1例HIV抗体强阳性标本引起的拖带阳性原因分析

1例HIV抗体强阳性标本引起的拖带阳性原因分析 1例HIV抗体强阳性标本引起的拖带阳性原 因分析 中国现代临床医学杂志,2007年6月,第6卷,第6期 ? 论着? 1例HIV抗体强阳性标本引起的 拖带阳性原因分析 李生菊 【摘要】目的观察全自动酶免检测系统进行ELISA检测时产生阳性拖带的原因.方法初试阳性标本 再次将样管血和血辫血进行双孔复检,阳性标本送省疾病控制中心进行确认.结果使用全自动酶免分析系 统时存在强阳性标本拖带现象.分析认为加样,洗板时的处理不当是造成拖带现象的主要原因. 【关键词】HIV抗体强阳性拖带现象 中图分类号:R392.7文献标识码:B文章编号:1726.8648(2007)06.0013.02 随着血站工作量的不断加大,许多血站开始使 用全自动酶免检测系统,进行血液样本的酶联免疫 试验的全过程控制,大大减少了劳动强度,避免了 手工加样时产生的人为误差,提高了血液检测的质 量和水平.但是在检测强阳性标本时,可能会在加 样,洗涤时污染到邻近标本,引起拖带现象.笔者 在检测过程中遇到1例抗-HIV抗体强阳性的标本引 起的拖带现象.现报告分析如下. 1与方法 1.1仪器与软件AT-plustwo全自动加样仪和用户 软件(瑞士);帝肯洗板机(瑞士);帝肯RMP200全自 动酶免分析仪和用户软件(瑞士). 1.2试剂抗-HIV试剂:北京万泰,批号:I20050404; 厦门新创,批号:2005036601;确认试剂:新加坡 健科有限公司. 1-3标本街头无偿献血样本. 1.4方法 1.4.1根据检测项目和试剂说明书的要求,对AT-plus two进行编程,仪器自检通过后进行加样,阳性,阴 性,质控对照由手工加样,使用一次性加样针,样 本采用十一针加样,方向是A—H.吸取,分配不同 的液体试剂或血液样本后AT按预编程序将加样针 自动清洗3遍,擦拭1次.洗涤时采用帝肯洗板机, 8针洗,方向是A1一A12. 【作者单位l:青海省血液中心检验科Gill宁Sloooo) 1,4,2根据检测项目和试剂说明书的要求,对帝肯 RMP200进行编程,仪器自检完成后选择正确的程序 开始进行试验.使用特弗隆钢针,八针加样,十六 针洗板,方向都是A1一A12.吸取,分配不同的液 体试剂或血液标本后,根据预编程序将加样针用加 压式大流量冲洗加样针内部,再采用涡流方式对加 样针外部进行清洗,另外每次加显色液之前加样针 用终止液净化(注:先用AT加样器完成加样后,样 本位置不变,在RMP200全自动酶免分析仪进行复 检检测,操作严格按照化操作规程进行). 2结果与分析 2.1结果采用AT加样器及帝肯洗板机时引起的阳 性:阳性结果出现在抗-HIV同一块酶标板的A6, A7,Ag,B6位置上,标本OD值分别为3.000,0.699, 0.192,1.053.该试验的Cut-off值为0.122,故此4 份样本为阳性.根据抗-HIV检测标准化操作规程, 将这4份标本用原试剂手工加样(一份标本一个加样 针)做双孔再检,结果A6,A7,B6标本的OD值分 别为3.000,0.195,0.133;A8标本的OD为0.020. A6标本仍为强阳性,A7,A8,B6的OD值均比初 检检验明显降低,A8标本双孔复检结果为阴性.除 A6标本外其余3份标本取血袋上血辫血,再次手工 进行双孔再检,其值为A7,A8,B6为别为O.001, O.003,O.003,均为阴性. 分析:认为A6孔的样本为HIV抗体强阳性, 加样时由于加样针的污染导致B6孔结果为阳性. l4 A7,A8是洗板过程中造成污染,导致阳性结果. 2.2结果采用帝肯RMP200全自动酶免分析仪引 起的阳性:出现在抗一HIV同一块酶标板的A6,A7, A8,A9,A10,B6位置上,标本OD值分别为3.401, 2.778,1.957,0.344,0.229,0.130.该试验的Cut—Off 值为0.150,故此6份标本均为阳性.根据抗一HIV检 测标准化操作规程,将这6份标本用同一试剂,同 一 方法进行双孔再检,结果A6标本OD值为3.324, 仍为强阳性,A7,A8,A9,A10,B6的OD值分别 为0.062,0.015,0.012,0.010,0.132,除B6仍为 弱阳性外其余均为阴性.取A7,A8,A9,A10,B6 标本的血袋上血辫血再次用手工进行双孔再检,其 值分别为0.004,0.003,0.003,0.005,0.004,均为 阴性. 分析:由于A6位置强阳性标本对AT加样针的 污染导致B6位置样管血的污染,使得B6孔在 RMP200上的检测结果也呈阳性反应.由于RMP200 加样方向和洗板方向一致,加样和洗板时可能造成 的双重拖带,使得A7,A8,A9,A10孔位的结果为 阳性反应,并且OD值随加样,洗板方向呈递减趋势. 2-3根据血站基本的要求,每份样本需 要采用两种不同厂家试剂进行检验,两种试剂均为 阳性,报阳性结果.单一试剂阳性经双孔再检仍为 阳性者同样报阳性结果.通过对试验情况及试验结 果的综合分析,由于A6标本为强阳性标本,笔者认 为根据加样,洗涤顺序判断其余可能为强阳性标本 拖带阳性,故将试管血和血辫血均进行了双孔再检, 结果证实除A6标本外其余均为强阳性标本拖带而 产生了假阳性结果.将A6标本送往青海省疾病预防 控制中心HIV确认中心,经蛋白印迹法(wB)确认为 HIV-I抗体阳性,带型为gbl60,gpl20,p66,p55, gp41,p31,p24,p14. 3讨论 随着血站工作量的不断加大及公民自我保护意 识的提高,人们对血液的质量越来越关注,原来的 手工操作已不能适应现状要求,为了进一步提高血 液检测的速度,并保证血液检测的质量,全自动加 样器,洗板机或全自动酶免分析仪逐渐成为了血站 ChineseJournalofCIInIcalMedicine.June.2007,v0I6.N 工作中的必要角色之一,它不尽从根本上解决了一 部分劳动力,更关键的是保证了加样的一致性,避 免了手工加样时产生的人为误差,减少了在试验过 程中的各种人为原因造成的失误,有效保证了血液 检测的可靠性.但也因此而产生了一些问,由于 经济条件的限制,加样时不能完全做到一份样本一 个加样针,洗板时洗液残留量不能完全为0,在整个 检验过程中产生假阳性是无法避免的.在谈"艾" 色变的今天,我们责任重大,一方面不能让一份不 合格血液发往临床,为临床病人负责;另一方面也 要为因为假阳性为献血员造成的心理负担而考虑. 为了有效减少因试验的假阳性对献血员造成不必要 的困扰和血液资源的浪费,在追求效率和质量的同 时应该在不断的实践中找出尽可能避免假阳性的措 施,是我们目前工作中的一个重点. 笔者对试验过程的分析认为造成假阳性的原因 有两个方面:(1)/m样:强阳性标本污染加样针后冲 洗不充分,导致邻近样本的污染;(2)洗板:洗板时 孔内残留量太大或进液量太大溢出,污染到邻近孔 位,洗板不充分导致邻近孔的结果呈阳性反应.分 析原因,通过实践,认为从以下几个方面着手可以 尽可能的避免假阳性结果的发出:(1)平时加强对使 用仪器的维护和保养,并由专人管理,操作尽量固 定人员,并定期用75%酒精擦拭加样针,并清除冲 洗槽壁上日常维护无法彻底清除的附着物;(2)/JI1样 针的冲洗液量的加大,清洗和擦拭次数的增加,洗 板机残留量的设定能有效减少拖带污染,减少假阳 性的产生;(3)不能太死板,双试剂阳性就发阳性结 果.应该结合本次试验情况对检验结果进行认真的 综合分析.有强阳性标本时,注意附近区域其他标 本的检测结果,如有可疑可重新进行检测,必要时 取血辫血或联系笔者再次抽血进行检验;(4)标本检 测时采用两种不同的检测系统.如初检采用仪器加 样,其余在恒温箱,洗板机辅助下手工完成(最好选 择加样方向和洗板的方向不同);复检采用加样,孵 育,洗板一体化的仪器进行检测,以避免重复污染, 假阳性的产生. 【收稿日期:2007.04.06】