但尚未发现人传人的现象。 ,3,季节分布 本病流行无明显季节性,但有夏、秋季多发,潮湿闷热的天气多发的特点。有时甚至可呈地方性爆发,发病率和死亡率都很高,给规模化养猪造成严重的损失。 三、临床表现 人体感染猪链球菌后,视细菌侵入部位而有不同的临床表现。多数病例发病初期均出现高热、全身不适,眩晕。临床上主要分为2个类型,即败血症型和脑膜炎型。 败血症型常发生链球菌中毒性休克综合征,TSS,,表现为起病急,多为突起高热,肢体远端部位出现瘀点、瘀斑,早期多伴有胃肠道症状、休克,病情进展快,很快转入多器官衰竭,如呼吸窘迫综合征(ARDS),心力衰竭,弥漫性血管内凝血(DIC)和急性肾衰等,预后较差,病死率极高。 脑膜炎型主要临床表现为头痛、高热、脑膜刺激症阳性等。该型的临床表现较轻,预后较好,病死率较低,但可发生因干扰第八头盖神经所致的感知性耳聋,54~67%,,以及运动功能失调,并发吸收性肺炎,继发性大脑缺氧等并发症 另外,猪链球菌还可侵入人体的关节、眼睛和心脏等,引起化脓性关节炎,眼内炎和心内膜炎等。 - 3 - 四、诊断 ,一,诊断依据 1,流行病学史, 发病前7天内有与病死猪,羊,接触史,如宰杀、洗切、销售等。 2,临床表现 2.1 急性起病,畏寒、发热,可伴头痛、头昏、全身不适、乏力、腹痛、腹泻、昏迷等全身中毒症状。 2.2 中毒性休克综合征 血压下降,成人收缩压在12 KPa,90mmHg,以下,伴有下列两项或两项以上,,1,肾功能不全,,2,凝血功能障碍,,3,肝功能不全,,4,急性呼吸窘迫综合征,,5,全身瘀点、瘀斑,,6,软组织坏死,筋膜炎,肌炎,坏疽。 2.3 脑膜炎 脑膜刺激征阳性,脑脊液化脓性改变。 2.4 血常规化验,白细胞计数升高,严重患者发病初期白细胞可以降低或正常,,中性粒细胞比例升高。 3,实验室检测, 病例全血或尸检标本等无菌部位的标本纯培养后,经形态学、生化反应和PCR法检测猪链球菌特有的毒力基因,cps2A、mrp、gapdh、sly、ef,鉴定,为猪链球菌。 ,二,诊断 综合病例的流行病学史、临床表现和实验室检测结果,排除其它明确病因的可进行诊断。诊断要点包括, 1、流行病学史, 当地一般有猪等家畜疫情存在,病例发病前7天内有与病(死)猪等家畜的接触史,如宰杀、洗切、销售等。 2、疑似病例, 流行病学史结合急起畏寒、发热,外周血白细胞计数升高,中性粒细胞比例升高。 3、临床诊断, 流行病学史结合中毒性休克综合征和/或脑膜炎。 4、确诊病例, 全血或尸检标本等无菌部位的标本纯培养后,经鉴定为猪链球菌。 ,三,临床分型 1,普通型 起病较急,临床表现为畏寒、发热、头痛、头昏、全身不适、乏力、腹痛、腹泻,无 - 4 - 休克、昏迷。外周血白细胞计数升高,中性粒细胞比例升高。 2,休克型 起病急骤,高热、寒战、头痛、头昏、全身不适、乏力,部分病人出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻,皮肤出血点、淤点、淤斑,血压下降,脉压差缩小。 3,脑膜炎型 起病急,发热、畏寒、全身不适、乏力、头痛、头昏、恶心、呕吐,可能为喷射性呕吐,,重者可出现昏迷。皮肤没有出血点、淤点、淤斑,无休克表现。脑膜刺激征阳性,脑脊液呈化脓性改变。 4,混合型 患者在中毒性休克综合征基础上,出现化脓性脑膜炎表现。 五、治疗 治疗原则,早发现、早诊断、早治疗,入住传染病房,隔离治疗,临床治疗包括一般治疗、病原治疗、抗休克治疗、DIC治疗等。 ,一,一般治疗 体位,一般采取平卧位。 吸氧,鼻导管给氧,效果差者可面罩给氧或使用呼吸机。 饮食,进食易消化流质饮食,对消化道症状严重的患者,可以禁食。静脉补液,保证水、电解质及能量供应。 退热,发热患者以物理降温为主,慎用解热镇痛剂。 预防应激性溃疡,法莫替丁20mg,每日2次。 支持治疗,对经济条件较好的患者,丙种球蛋白30g静脉滴注。 ,二,病原治疗 早期、足量使用抗生素,建议经验使用三代头孢菌素治疗。 头孢曲松钠,2.0g,加入5%葡萄糖液体100ml中,静脉滴入,每12小时一次。或头孢噻肟,2.0g,加入5%葡萄糖液体100ml中,静脉滴入,每8小时一次。 对有病原培养报告的患者,根据药敏报告结果调整治疗。治疗2天效果不佳者,考虑调整抗生素,治疗三天效果不佳者,必须调整治疗。 ,三,抗休克治疗 1,扩容治疗 部分患者在发病早期存在严重的有效循环血量不足的问题,积极扩充血容量是纠正休克最重要的手段。即使没有休克的患者,也应注意其血容量问题。 ,1,晶体液,林格氏液1000ml,5%葡萄糖氯化钠溶液1000ml,静脉滴入。其中可以加入50%葡萄糖液40—80ml,VitC 1—2g。根据血清钾及尿量情况,适当加入氯化钾。 - 5 - 抢救休克,以先快后慢为原则。第1小时可以输入1000—2000ml,随血容量补充,速度减为500ml以至更低。 ,2,胶体液,白蛋白30g,血浆500ml,低分子右旋糖酐500ml,静脉点滴,与晶体液配合使用。每10g白蛋白可与500ml晶体液联合使用,每100ml血浆可与200ml胶体液联合使用。 2,纠正酸中毒 5%碳酸氢钠250ml,静脉滴入,24小时可使用2次。最好有血气分析结果指导治疗。 3,血管活性药物的使用 在扩容基础上,对血压仍无上升的患者,可以使用血管活性药物。多巴胺每分钟5μg/Kg。升压效果不佳,可以继续加量至每分钟10μg/Kg。必要时加用间羟胺,剂量为多巴胺的一半,。 在充分扩容基础上,对微循环障碍患者,四肢凉,口唇发绀,甲床紫绀,,可以使用654—2 10mg,加入100ml 10%葡萄糖液体中静脉点滴,必要时可以重复。 4,强心药物的使用 心率加快、升压效果不好的患者,可以使用洋地黄类强心药物。西地兰0.4 mg,加入10%葡萄糖液体20ml中,缓慢静脉推入。可以重复给药,视病情每次给与0.2~0.4mg。 5,糖皮质激素的使用 发病前3天,琥珀酸氢化可的松300mg加入10%葡萄糖溶液中静脉滴入。一般每日1次,严重患者可以给予2次/日。 6,利尿剂的使用 无尿或少尿的患者,给予速尿20mg,效果不佳可以加大剂量。 7,中药抗休克治疗 生脉注射液40ml,加入10%葡萄糖溶液100ml中静脉点滴,3—4次/日。 ,四,脑膜炎的处理 1,颅内高压的处理, 20%甘露醇注射液250ml,快速静脉注射,每4—8小时一次,病情好转改为12小时一次。严重患者在注射甘露醇的间歇可以使用速尿20—100mg,或50%葡萄糖注射液40—60ml, 静脉注射。 2,抽搐惊厥的处理, 对抽搐惊厥患者,可以使用苯巴比妥钠100mg,肌肉注射,8—12小时一次。也可使用安定10mg,缓慢静脉注射,注意患者呼吸。必要时10%水合氯醛20—40ml,口服或灌肠。 ,五,DIC的处理 - 6 - 患者有出血表现,血小板减少或进行性下降,PT延长3秒以上,应高度怀疑DIC存在。本案之DIC的治疗原则,原发病治疗,抗生素,,支持替代治疗,必要时肝素抗凝治疗。 替代治疗,每天至少输注新鲜血浆400ml,至PT恢复正常,如果患者血小板数小于50×109/L,先输注单采血小板1单位,血小板数小于20×109/L时,1次性输注单采血小板2个单位。 肝素抗凝,如果经过以上积极替代治疗1天后出血症状不改善,血小板数和PT不能恢复正常,在继续替代输注治疗基础上可以给予肝素抗凝治疗。方法,,1,普通肝素钠25mg,皮下注射,Q12h,或者,2,低分子肝素,60 IU/kg,如用速避凝0.3~0.4 ml,,Q12h。肝素使用期限为出血明显改善,血小板数和PT恢复正常。 ,六,中医辨证治疗 1,轻症病人 临床表现,恶寒、发热、头痛、头昏、全身不适、身软乏力、腹痛、腹泻、舌淡红苔白腻、脉濡缓。 中医诊断,湿温,署温 中医辨证,温遏热伏。 治法,芳香化浊,淡渗利湿 处方,藿朴夏苓汤合甘露消毒丹化裁。 方药, 藿香15, 厚朴15, 法夏15, 茯苓15, 白叩15, 苡仁30, 扁豆30, 茵陈30, 石菖蒲15, 连翘30, 薄荷15, 荷叶15, 芦根30, 用冷水煮沸15分钟,煎熬三次,每日口服三次,每次150ml. 2,重症病人 临床表现,在上述临床表现的基础上出现昏迷、休克、淤斑。 中医辨证,热深毒深 治法,在西医抢救治疗的基础上,采取菌毒并治 处方,清瘟败毒饮 方药, 银花30g 连翘30g 生地30g 黄连15g 黄芩15g 丹皮15g 生石膏30g 知母15g 淡竹叶15g 水牛角30g 玄参30g 赤芍30g 桔梗15g 甘草15g 焦栀15g 上方用冷水连续煎熬3次,每次煮沸15分钟,三次混匀后备用,清醒者口服,昏迷 - 7 - 者可鼻饲或保留灌肠,每次200ml。 ,七,出院标准 无论疑似、临床诊断或实验室确诊病例,同时具备以下3项者方可出院。 1,全身中毒症状、休克表现、脑膜炎表现等消失, 2,体温正常3天, 3,外周血常规检查恢复正常。 六、预防控制 控制人-猪重症链球菌感染的主要措施为控制生猪疫情,没有生猪疫情就没有人间感染,禁宰病、死猪,加强屠夫与小刀手的个人防护等也是非常必要的。 ,一,预防措施 1,健康教育, 通过宣传教育使生猪宰杀和加工人员认识到接触病、死猪的危害,并要求其做好自身防护,提高养猪户、屠夫、小刀手识别猪病和病猪肉的能力。要求养猪户主动报告病猪疫情,死猪应就地深埋或焚烧,禁止抛入河、沟、塘等水体。群众不要购买及食用病、死猪肉。 2,免疫接种, 在猪病流行高峰前,接种猪链球菌菌苗。要根据当地猪病流行的主要菌株,选择针对性的菌苗,由兽医部门统一接种,确保接种质量和成功率,接种过菌苗的生猪要做好登记和特征性标记。 3,预防服药, 对于有链球菌猪病疫情的地区,与病猪有密切接触的同栏猪等,给予预防服药,可以有效地减少生猪疫情,没有生猪疫情的地区,不提倡预防服药,以防耐药菌株产生。 4,猪病监测与生猪检疫, 建立、健全生猪疫情报告,对病、死猪取其病灶部位、脓灶、血液、淋巴结和各组织脏器等进行压片镜检以及病原分离与鉴定。实行生猪集中屠宰制度,统一检疫,严禁屠宰病、死猪,同时加强上市猪肉的检疫与管理,禁售病、死猪肉。 ,二,疫点与疫区的消毒处理 对通向病家和病猪舍的道路、病猪舍,病家的地面、墙壁、门窗、门拉手等,可用含1%有效氯的消毒液或0.5%过氧乙酸等进行喷洒或擦拭消毒。病人的排泄物、呕吐物与消毒剂混匀消毒,其容器以消毒剂浸泡处理。对病死猪要用有效消毒剂喷洒尸体表面,并用浸有0.2%过氧乙酸的棉球塞住口、鼻、耳等处后深埋,2米,,坑底铺一层漂白粉,最好集中消毒深埋,且远离饮用水源50米以上。病人尸体要消毒后火化。 ,三,流行期措施 - 8 - 对于发生该病流行的地区,要全面启动宣传教育、卫生监督工作,加强猪链球菌菌苗,猪肺疫菌苗,的接种和预防服药,加强生猪疫情与人间疫情的监测与报告,全面清理外环境,加强饮用水源的保护,加强屠宰人员的管理,落实以禁宰病、死猪为主的综合性防制措施。 附件, 1.人感染猪链球菌病诊断标准 2.人感染猪链球菌病采样及培养方法和程序 3.猪链球菌2型检验程序 4.人感染猪链球菌病疫点消毒处理工作程序 附件1 人感染猪链球菌病诊断标准 一、诊断依据 1,流行病学史,发病前7天内有与病死猪,羊,接触史,如宰杀、洗切、销售等。 2,临床表现 2.1 急性起病,畏寒、发热,可伴头痛、头昏、全身不适、乏力、腹痛、腹泻、昏迷等全身中毒症状。 2.2 中毒性休克综合征 血压下降,成人收缩压在12 KPa,90mmHg,以下,伴有下列两项或两项以上,,1,肾功能不全,,2,凝血功能障碍,,3,肝功能不全,,4,急性呼吸窘迫综合征,,5,全身瘀点、瘀斑,,6,软组织坏死,筋膜炎,肌炎,坏疽。 2.3 脑膜炎 脑膜刺激征阳性,脑脊液化脓性改变。 2.4 血常规化验,白细胞计数升高,严重患者发病初期白细胞可以降低或正常,,中性粒细胞比例升高。 3,实验室检测, 病例全血或尸检标本等无菌部位的标本纯培养后,经形态学、生化反应和PCR法检测猪链球菌特有的毒力基因,cps2A、mrp、gapdh、sly、ef,鉴定,为猪链球菌。 二、诊断标准 应综合病例的流行病学史、临床表现和实验室检测结果,缺乏其它明确病因的进行诊断。 1,疑似病例,1，2.1，2.4 2,临床诊断病例,1，2.2+2.4,或1，2.3+2.4 3,实验室确诊病例,疑似病例或临床诊断病例中具备3者。 - 9 - 三、临床分型 1,普通型 起病较急,临床表现为畏寒、发热、头痛、头昏、全身不适、乏力、腹痛、腹泻,无休克、昏迷。外周血白细胞计数升高,中性粒细胞比例升高。 2,休克型 起病急骤,高热、寒战、头痛、头昏、全身不适、乏力,部分病人出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻,皮肤出血点、淤点、淤斑,血压下降,脉压差缩小。 3,脑膜炎型 起病急,发热、畏寒、全身不适、乏力、头痛、头昏、恶心、呕吐,可能为喷射性呕吐,,重者可出现昏迷。皮肤没有出血点、淤点、淤斑,无休克表现。脑膜刺激征阳性,脑脊液呈化脓性改变。 4,混合型 患者在中毒性休克综合征基础上,出现化脓性脑膜炎表现。 四、出院标准 无论疑似、临床诊断或实验室确诊病例,同时具备以下3项者方可出院。 1,全身中毒症状、休克表现、脑膜炎表现等消失, 2,体温正常3天, 3,外周血常规检查恢复正常。 - 10 - 附件2 人感染猪链球菌病采样及培养方法和程序 一、安全问题, 1.在标本采集过程中,注意使用一次性隔离服、手套、防护口罩等防护措施。 2.在标本采集过程中,严格采取防护措施,防止针头等锐器刺伤。 二、准备工作 1.无菌、封闭性好的试管(最好使用负压采血管)。 2.可以清楚标记且标记不易脱落的记号笔。 3.样品采样记录表。 4.采集组织标本的无菌容器。 5.无菌的剪刀、镊子和手术刀。 6.血平皿(或者使用血培养瓶)。 三、采样要求 严格的无菌操作。 四、样品种类 1.入院病人治疗前全血标本,不抗凝,,同时做血平皿或血培养瓶培养。 2.分别采集发病4-7天、14-21天的血清标本。 3.尽量采集脑脊液标本。 4.尸体解剖应无菌采集肝、脾、心血、胸,腹,水,如有病死猪也可进行解剖,取肝、 脾、肾、心血,。 五、血液和脑脊液标本的采集及培养程序 1.无菌抽取血液5-10ml,适量脑脊液标本,臵于无菌试管或者负压采血管中。 2.采集的同时做血平皿或者血培养瓶放臵于35-37?的培养,挑取可疑菌落转种,送 国家CDC鉴定。 3.记录病人的姓名、家庭住址、采集时间、性别、年龄、健康状况等资料。 六、运输以及保存 1.所有的原始标本在转运过程中应臵于安全可靠容器中。 2.标本应在带有冰袋或者冰排的泡沫箱或保温箱中运输。 - 11 - 附件3 猪链球菌2型检验程序 一、分离和程序 1,可采集病人的血,腹水,脑脊液或者是尸检标本,病、死猪的肝脏、脾脏、腹水、心血。4?保存。 2,制作肝脏、脾脏的触片,或用腹水、血液、脑脊液涂片,火焰固定后进行革兰染色,油镜下观是否有成对或短链状革兰氏阳性球菌。 3,取有成对或短链状革兰氏阳性球菌的标本接种选择增菌培养液,含15 微克/毫升多粘菌素B,30 微克/毫升萘啶酮酸的脑心培养基,,或直接划线接种含两种抗生素的羊血琼脂平板培养基,在蜡烛缸或CO培养箱中培养。 2 二、血清学检测 1,用兰氏分型乳胶凝集链球菌试剂盒进行分群 - 12 - 2,用猪链球菌1-34 个型血清进行分型 取一滴猪链球菌诊断血清悬滴于载玻片上,与一滴菌悬液充分混合,或用接种环,牙签也可,刮取单个菌落直接与血清混合,观察是否出现凝集反应,同时用生理盐水做对照。 三、生化反应 可用API 生化鉴定系统的api-strep 手工鉴定条进行鉴定,该方法可直接鉴定到种。 ,10 度生长普通实验室可以重点做VP ,七叶苷水解试验,6.5%的氯化钠生长试验,45 度试验,胆汁耐受,麦康凯培养基,。结果依次为阴性,阳性,阴性,阴性,阴性,阴性,可初步认为猪链球菌。可送交到有条件的单位做进一步鉴定。 具有参考价值的生化反应项目有, 3.1 生长特性 3.2 发酵试验 四、基因鉴定, 包括使用PCR 技术和对PCR 产物进行序列分析 可挑取分纯的菌落或在选择平板上湿润的可疑菌落,直接进行PCR 检测。 1.检测猪链球菌种特异性16S rRNA。 上游引物,cagtatttaccgcatggtagatat 下游引物,gtaagataccgtcaagtgagaa - 13 - 2.检测猪链球菌荚膜多糖基因,cps2A, 上游引物,gttgagtccttatacacctgtt 下游引物,cagaaaattcatattgtccacc 3.检测溶菌酶释放相关蛋白编码基因片段 ,mrp, 上游引物, ggtatacctt gctggtaccg ttc 下游引物,agtctctaca gctgtagctg g - 14 - 4.PCR 反应的条件, 94?预变性5 分钟;94?、30 秒,60?、30 秒,72?、30 秒,25 个循环,最后延伸72?、5 分钟。取5 微升扩增产物在1.2?的琼脂糖凝胶中进行电泳。 - 15 - 附件4 人感染猪链球菌病疫点消毒处理工作程序 一、疫点范围 人感染猪链球菌病病例家庭及其畜圈、禽舍等区域,人感染猪链球菌病病例发病前接触的病、死猪所在家庭及其畜圈、禽舍等区域。 二、准备工作 1.物资准备,灭菌粉、灭菌片、漂白粉,水桶,2只/点,、水瓢、塑料盆,漏斗、普通喷雾器,长卷尺,洁净毛巾,2条,。 2.防护用品,长筒胶靴,乳胶手套,一次性口罩,工作帽,防水工作服。 三、工作程序 1.进入现场前,做好个人防护。 2.进入现场,了解现场需消毒的物品、区域等情况,估计需消毒面积。 3.了解可能被消毒液损坏的有价值物品,给予覆盖或以其它方法消毒。 4.按需要量配臵消毒液,开展消毒工作。 ,1,按5000 mg/L有效氯浓度标准配臵喷洒消毒液,用以消毒地面、物表、墙面,每平方米喷洒100-200毫升。 消毒程序,进入疫点消毒,按由外向内顺序,喷雾或擦拭消毒门把手、地面、墙壁、家具、厕所等处,从不同房间以及最后退出时,边退边消毒经过的地面。为了保证消毒效果,病家应在60分钟后方可进入消毒现场。 ,2,按500 mg/L有效氯浓度标准配臵消毒液,对案板、盆、碗、刀等可能受污染的物品浸泡30分钟消毒。 ,3,按10000 mg/L有效氯浓度标准配臵消毒液,与病人的排泄物、呕吐物混匀消毒,其容器以消毒剂浸泡处理,浸泡时间不少于30分钟。 ,4,对病、死猪用草垫等物包裹,以含10000 mg/L有效氯的消毒剂喷洒,充分湿润包裹物,深埋,2米,3米,,坑底铺垫含氯石灰或石灰,并远离水源?50米。 ,5,病人尸体应消毒火化。 ,6,饮用水消毒,每100斤水使用1片灭菌片,充分溶化、搅拌。 5.消毒结束后,工作人员应穿长筒胶靴站入盛有消毒液的槽或盆内消毒5分钟,以0.5%的碘伏、75%的酒精棉球擦拭或醋酸氯乙啶手消毒剂喷洒消毒手部,手套、口罩、帽子、工作衣等以密封袋带回焚毁。 四、消毒工作注意事项, 1.消毒工作人员在出发前仔细检查所带消毒剂和用具是否齐全。 2.消毒时不可吸烟、喝水、吃东西,不得随便走出消毒区域,并劝阻无关人员进入疫 - 16 - 点。 3.消毒应有条不紊,突出重点。凡应消毒的物品,不得遗漏。严格区分已消毒和未消毒的物品,勿使已消毒的物品被再次污染。 4.消毒完毕应清点所消耗器材、物品,加以整修、补充。 5.嘱咐住户,消毒1小时后,打开关闭门窗通风后方可进入,对消毒过的物品进行必要清洗后再使用。 6.作好消毒记录,及时上报。 - 17 -