蔬菜汁_乙醇对四氯化碳致毒中华大蟾蜍脂质过氧化和转氨酶活性的影响

蔬菜汁_乙醇对四氯化碳致毒中华大蟾蜍脂质过氧化和转氨酶活性的影响 蔬菜汁 、乙醇对四氯化碳致毒中华大蟾蜍 脂质过氧化和转氨酶活性的影响 3陈志超 , 薛鑫燕 , 王伟 , 孙建梅 ()徐州师范大学 ,江苏徐州 221116 ( )摘要 :以四氯化碳 CC l致毒中华大蟾蜍为肝损伤动物模型 ,观察胡萝卜 、西红柿 、甘蓝 、莴苣 、芹菜 、洋葱 、茄 4 子 、青菜 8种蔬菜的混合汁 、乙醇分别对致毒的中华大蟾蜍谷草转氨酶活性及谷丙转氨酶活性的影响 ,并探讨其可 能的机制 。结果显示 ,单纯四氯化碳致毒组肝脏血清谷丙转氨酶 、谷草转氨酶活力均明显高于混合蔬菜汁干预组 ( ) ( ) P < 0. 01, 而显著低于乙醇干预组 P < 0. 01。明混合蔬菜汁对四氯化碳所致的肝损害有保护作用 ,乙醇则会 加重四氯化碳对肝脏的损害 。 关键词 : 中华大蟾蜍 ; 混合蔬菜汁 ; 乙醇 ; 四氯化碳 ; 肝脏 ; 转氨酶 ( ) 文章编号 : 1000 - 7083 200906 - 0886 - 03 中图分类号 : Q959. 5; Q95 233 文献标识码 : A Effec ts of Vege ta b le s Ju ice an d E than o l on the A c t iv ity of Am in o tran sfera se of B u fo bu fo ga rga r iza n s Po ison ed by Ca rbon Te tra ch lor ide 3CH EN Zh i2chao, XU E X in2yan, WAN G W e i, SUN J ian2m e i ( )Xuzhou No rm a l U n ive rsity, Xuzhou, J iangsu P rovince 221116, Ch ina A b stra c t: In p re sen t study, we de tec ted the effec ts of e igh t sp ec ie s of vege tab le ju ice inc lud ing ca rro ts, tom a toe s, cab2 bage, le ttuce, ce le ry, on ion s, eggp lan t and Ch ine se cabbage, and e thano l on the ac tivity of p a rta te am ino tran sfe ra se and a l2 ) ( an ine am ino tran sfe ra se of B ufo bufo ga rga rizans afte r p e ritonea l in jec tion w ith ca rbon te trach lo ride CC l. The unde rlying 4 m echan ism wa s a lso d iscu ssed. O u r re su lts demon stra ted tha t the ac tivitie s of a lan ine am ino tran sfe ra se and a sp a rta te am in2 o tran sfe ra se in the se rum of the an im a ls trea ted w ith CC lwe re sign ifican tly h ighe r than tho se of the group s in te rvened w ith 4 ( ) ( ) the m ixed vege tab le ju ice P < 0. 01 , bu t lowe r than tho se of the group s in te rvened w ith e thano l P < 0. 01. The se sug2 ge st tha t the m ixed vege tab le ju ice can a llevia te the live r in ju ry induced by CC l, whe rea s e thano l can aggrava te the in ju ry. 4 Key word s:B ufo bufo ga rga rizans; m ixed vege tab le ju ice; e thano l; ca rbon te trach lo ride; live r; tran sam ina se ( )(张 锦 周 等 , 1998; M s, 1999; W a sse r et a l., 标改变 四氯化碳 CC l用途广泛 ,目前主要作为化工 4 ) 1999;赵敏等 , 2002;黄根牙等 , 2004 。近年来 ,国内 原料 、溶剂清洗剂 ,是一种很强的亲肝毒物 ,可引起 外学者通过大量研究 ,基本认为脂质过氧化是四氯 肝细胞脂肪积聚增加 ,氨基酸利用率降低 ,膜磷脂交 () 化碳中毒性肝损害的一种机理 周炯亮 , 1988 。 换减少 , 线粒体呼吸改变 , 细胞内 A TP 浓度受抑制 ( ) 乙醇 e thyl a lcoho l, EA 为 中 枢神 经系 统 抑制 及细胞钙含量增高 ,导致肝细胞坏死和脂肪浸润 ,并 剂 ,可促进四氯化碳的吸收 ,加重中毒症状 。长期酗 () 可导致肝硬变 周炯亮 , 1988 。 CC l在肝内代谢活4 ( )化生成三氯甲基自由基 ?CC l和三氯甲基过氧自 3 酒可引起慢性胃炎 、脂肪肝 、肝硬化 、心肌损害等 。 ( ) 由基 ?OOCC l,二者能与亚细胞结构的脂质和蛋 3 有研究表明 ,补充维生素能减轻肝脏的化学性 白质发生共价结合 ,抑制肝细胞内的甘油三脂以极 损伤作用 ,乙醇可促进四氯化碳的吸收 ,加重中毒症 低密度脂蛋白的形式运出肝外 ,使甘油三脂在肝细 状 。本研究试图通过急性整体动物实验 ,观察胡萝 胞内蓄积 ,造成肝细胞内质网等膜性成分的脂质过 卜 、西红柿 、甘蓝 、莴苣 、芹菜 、洋葱 、茄子 、青菜 8 种 氧化 ,导致蛋白质合成障碍 ,脂质分解代谢紊乱 ,从 而损伤肝细胞 ,致使胞质液成分 AL T、A ST等释至胞 蔬菜的混合蔬菜汁对中华大蟾蜍转氨酶活性及其总 外 ,血清 AL T、A ST活性明显增高及相关生理生化指 蛋白量的影响 ,探讨混合蔬菜汁在四氯化碳急性中 毒所致肝损害中的保护机制 ,以期为混合蔬菜汁治 收稿日期 : 2008 212 231 修回日期 : 2009 204 209 3 ( ) 作者简介 :陈志超 1987 ,,男 , 2005 级生物技术专业学生 通讯作者 Co rre spond ing au tho r, E2m a il: sun jianm ei@ xznu. edu. cn 疗化学性肝损伤提供实验依据 ; 同时研究乙醇对四 1周 ,称量并记录蟾蜍体重 。 汁组 。实验前观察 氯化碳中毒的影响 ,为防止四氯化碳中毒以及中毒 1. 3. 2 样品制备 给蟾蜍编号 , 按 10 m l / kg腹部 ( 的治疗提供参考 。目前毒理实验所研究的对象都是 皮下注射 5 %的四氯化碳溶液 5 m l的四氯化碳溶 ) 液充分溶于 100 m l花生油 。分别于后 24 h、48 h、 小白鼠等哺乳动物 ,很少涉及两栖类 。本实验以两 栖类中华大蟾蜍为研究对象 ,可供两栖类的相关研 72 h、96 h 将各组蟾蜍随机处死 3 只 。采用心脏静 究参考 ,也为研究两栖类与哺乳类的代谢 、循环系统 脉穿刺取血法采集血液 ,用 EP管收集血液 ,静置 10 (,20 m in后离心制备血清 血清应无溶血 ,淡黄色 。 的异同提供了实例 。 故最好血液尽量多采集 ,如果一管出现溶血可选用 1 材料与方法 ) 另一管 ,用于测定谷丙转氨酶 、谷草转氨酶活力 。1. 1 实验动物 1. 3. 3 血清谷丙转氨酶和血清谷草转氨酶活力 使用 UV 7504 型紫外 /可见 光分 光 光度 仪测 定 样品 中华大蟾蜍若干只 ,于 2008 年 6 月在徐州师范 () 的吸光度值 ,得出血清中谷丙转氨酶 AL T和血清 大学泉山校区玉泉河附近捕捉 ,从中挑选体重 40 g ()谷草转氨酶 A ST的活力 。 ?6. 0 g、无残肢 、断肢 、表皮无破损 、红肿等健康的 雄性蟾蜍作为实验对象 。 1. 4 统计学分析 将各组实验数据以生物统计学方法 ,在计算机 1. 2 主要药品 、试剂及主要仪器设备 上应用 SPSS8. 0软件处理 ,对实验结果进行 t检验 。 混合 蔬 菜 汁 、乙 醇 、四 氯 化 碳 , 谷 草 转 氨 酶 ()A ST试剂盒购自南京建成生物研究所 , AL T试剂 2 结果 盒购自中生北控生物研究所 。UV7504 型紫外 /可见 2. 1 四氯化碳对谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性的 光分光光度仪 、石英比色皿 、水浴锅 、离心机 、玻璃匀 影响 浆器 。 四氯化碳致 毒 后 中 华 大 蟾 蜍 血 清 谷 丙 转 氨 酶 1. 3 实验方法 1. 3. 1 动物分组() ()按随机原则将 48 只中华大蟾蜍 AL T、谷草转氨酶 A ST活力见表 1。可见致毒后 ( ) ( ) ( ) 血清 AL T、A ST活性均高于对照组 P < 0. 05 ,表明 分为 4 组 , 即 : A 正 常 对 照 组 , B CC l致 毒 组 , 4 ( ) () CCC l+乙醇干预组 , D CC l+ 100 %混合蔬菜四氯化碳对中华大蟾蜍肝脏有一定的影响 。 4 4 表 1 CC l处理对中华大蟾蜍血清 AL T、A ST活性 ( IU /L ) 的影响 4 Ta b le 1 Effec t of CC lon AL T, A ST a c t iv ity ( IU /L ) of B u fo bu fo ga rga r iza n s b lood serum 4 血清 A ST活性 血清 AL T活性 时间 ( )d CC l组CC l组正常对照组 正常对照组 4 4 31 74. 33 ?5. 13 ?4. 58 8. 96 ?5. 69 83. 00 20. 11 ?0. 7833 3 2 65. 00 ?12. 12 11. 35 ?1. 75 90. 67 ?4. 1624. 27 ?1. 4733 3 63. 33 ?2. 52 10. 20 ?2. 82 88. 67 ?13. 5827. 73 ?5. 413 33 4 67. 33 ?5. 69 12. 53 ?2. 48 106. 33 ?2. 5225. 93 ?4. 663 3 3 ) (注 : CC l0. 5 m l / kg 溶于色拉油 ,与正常对照组比 , P < 0. 05, P < 0. 01 4 3 3 3 ( ) No te: CC l0. 5 m l / kg d isso lved in sa lad o il, comp a red w ith no rm a l group , P < 0. 05, P < 0. 01 4 2. 2 混合蔬菜汁 、乙醇对四氯化碳致毒大蟾蜍谷草( AL T)活性的影响谷丙转氨酶 转氨酶 ( A ST)活性的影响由表 3可见 ,第 1 d四氯化碳致毒组 、乙醇干预 由表 2可见 ,第 1 d 蟾蜍对四氯化碳和蔬菜汁 ( ) 组与正常组比较差异显著 P < 0. 05 ,第 2 d四氯化 吸收较慢 ,四氯化碳毒性没有完全表现 ,蔬菜汁还未 碳致毒组 、乙醇干预组与正常组比较差异极其显著 能发挥保护作用 ,乙醇能够加速四氯化碳的毒害作( ) P < 0. 01 ,四氯化碳对蟾蜍肝脏造成了损害 ,乙醇 用 。第 3,4 d四氯化碳 、蔬菜汁和乙醇都已经起到 ( 干预组及四氯化碳致毒组相比差异极其显著 P <了一定作用 ,蔬菜汁的保护作用和乙醇的加速毒害 ) 0. 01 ,乙醇的确促进了四氯化碳的吸收 ,加重了毒 作用都得到了充分的发挥 ,第 4 d 四氯化碳对肝脏 害 ,蔬菜汁组与致毒组和乙醇干预组比较由无明显 的毒害作 用 和乙 醇的 加 速毒 害作 用得 到 充分 的 表 差异到差异极其显著 ,说明蔬菜汁对四氯化碳所致 现 ,在蔬菜汁的作用下蟾蜍肝脏损害基本消失 。 的肝损害确实有保护作用 。 2. 3 混合蔬菜汁 、乙醇对四氯化碳致毒中华大蟾蜍 887 表 2 各种情况对中华大蟾蜍血清谷草转氨酶 ( A ST)活性的影响 Ta b le 2 Effec ts on A ST a c t iv ity of B u fo bu fo ga rga r iza n s b lood serum in four con d it ion s CC l致毒组CC l+乙醇组CC l+ 100 %蔬菜汁组( ) 时间 d 正常对照组 4 4 4 3?5. 13 ?4. 58 107. 33 ?15. 50 # 74. 33 83. 00 1 84. 67 ?9. 02 33 76. 67 ?2. 52 # + 65. 00 ?12. 12 90. 67 ?4. 16 141. 67 ?21. 22# 2 3 33 3 63. 33 ?2. 52 67. 33 ?4. 51# + + 88. 67 ?13. 58 145. 00 ?6. 56## 3 67. 33 ?5. 69 3 33 3 67. 33 ?4. 04 ## + + 106. 33 ?2. 52 149. 33 ?13. 32# 4 3 3 3 注 : 与正常对照组比 , P < 0. 05, P < 0. 01;与 CC l组比 , #P < 0. 05 , ##P < 0. 01; 与 CC l+乙醇组比 , + P < 0. 005 , + + P < 0. 001。活性 4 4 单位为卡门氏单位 , 1 卡门氏单位 = 0. 482 IU /L , 25 ? 3 3 3 No te: comp a red w ith no rm a l group , P < 0. 05, P < 0. 01; comp a red w ith CC l group , #P < 0. 05, ##P < 0. 01; comp a red w ith CC l add e thyl 4 4 a lcoho l group , + P < 0. 005 , + + P < 0. 001; n = 2; the ac tivity un it is Ka llm ann un it, 1 Ka llm ann un it = 0. 482 IU /L , 25 ? 表 3 各种情况对中华大蟾蜍血清 AL T活性的影响 Ta b le 3 Effects on AL T a c t iv ity of B u fo bu fo ga rga r iza n s b lood serum in four con d it ion s CC l致毒组CC l+乙醇组CC l+ 100 %蔬菜汁组( ) 时间 d 正常对照组 4 4 4 33?5. 69 ?1. 46 8. 96 19. 22 1 20. 11 ?0. 7822. 26 ?2. 41 3 33 3 3 11. 35 ?1. 75 16. 87 24. 27 ?1. 4753. 23 ?1. 08## ?1. 40## + + 2 33 3 10. 20 ?2. 82 11. 69 ?1. 28 # + + 27. 73 ?5. 41 59. 50 ?2. 52## 3 12. 53 ?2. 48 33 3 11. 83 ?0. 63 # + + 25. 93 ?4. 66 53. 23 ?1. 08## 4 3 3 3 注 :与正常对照组比 , P < 0. 05 , P < 0. 01;与 CC l组比 , #P < 0. 05 , ##P < 0. 01;与 CC l+乙醇组比 , + P < 0. 005 , + + P < 0. 001。活力 4 4 单位为 U /L 3 3 3 No te: comp a red w ith no rm a l group , P < 0. 05, P < 0. 01; comp a red w ith CC lgroup , #P < 0. 05, ##P < 0. 01; comp a red w ith CC ladd e thyl 4 4 a lcoho l group , + P < 0. 005, + + P < 0. 001; n = 2; the activity un it is U /L 如硫醇蛋白 、维生素 E 等 , 维生素 C 是体内抗氧化 3 讨论 剂的第一防线 ,在其消耗之前血浆中不发生过氧化 数据分析显示给蟾蜍腹腔注射四氯化碳溶液可 ( ) F re i, 1991 ,不仅可以有效地清除水中的各种自由 造成蟾蜍急性肝损伤 。致毒后血清 AL T、A ST活性 基 ,而且也能通过增强维生素 E 的活性来保护膜免 均显著高于对照组 ,解剖可见部分肝脏发生脂肪变 受损伤 。性 ,主要表现为 :部分肝脏出现点状 、块状斑点 ,肝脏 颜色变成深褐色甚至黑色 ,肝脏出现碎裂 ,表明肝脏 4 参考文献 受到不 同 程 度 的 损 伤 。蔬 菜 汁 组 在 第 4 d 血 清 黄根牙 ,倪润洲 ,张家栋 ,等. 2004. 凯西莱对四氯化碳致小鼠肝毒性 AL T、A ST活性与正常对照组差异无显著性 ,表明四 ( ) 保护作用的研究 [ J ]. 南通医学院学报 , 24 4 : 383 ,386. 氯化碳已经代谢排出 ,肝损伤已基本修复 。致毒后 张锦周 ,庄志雄. 1998. 四氯化碳急性染毒对大鼠肝脏脂质过氧化的 第 2 d、第 3 d蔬菜汁组血清 AL T、A ST活性虽较正常 ( ) 影响 [ J ]. 中国公共卫生学报 , 17 6 : 341 ,342. 组高 ,但均低于四氯化碳组 ,明显低于乙醇干预组 , 赵敏 ,杨杏芬 ,池莉平 ,等. 2002. 小鼠急性四氯化碳肝损伤模型的建 表明蔬菜汁对肝损害有一定的保护治疗作用 ,乙醇 ( ) 立及在保健食品筛选中的应用 [ J ]. 华南预防医学 , 28 5 : 5 ,8. 周炯 ( ) 亮. 1988. 四氯化碳毒理学研究进展 [ J ]. 职业医学 , 15 2 : 47 的确能加重肝脏毒害作用 。 ,49. 本实验还表明 , 在致毒同时给予蟾蜍 100 %的 F re i B. 1991. A sco rb ic ac id p ro tec ts lip id s in hum an p la sm a and low 混合蔬菜汁 ,对四氯化碳引起的脂质过氧化有明显 den sity lipop ro te in aga in st oxida tive dam age [ J ]. Am J C lin N u tr, 54 的拮抗作用 。可能与蔬菜汁中含有多种抗氧化物质 ( ) Sup. 6 : 113 ,118. 如维生素 C等可清除三氯甲基自由基有关 。维生素 M s J de Foww. 1999. Ca rbon Te trach lo ride [ R ]. N a tiona l In stitu te of C 是一种水溶性抗氧化剂 ,其分子含有特殊的烯醇 Pub lic H ea lth and Environm en t. 式结构 ,非常容易释放氢原子 ,达到清除自由基的作 W a sse r S, Tan CE. 1999. Exp erim en tal mode ls of hep a tic fib ro sis in the 用 ,其抗氧化能力远强于血浆中的其他抗氧化成分 ( ) ra t[ J ]. Singapo re: A nn A cad M ed, 28 1 : 109 ,111.