试验十四血清无机磷的测定[精华]

试验十四血清无机磷的测定[精华] 实验十四 血清无机磷的测定 【原 理】 用三氯醋酸沉淀血清之蛋白质，于其无蛋白滤液中加入钼酸试剂后，与血清的无机磷结合生成磷钼酸，再用氯化亚锡将磷钼酸还原成蓝色的钼蓝，其蓝色之深浅与血清无机磷的含量成正比。与同样处理的磷溶液比色后，通过计算即求出血清无机磷的含量。 【试 剂】 1、10%三氯醋酸。 2、磷标准溶液(每毫升0.8微克)。 3、钼酸试剂。 4、氯化亚锡溶液。 【操 作】 、取小三角瓶一个，加入血清0.2ml，10%三氯醋酸9.8ml，混合后，静置5分钟，过1 滤，将滤液保留一试管中备用。 管 号 试剂(毫升) 1(空白管) 2(标准管) 3(样品管) 血滤液 — — 4.0 蒸馏水 4.0 — — 磷标准溶液 — 4.0 — 钼酸试剂 1.0 1.0 1.0 氯化亚锡溶液 0.5 0.5 0.5 2、取三支试管，标明1、2、3号，按前操作。 3、将各管摇匀后，于室温中静置10分钟，以1号管内溶液作空白，在660nm波长进行比色，记录2、3号管内溶液的吸光度读数分别为A、A。 标样 每100毫升血清中无机磷的含量(毫克) 正常血清无机磷的含量为3~5毫克/100ml。在甲状旁腺机能减退、维生素D缺乏病时，血清无机磷的含量可降低。在肾功能不全时，可以使血清无机磷的含量升高。故临床上测定血清无机磷含量，有助于有关疾病的诊断。 【试剂配法】 1、钼酸试剂:称取5克钼酸铵，溶于10毫升蒸馏水内，再加15毫升浓硫酸，待冷却后，加蒸馏水至100毫升。 2、氯化亚锡溶液:称取2克氯化亚锡溶于5毫升浓盐酸中，保存于棕色瓶内，贮冰箱，此液称为氯化亚锡原液。在每次实验前，取该溶液0.5毫升，用蒸馏水稀释至100毫升。该 液贮于冰箱，但只能应用2~3天。 3、无机磷标准液:(1毫升=0.8微克)称取2.194克纯KH2PO4溶于已盛有约100毫升蒸馏水的500毫升的量瓶中，加入10毫升5mol/L硫酸，摇匀，再用蒸馏水稀释至刻度，反复倒转几次摇匀。此液为标准无机磷贮存液，每毫升含磷1毫克。向标准无机磷贮存液中加入氯仿10毫升，用力振荡，使氯仿在贮存液中饱和，如此可防止因细菌的生长而使标准磷的含量下降，取该贮存液0.8毫升用蒸馏水稀释至1000毫升，即配成每毫升含磷0.8微克的标准应用液。 【注意事项】 1、血液样品必须新鲜，不能有溶血现象，否则，血球内大量的有机磷进入血清，影响结果，如血液样品久置不分离，血球之中有机磷经酶的作用可变为无机磷，然后通过红血球膜进入血清中，也会导致测定结果过高。 2、用三氯醋酸沉淀蛋白质，滤液呈较强酸性，使磷酸盐不致沉淀，并抑制有机磷化合物的分解。 3、滤纸应先用稀盐酸洗涤，否则滤纸上的磷影响测定结果。 4、氯化亚锡有还原作用(本身不稳定，易被氧化)，实验时须临时配制应用液。