不同浓度钙离子对凝血_及_因子的作用

不同浓度钙离子对凝血_及_因子的作用 第 17 卷 第 1 期中 国兽 医学 报V o l. 17, N o. 1 1 9 9 7 年 1 月.1 9 9 7 C h in e se Jo u rn a l o f V e te r in a ry Sc ien ce J an u 3不同浓度钙离子对凝血I 、? 及, 因子的作用 , () 李佩国 张继东 李蕴玉 李双安 王洪发 河北农业技术师范学院, 河北昌黎 066600 2+ 2+ 摘要家兔血液与不同浓度 溶液混合后, 随着 浓度的增加血凝时间延长, 当血中 浓度达 C aC l2 C aC a 01054 时, 出现抗凝; 0172 溶液抗凝兔血置 37?水浴 30, 120 后, 再以生理盐水稀 ƒƒm o lL m o lL C aC l2 m in 释, 血液仍能恢复凝固。明 抗凝血中的纤溶系统未被激活, 其抗凝作用具有可逆性; 其中的凝血 ,C aC l2 , 因子无变性、降解、失活现象, 对纤维蛋白原含量无影响, 但可明显抑制 4 000 ƒ凝血酶的活性。U L 钙离子 家兔 血液凝固 凝血, 因子 纤维蛋白原 凝血酶关键词 , 中图分类号 12852S () 凝血机制发生障碍或变异, 是导致出血或血和少血小板血浆 种抗凝血及富血小板血浆PR P 1 , 3 栓形成等重症疾患的主要原因。现已确定, 在 ( ) 备用。 计数两种 中的血小板数, 分别 P P P PR P 整个凝血过程中有 12 个凝血因子和 3, 4 种血浆 用同一种 稀释 使两者 含血小板, P P P PR P PR P 2+ 蛋白成分参予。作为凝血K 因子已被公认, C a9 () 数相同 150×10ƒL 。它对血液凝固起着重要的不可替代的作用。 许多 2+ 112 报道证明, 血中 浓度低于 0127 ƒ或高 C amm o lL 4, 5 11211 不同浓度 溶液对家兔凝血时间的C aC l2 于 27 时, 可使凝血时间延长。但血中ƒmm o lL 影 响将 配 成 0109, 0118, 0136, 0154, C aC l2 2+ 0172, 0190 和 1108 的溶液, 按试剂与血液 ƒ m o lL 浓度高出 27 ƒ 后为何使血凝时间延C amm o lL6 ( ) 1?9 比例混合 血样 30 份, 用试管法依次测 长尚未见报道。 鉴于血液凝固在血液学和医学临2+ 床应用上的重要性, 本实验就不同浓度的 ,C a 定各浓度的凝血时间。 11212 可逆性测定分 2 组, 第 1 组用 0172 尤其是高出 27 以上时对血液凝固的影ƒ mm o lL ƒ抗凝血, 置 37?恒温水浴 30 后 m o lL C aC l2 m in 响机制进行了分段测定研究。 用生理盐水稀释, 测凝血时间; 第 2 组也用 0172 ƒ抗凝血, 37?水浴 2 后用生理盐水m o lL C aC l2 h 1 材料与方法 稀释, 测凝血时间。各组均以 0113 ƒ柠檬酸 m o lL 111 材料 钠抗凝血作对照。 11213 11111 供试动物 选用营养中等、临床健康的成 , 因子有效性测定 取 0136 的ƒ ,m o lL ( ( ) 年青紫蓝健兔 300 只 雌雄皆有, 均由本院实验 溶液 1 份, 使其与 9 份兔血浆 混合 C aC l2 PR P ) 动物中心提供, 采血时用乙醚麻醉动物, 通过颈后, 分取 012 放入小试管内, 置于 37 ?恒温 mL () 动脉插管 Ø 115, 210 放血。mm 水浴中, 待其自然凝固后备用, 作为试验组; 取 0113 ƒ的柠檬酸钠抗凝血 11 于 0m o lL PR P mL ( ) 1112 1 试剂 氯化钙 分析纯, 天津市塘沽邓 小试管中, 加入 01025 液 011 ,ƒm o lL C aC l2 mL 中化工厂产, 批号 8102016;凝血酶, 美国 S igm a 混合后置 37?水浴凝固, 作为对照组。 待各组凝 公司产品, - 20?冰箱保存, 用时配成所需浓度。 块形成后, 将小试管在 37?水浴中留置 10 ,m in 11113 血液样本 分别以 0113 的柠檬酸 ƒm o lL , 分别加 5 ƒ 然后轻敲小试管使凝块脱离管壁m o l钠和 0172 ƒ的 溶液作抗凝剂, 制备两m o lL C aC l2 尿素盐水溶液 115 , 并留置 37?水浴内 24 L mL , 分别在 015, 110, 210, 410, 2410 内观察凝块 h h 3 河北省教委基金资助项目 本文收到日期: 1995- 07- 17 是否溶解。 11214 纤维蛋白原滴定度测定 采用试管法分纤维蛋白原滴定度均为 1?128。 血 PR P 别测定 0172 ƒ和 0113 ƒ柠 215 m o lL C aC l2 PR P m o lL 测定结果 见表 2。TT 7 檬酸钠 的纤维蛋白原滴定度。PR P 11215 () () 凝血酶时间 测定 取内径 8 小 表 24 000 凝血酶时间测定结果 37? ƒT T mm U L 试管 10 支, 分为 2 组。第 1 组每管加 0172 ƒ() m o lL不同浓度m o lƒL C aC l处理的 2 ( )凝血酶时间 s 样 本 抗凝血 11 , 第 2 组加 0113 0ƒC aC l2 P P P mL m o lL0118 0136 0154 0172 柠檬酸钠抗凝血 11 , 置 37?水浴。各组 0P P P mL 16100????24. 9030. 6041. 302+ P P P C a( ) 每管分别加入凝血酶 生理盐水液, 2T h r T h r 0. 22 0. 26 0. 16 0. 57 6. 00? 6. 10? 6. 60? 6. 00? 0118 ƒ2 液, 20136 ƒ2 液,m o lL C aC lT h rm o lL C aC l+ N aP P P 0. 18 0. 15 0. 13 0. 18 20. 54 ƒ液和 20172 ƒT h rm o lL C aC l2 T h rm o lL C a22+ + 注:“C a P P P 和 N a P P P ”分别代表 C aC l和柠檬酸钠抗 2 (液各 011 , 立即混合并记录凝固时间各混 C l2 mL 凝血 P P P )合液均含 ƒ。4 000 T h r U L 2 结果 讨论3 211 不同浓度 溶液对家兔凝血时间的影 CaC l2 响 随着血中 浓度的增加, 凝血时间延长, 目前, 已知血液凝固是一个复杂的系列蛋白C aC l2 混入 0109, 0118 和 0136ƒ液的血凝时 m o lL C aC l2 质有限水解的过程。 钙离子作为血液凝固不可缺 () 间 分 别 为 3190 ? 0110, 4170 ? 0110 和m in 少的一个因子, 与其他凝血因子相比, 对血液凝固 具有双重作用。本实验表明, 血中浓度达 01009, 17130 ?0114;浓度超过 0154 时出ƒ C aC l2 m o lL2+ 0. 018 ƒ的 对家兔血液凝固有促进作 m o lL C a 现抗凝作用。 用, 而超过 01036 ƒ时, 则有明显延缓甚至抗m o lL 212 可逆性测定结果 0172 ƒ抗凝 m o lL C aC l2 4, 5 8 凝作用。这与犬 以及马、牛、羊 等动物的血凝血经生理盐水稀释后, 能恢复血液凝固能力; 0113 2+ 试验结果相似。 由此可见,在一定范围内对 C a柠檬酸钠抗凝血经生盐水稀释后不凝固ƒm o lL 动物血凝具有促进作用, 而当其血中浓度超过此( ()) 表 1。处理时间 30 与 120 无显 C aC l2 m in m in () 范围 0. 036 ƒ则有抑制或抗凝作用。 m o lL 在血( ) 著影响 P > 0105, 生理盐水 1 ?1 稀释较 1 ? 液凝固的最后阶段, 由于凝血酶的作用, 115 和 1?2 稀释对血凝时间延长的影响有极显 可溶性的纤维蛋白原转化成不溶性的纤维蛋白单( )著差异 P < 0. 01。 体, 而后在已活化的纤维蛋白稳定因子, 作用 a , 下侧向交联形成纤维蛋白多聚体, 因而使血液凝 () 1 家兔抗凝血可逆性试验结果 37?表 固。 , 在血液中以酶原形式存在, 其转化成有 ,a 抗凝时间生理盐水凝血时间 抗 凝 剂9 ()()() m in mL m in 活性的, 也需要凝血酶催化。据报道, 当血液 ,a 110 30 112?01138中缺乏, 因子或其活性较低时, 血凝时间即延长 , 6100?010830 115172 0ƒ m o lL或凝固不良, 血凝块可溶于 5 的尿素溶液 ƒm o lL 30 2105180?0112C aC l2 7 120 中。本实验应用 0136 ƒ溶液虽可延 1107190?0115m o lL C aC l2 ( )110 mL 120 1156140?0124缓血凝, 但血凝块不溶于 510 ƒ尿素中。这表m o lL 120 2105190?01132+ 明 的浓度变化对, 因子的活性及纤维蛋白 C a ,0113 ƒ m o lL10 30 1- 柠檬酸钠210 的侧向交联反应无影响。而用 0172 ƒm o lL C aC l230 - 011 mL 作抗凝剂时, 血浆中的纤维蛋白原滴定度与 0113 注:“- ”示不凝血 ( ) 柠檬酸钠抗凝血浆相同 1 ?128。 可见m o lƒL 0172 ƒ液的抗凝作用并不是由于使纤 m o lL C aC l2 213 , 因子测定结果 试验组和对照组所形成? 维蛋白原变性、盐析所致。从本实验 测定结果 T T 的血凝块均不溶于 510 ƒ尿素溶液。 m o lL 2+ 看, 血中 01072 的 对 4 000 凝血 ƒƒ214 纤维蛋白原滴定度测定结果0172 ƒm o lL C aU L m o lL 2+ 抗凝血 和 0113 柠檬酸钠抗凝 ƒ酶活性有明显的抑制作用, 随着 浓度的升C aC l2 PR P m o lL C a , 811 , 1980, 49: 765nua l rev iew o f b io ch em ist ry 高, 这种抑制作用进一步加强。 因此认为, 01072, . J aque s L B D un lop A PT h e effec t o f ca lc ium co n2 2+ 4 ƒ的抗凝作用主要抑制了凝血酶的活 m o lL C acen t ra t io n o n th e p ro th rom b in t im e o f do g s t rea ted ( ) 性 这种抑制是可逆的, 而对血中抗凝血系统无 . , 1945, 143: 355, 360 w ith d icum a ro lA m J P h y sio l 激活作用。申蕴如, 茅彬彬, 顾汉颐 1 凝血质的生物检定 1 药学学 5 (本文承蒙解放军农牧大学张玉生教授审阅, 谨致衷 () 报, 1962, 9 6: 333, 339 )心的感谢 徐淑云 1 药理实验方法学 1 北京: 人民卫生出版社, 6 19791826, 839 王洪发, 李佩国, 张继东等 1 不同浓度氯化钙溶液延 参 考 文 献() 缓血凝初探. 辽宁畜牧兽医, 1989, 6: 7, 9 7 梁之彦, 孙家寿, 储中禄 1 生理化学 1 上海: 上海科学 1 松冈松三著, 赵荣瑞译 1 血液凝固学二十年来的进技术出版社, 1991112, 118 8 () 展 1医学参考资料, 1976, 35 5: 1, 17 周泉生 1 凝血酶功能新探 1 生命的化学 生物化学2 周衍椒 1 止血生理与临床 1 北京: 人民卫生出版社, 9 198711, 100 () 通讯, 1988, 8 2: 10, 113 J ack so n C M , N em e r so n Y. B loo d co agu la t io n. A n2 -Ef f ec ts of D if f eren t Con cen tra t ion s of Ca lc ium Ion on the Blood ) ( )( I , ? c lo tt in g Fac tor s F ibr in ogen Pro throm b in an d F ibr in Sta- () , b il iz in g Fac tor , ( L i P e iguo Zh an g J ido n g L i Y u n yu L i Sh u an g′anW an g H o n gfa H ebe i ), , 066600 A g r icu l tu ra l T ech n olog ica l T ea ch e r C ol leg eC h a n g l iH ebe i () A bstra c t E ffec t s o f d iffe ren t co n cen t ra t io n s o f ca lc ium ch lo r ide C aC l2 o n th e c lo t t in g t im e o f , , rab b it b loo d w e re stu d ied an d th e reve r sib ility o f co agu la t io n ac t iv ity o f fac to r ,co n ten t o f f ib r ino 2 . gen an d ac t iv ity o f th rom b in w e re de te rm in edT h e exp e r im en ta l re su lt s show ed th a t th e c lo t t in g t im e 2+ 2+ p ro lo n ged w ith th e co n cen t ra t iom o f C ato b e ge t t in g h igh e r an d it w a s u n co agu la ted w h en th e C a 2+ 0. 54 ƒ. 0. 72 ƒco n cen t ra t io n w a s up to m o lLT h e b loo d w h ich an t ico agu la ted b y m o lL o f C ain w a te r 37? 30 120 w a s reve r se ly c lo t ted w h en it w a s d ipp ed in w a te r bo th a t fo r m in o r m in an d d ilu ted w ith. p h y sio lo g ica l sa lin eT h e re su lt s in d ica ted th a t th e b loo d f ib r ino ly sis sy stem w a s no t ac t iva ted an d th e . , c lo t t in g fu n c t io n o f C aC l2 w a s reve r sib leT h e re w e re no den a tu ra t io n deg rada t io n an d deac t iva t io n o f , , b loo d stab ilizin g fac to r ,an d no effec t o n f ib r ino gen co n ten tb u t it co u ld ab v io u sly in h ib it th e ac t iv2 ()4 000 ƒ.ity o f th rom b in U L ca lc ium io n; rab b it; b loo d co agu la t io n; f ib r in stab ilizin g fac to r ,, ; f ib r ino gen; Key word s th rom b in fac to r