【doc】 卵巢恶性肿瘤患者白细胞介素及T细胞亚群水平

【doc】 卵巢恶性肿瘤患者白细胞介素及T细胞亚群水平 卵巢恶性肿瘤患者白细胞介素及T细胞亚 群水平 第26卷第3S期 2005年6月 中山大学(医学科学版) JOURNALOFSUNYAT-SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) V0l-26No-3S Jun.2005 卵巢恶性肿瘤患者白细胞介素及T细胞亚群水平 魏凤娣t.黄凤英: (惠州市结核病研究所妇科,广东惠州5160012.惠州市中心医院妇产科,广东惠州516001) 摘要:【目的】探讨卵巢恶性肿瘤患者白细胞介素(IL)及T细胞亚群水平变化,从及手术和术后化疗对其影响.【方 法】用酶联免疫吸附法法检测45例健康对照者与45例卵巢恶性肿瘤患者血清IL_2,IL一6,IL一8水平.用免疫荧光法检测 T细胞亚群的变化.【结果】与健康对照组相比,术前卵巢恶性肿瘤患者儿一2水平下降(P<O.05),IL一6水平和IL_8水平升 高(P<O.05,P<O.05),CD4细胞及CD4/CD8比值下降(P<O.05,P<O.05).术前临床m,IV期患者较I—II期患者IL一2活 性 降低,IL一6,IL一8升高,CD4/CD8比例下降.与术前相比,手术后10dCD4/CD8细胞比例增加,术后化疗6个月时IL一2水平 升高,IL一6及IL一8水平降低,CIM/CD8细胞比例增加.【结论】卵巢恶性肿瘤患者存在免疫功能受损和细胞因子的异常分 泌,并且恶性程度越高,变化越明显.有效的手术和术后化疗可以逆转上述异常变化.因此,白细胞介素和T细胞亚群水平. 可作为早期诊断及手术和术后化疗效果判断的重要参考依据. 关键词:卵巢癌;白细胞介素;T细胞亚群;手术;化疗 中图分类号:R737.3文献标识码:A文章编号:1672.3554(2005)3S一0061—03 卵巢癌是妇科疾病中死亡率最高的恶性肿瘤,而近来 研究【t?发现异常表达的细胞因子及免疫功能紊乱在卵巢癌 的发生发展中起着非常重要的作用.因此,检测相关的细 胞因子及免疫学指标,对卵巢癌的早期诊断,病情观察,临 床分期以及手术和术后化疗效果判断相当重要.本研究通 过检测正常健康人和不同临床分期卵巢癌患者血清中的 IL一2,IL_6,IL一8以及T细胞亚群水平,同时观察手术和术 后化疗对上述指标的影响.探讨白细胞介素和T细胞亚群 在卵巢癌早期诊断,临床分期以及手术和术后化疗效果判 断中的作用及意义. 1对象及方法 1.1研究对象 2002年4月至2004年4月份在我院妇产科住院的卵 巢恶性肿瘤患者45例,年龄(54.8-+12.6)岁,均经手术和病 理所确诊,其中浆液性癌2O例,黏液性癌14例,子宫内膜 样癌9例,其它类型癌2例.根据FIGO分期,I,?期患者 分别为1O,12例,?,?期患者分别为13例,1O例,全部入 选卵巢癌患者均排除术前化疗及免疫抑制剂应用史,严重 感染中毒及肝肾功能障碍,术后进行6个月疗程化疗,化 疗和药物剂量均相同.于术前.手术后10d及术后化 疗第6个疗程结束后4周分别取血标本测试.正常对照组 45例,年龄(32.1?8.2)岁,均为健康志愿者,排除严重感染 及肝肾功能障碍,各种恶性肿瘤及血液系统疾病. 1.2主要试剂 IL一2,IL一6,IL一8EL/SA检测试剂均购于福建迈新生 物技术有限公司,羊抗鼠荧光抗体购于军事医学科学院. 1.3IL一2,IL--6,几一8水平测定 45例卵巢癌患者于术前,术后10d及术后化疗结束 收稿日期:2005—03—25 作者简介:魏风娣(1958一),女,广东五华人,主治医师 后4周抽取时静脉血3mL,无需抗凝.离心2000r/rainr=- 15cm),10min,取上清液一4O?保存备用.用ELISA法测 定,按说明书操作,用酶标仪于450nm处读取A值.以标 准A值绘制标准曲线.并测得出各个样本孑L测定值的大 小. 1.4T细胞亚群测定 用梯度离心法分离出外周血单个核细胞,涂片后40g,L 多聚甲基固定4?保存以备检测.应用间接荧光免疫法检 测,取2管分别放入淋巴细胞悬液5OL,再加入CD4, CD8单抗5OL后混匀,置37?孵箱30min,用含5mL BSA的PBS冲洗2次后,弃上清液.保留沉淀细胞,每管再 分别加入FITC标记的单抗鼠IgG50L,混匀后,显于37 ?孵箱30min后,再离心洗涤3次后.重悬沉淀细胞,取 细胞涂于干净玻片上,干燥后荧光显微镜观察计数,测出 CD4,CD8细胞及CD4/CD8百分率. 1.5统计学分析 采用SPSS11.0统计软件进行分析,计量资料以均数? 标准差表示,两组间比较采用两组非配对t检验,同一组前 后比较采用配对t检验,检验水准=0.05. 2结果 与对照组相比,卵巢癌组患者IL.2水平下降,IL.6及 IL.8水平上升,CD4细胞数和CD4/CD8细胞比例下降(见 表1).与I,?期患者相比,?,?期患者IL一2水平更低, IL一6水平更高,CD4细胞及CD4/CD8细胞下降更为明显. 与术前相比,手术后10dCD4/CD8细胞比例上升,但IL一2 水平反而下降:而术后化疗6个月后IL一2水平逐渐上升, IL一6及IL一8水平下降,CD4/CD8细胞比例上升(见表1). 62中山大学(医学科学版)第26卷 组别例数IL一2(U/mL)IL一6(U/mL)IL一8(ng/mL)CD4细胞(个/HP)CD8细胞(个/HP)CD4/CD8 组别例数IL一2(O/mL)IL一6(O/mL)IL一8(ng/mL)CD4细胞(个/liP)CD8细胞(个/HP)CD4/CD8 与术前相比1)P<O.05 3讨论 卵巢癌是严重危害妇女健康的恶性肿瘤,因其位置较 深,症状不明显,恶性程度高,故诊断常较困难,并且发现 时早已发生全身性转移.所以,研究卵巢癌发病机制以力 争早期诊断和治疗已成为广大妇科医学工作者研究的重 点之一.近来现代分子生物学和免疫学发现,卵巢癌的发 病机制与细胞因子异常分泌及免疫功能紊乱存在密切关 系,IL一2,IL一6等多种细胞因子分泌异常和免疫功能失调 可能是卵巢癌发病中的重要环节1,而卵巢癌化疗的敏感 性亦与IL一6,IL_8等细胞因子水平相关【41.所以,研究卵巢 癌患者血清细胞因子及T细胞亚群水平变化及其术后化 疗的关系,对于探讨卵巢癌的发病机制,早期诊断及手术 和术后化疗效果判断有着重要的意义. IL一2是T细胞产生的一种免疫调节细胞因子,具有免 疫增强活性,可诱导外周血单个核细胞肿瘤浸润细胞(TIL) 成为LAK细胞,从而产生抗肿瘤作用【51,同时,IL一2也是反 映卵巢癌患者细胞免疫功能变化的良好指标161.本实验发 现卵巢癌患者血清IL一2水平明显下降,说明卵巢癌患者免 疫功能受损,而临床分期恶性程度越高,受损越严重.术后 10d时IL一2水平反而下降,IL一2水平下降可能与手术对 机体的短暂抑制有关.但术后化疗6月后血清IL一2水平 又开始上升,说明术后化疗可以成功消除肿瘤病灶对机体 免疫功能的抑制.因此,IL一2可作为卵巢癌早期诊断及术 后化疗效果判断. IL一6是淋巴细胞单核细胞等多种细胞在多种体内外 因素刺激下分泌的一种细胞因子,与多种肿瘤发生发展关 系密切它主要是过于干预细胞的粘附性和活动力,血管 形成,肿瘤细胞增殖速度及肿瘤特异性抗原的表达.1990 年Waston等首先发现人类卵巢瘤细胞株可以产生具有正 常抗原性和生物活性的IL一6.之后,一系列研究证实1,卵 巢癌细胞存在IL一6基因的过度表达.可自分泌大量IL一6 至腹腔并进入循环系统.同时,过度表达的IL一6又可以增 加卵巢癌细胞的粘附性,趋化性和(或)化学促进性以及总 的侵袭力[91.所以,IL一6与卵巢癌相互促进,形成恶性循环. IL一8是一种多功能趋化因子,可以促进肿瘤的生长转移, 其机制通过影响细胞的粘附移动,自分泌生长因子.血管 生成因子和促进?型胶原酶活性,以促进肿瘤的发生发展 转移.有研究发现卵巢癌患者存在IL一8基因及蛋白水平的 高表达I1Ol,而高表达的IL一8反之又可保护卵巢癌细胞逃避 机体的凋亡机制1.所以,IL一6和IL.8既是卵巢癌细胞过 度表达的产物,又可以促进肿瘤的发生和转移,在卵巢癌 的发病机制中起着重要作用.本研究结果显示卵巢癌患者 血清IL一6和IL一8水平升高,且水平升高与临床分期呈正 相关性——这与国外研究相一致【L说明卵巢癌患者存 在IL一6,IL一8的过度表达,且恶性程度越高,表达量越高. 术后化疗可使血清IL一6,IL一8水平下降,说明IL一6和IL一 8可作为卵巢癌患者术后化疗监测的重要标志.但是,因 此,IL一6及IL一8可伴为反映卵巢癌病情变化,早期诊断和 术后化疗效果判断的重要参考依据. CD4T细胞数量和CD4/CD8比值是反映机体免疫功 能的重要指标.本实验发现,卵巢癌患者血清CD4T细胞 数量减少.CD4/CD8比值下降,说明卵巢癌患者存在免疫 功能受损——这与国外报道一致L其中,临床分期越 高,CD4/CD8比值下降越大,说明?,?期患者免疫功能受 损更为严重.手术后10d和术后化疗CD4/CD8比值均上 升,说明成功的手术和术后化疗可以去除肿瘤对机体免疫 功能的抑制.恢复患者抗体免疫功能. 总之,以IL一2,IL,6,IL一8及T细胞亚群改变为特征的 细胞因子异常分泌和免疫功能紊乱是卵巢癌发病机制中 第3s期中山大学(医学科学版)63 的重要特征,恶性程度越高,上述变化越明显,有效的手术 和术后化疗可逆转上述变化.动态监测上述指标.对卵巢 癌的早期诊断,病情监测和手术和术后化疗效果判断有着 重要的临床意义. 参考文献 【1】PensonRT,KronishK,DuanZ,eta1.CytokineslL一1beta, IL-2,1L-6,IL-8mcp-1,GM—CSTandTNFMphain patientswithepithelialovariancancerandtheirrelationshipto treatmentwithpaclitaxel[J].1ntJGynecolCancer,2000,10 (1):33—41. 【2】HeflerLA,GrimmC,AckermannS,etnf.Aninterleukin一6 genepromoterpolymorphisminfluencesthebiological phenotypeofovariancancer[J].CancerRes,2003,63(12): 3O66—8. 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(编辑张恩健) pAdtrack—CMV—VEGF.活体转染动脉粥样硬化兔 再狭窄模型的实验研究 耿庆山,韦方,邓云坤,冯建章 (广东省心血管病研究所心内科,广东广州510080) 摘要:【目的】克隆人VEGF65基因,构建其真核表达质粒pAdtrack—CMV-VEGF~,活体定向转染动脉粥样硬化兔再 狭窄血管,检测其表达情况.【方法】PCR法从人心脏eDNA文库钓取人VEGF基因,插入pUC,载体测序后与真核表达质 粒pAdtrack—CMV连接构建pAdtrack.CMV.VEGFPTCA球囊导管介导基因转移至动脉粥样硬化兔再狭窄血管局部,检测 基因在局部及远离部位表达情况,以及对肝肾功能的影响.【结果】?转染pAdtrack—CMV—VEGF的动物血管荧光显微镜下 观察再狭窄局部可见黄绿色荧光条带,并检测到人VEGF基因的表达;?远离脏器无转染基因表达;?对肝肾功能无明显 影响.【结论】成功将目的基因定向转移至靶部位并获有效表达,对重要脏器功能无明显影响. 关键词:血管内皮生长因子:基因;再狭窄 中图分类号:R541.4文献标识码:A文章编号:1672-3554(2005)3S-0063—03 血管内皮生长因子(VEGF)~称血管通透因子(VPF), 可特异性地作用于血管内皮细胞,促进其增殖分裂和增进 其功能.防止血小板黏附和血栓形成,增加血管通透性. 收稿日期:2005—03—12 作者简介:耿庆山(1965一),男,河南郑州人,副主任医师 初步的动物试验表明,VEGF可促进正常血管球囊损伤后 内膜修复,防止血栓形成,有效阻止内膜增厚和再狭窄 (restenosis,RS)的形成.但这些研究均是针对正常血管的研 1】】】 Ol2 nnn