HPLC法测定酮康唑乳膏中酮康唑和甲硝唑的含量

HPLC法测定酮康唑乳膏中酮康唑和甲硝唑的含量 HPLC法测定酮康唑乳膏中酮康唑和甲硝 唑的含量 西南军医2005年6月第7卷第3期 Journal0fMilitarySurgeoninSouthwestChinaJun,2005.7(3) HPLC法测定酮康唑乳膏中酮康唑和甲硝唑的含量 陆国庆胡婷婷孙伟张吴雪钗 摘要目的建立HPLC法测定酮康唑乳膏中酮康唑和甲硝唑的含量.方法色谱柱为 HypersilODSC18柱 (250ram×4.6mm,5m)大连依利特公司;流动相为甲醇:水=60:40;DAD器,检测 波长为258nm.结果在建立 的色谱条件下,酮康唑与有关杂质能有效地分离.酮康唑在0.223—4.469g,甲硝唑 在0,106—2.12t~g进样量范围内 与峰面积有良好的线性关系,相关系数分别为0,9989和0.9999,平均回收率为 97,23%,RSD为2,25%(n=3).结 论本法操作简单,结果准确可靠.可用于酮康唑乳膏的质量控制. 关键词高效液相色谱法;甲硝唑;酮康唑乳膏 中图分类号R927,2文献标识码A文章编号1672—7193(2005)03—0007—03 HPLCDererminationofKetoconazoleandMetronidazoleinKetoconazoleCream LUGuo-qing,HUTing—ring,SUNWei—zhang,WUXue— ehai,ChengduMilitaryGeneralHospital,Chengdu610083 ABSTRACTObjectiveTodeterminetheamountofketoconazoleandmetronidazoleinketoc onazolecreambyHPLC.Methods AHypersilODSCl8column(250mm× 4,6mm-5tun);Themobilephaseconsistedofmethanol—water(60:40);Detectionwasat 258nn1.ResultsThestandardcurvesofketoconazoleandmetrondiazolewerelinearoverther angeof0,223—4,46ktg(r=0. 9989)and0.106, 2.12g(r=0.9999)respectively;Theaveragerecoveriesreached97,23%,RSDwas2,25%(凡 =3),Con- clusionsThemethodissimple,reliable-andcanbeusedforqualitycontrolofketoconazolecre am. KEYWoRDSHPLCmetronidazoleketoconazolecream 酮康唑乳膏为一种乳剂型基质的乳白色软膏, 其有效成分酮康唑(ketoconazole,KCZ),是一种抗真 菌药物,临床上用于治疗体癣,牛皮癣,湿疹及神经 性皮炎等.中国药典_l用萃取,紫外分光光度法对 其进行定量,该法操作繁琐,影响因素多,特别是过 滤速度慢,清洗不易完全,对测定结果有一定影响. 笔者参考文献_2J采用HPLC法测定酮康唑乳膏的含 量,方法简便,精密度好,结果准确可靠.而该药中 含有的甲硝唑对本项目的检查干扰较大,影响检验 结果,按现有质量检验,可能会造成不应有的错 误结论.我们对此进行了探讨. 1仪器与试药 1.1仪器:HP1100型高效液相色谱仪系统:MET— TLERAE.200型天平. 1.2试药:酮康唑对照品,甲硝唑对照品,复方酮康 唑乳膏(批号20040101,20040301,20040501),由本院 普制室提供; 酮康唑乳膏处方 酮康唑10g 甲硝唑5g 作者单位:成都军区总医院药剂科(成都610083) 醋酸地塞米松 硬脂酸 单硬脂酸甘油酯 自凡士林 尼白金乙酯 三乙醇胺 硼砂 甘油 EDTA二钠 水 0.3g lOOg 23g 46g 1g 7g 2.6g 165g 0.5mg 645mL 制成lO00g 双重蒸馏水,甲醇(分析纯过滤). 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:HypersilODSC18柱(250mm×4.6mm, 5/zm)大连依利特公司 流动相:甲醇:水=60:40流速:0.8ml?min 检测波长:258nm柱温:25? 进样量:10p& 在该色谱条件下,得到酮康唑乳膏,酮康唑对照 品,甲硝唑对照品,溶剂杂质色谱图如下: ?1? 西南军医2005年6月第7卷第3期 JournalofMiLitarySurgeoninSouthwestChinaJun.2005:7(3) A:酮康唑乳膏 B:酮康唑对照品 C:甲硝唑对照品 ? 8- D:溶剂杂质 从上图中可见,该方法能够分离乳膏中的酮康 唑,甲硝唑,辅料不干扰测定,溶剂中的杂质也能与 所测样品很好分离. 2.2供试品溶液的制备精密称取酮康唑乳膏0. 432g(约相当于含酮康唑4.32mg,甲硝唑2.16mg), 置50ml量瓶中,加70%甲醇溶液适量,在70,80 水浴上加热使溶解并稀释至刻度,摇匀.于冰箱(一 4?)放置2h后迅速过滤,取续滤液放置室温,即得. 2.3最佳波长选择:将样品分别进样,采用DAD检 测器,选用三维图谱观察,在258nm处酮康唑与甲硝 唑均具有较大吸收波长.且与乳膏基质及溶剂杂质 峰能够较好分离. 2.4标准曲线精密称取酮康唑对照品0.223g,甲 硝唑对照品0.106g于1013ml容量瓶中,流动相定 容,再分别吸取1ml至10ml容量瓶中,流动相定容, 得0.233mg?ml酮康唑,0.106mg?ml甲硝唑溶液. 连续进样1l,2ttl,4ttl,10ttl,20ttl.以峰面积的积分 值A为纵坐标,以酮康唑/甲硝唑的进样量(gg)为 横坐标作线性回归,得回归方程分别为: A=一40.709+827.3609x(r=0.9989), A=0.63504+137.347x(r:0.9999) 明酮康唑在0.223,4.46gg,甲硝唑在0.106 , 2.12gg进样量范围内与峰面积有良好的线性关 系. 2.5回收率试验按处方比例取空白基质,加入酮 康唑对照品,配成模拟样品3份,按供试品溶液的制 备方法制备供试液,并按"样品测定"项下方法测定, 平均回收率为97.23%,RSD为2.35%(n=3).表 明本方法具有良好的回收率. 2.6样品测定按"供试品溶液制备"项下方法制 备供试液及上述色谱条件进行测定,记录色谱图,代 入标准曲线计算样品含量. 表1样品含量测定结果(n=3) 3结果与讨论 3.1本法同时测定了酮康唑乳膏中两种主要成分, 方法简便,精密度好,结果准确可靠. 3.2本法在选用流动相的时候,尽量考虑到了对相 应组分含量的分离,并能与乳膏基质良好分离,有较 好的保留时问和分离度. l二?L三m50??I三0L, 第7卷第3期陆国庆等:HPLC法测定酮康唑乳膏中酮康唑和甲硝唑的含量 Vo1.7N【1.3 (上接第6页) 05l0l5 A.对照品 05l0l5 B.阴性制剂 051015min c.辛苍颗粒 图1HPLC色谱图(1.黄芩苷) 表1加样回收率试验 样品量黄芩苷量加入鲢测得量回收率平均回收率RSD (g)(mg)(mg)(mg)(%)(%)(%) 0.6902.892.545.3496.55 0.6642.782.545.2798.04 0.7122.982.545.4597.4897.89098 0.6882.881.364.2399.24 0.7363.o71.364.409814 2.7样品测定取本品约1.0g研细,精密称定,置 50ml量瓶中,加流动相30ml,超声处理20min,放冷, 滤过,加流动相至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液 1ml,置10ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作 为供试品溶液.精密吸取供试品溶液和黄芩苷对照 品溶液(i0gg/m1)各20l,注入液相色谱仪,结果见 表2. 表2样品测定结果(n=3) 3讨论 3.1流动相的选择…比较了甲醇.水.磷酸,甲醇. 水.冰乙酸,乙腈.磷酸水溶液,甲醇.水一四氢呋喃4 种比例不同的溶剂系统,选择了分离度较好的甲醇. 水(磷酸凋pH:3.0)(44:56)溶剂系统. 3.2提取方法的选择分别对样品进行了甲醇回 流提取,甲醇超声处理,70%甲醇提取,流动相超声 处理,结果以流动相超声处理较好,既保证色谱峰的 分离,同时增加黄芩苷的稳定性2,通过对超声时间 的考察,发现20rain已将样品中的黄芩苷提取完全. 参考文献 l郭平,李章万,蒋学华.HPLC测定l2种中成药制剂中黄芩甙的含 量[J].药物分析杂志,1995,(5):l3,16. 2于波涛,张志荣,刘文胜,等.黄芩前稳定性研究[J].中草药, 2002.33(3):2l8,220 (收稿H期:2005—01.24) ? 9?