血红蛋白的测定

血红蛋白的测定 ——沙利氏比色法   测定血红蛋白的方法很多，常见的有直接比色法，光电比色法，沙利氏(Sahli) 目视比色法（间接比色法）。Sahli氏目视比色法虽然精确度较差，但方法简便快速。 【目的】了解Hb测定方法，练习测定Hb含量的沙利氏比色法，理解Hb测定原理。 【原理】  血液与盐酸作用后，释放出血红蛋白，Hb被酸化后变为褐色的盐酸高铁血红蛋白，与标准色柱相比，便可测出其含量。 【器材与试剂】 （1）沙利氏血红蛋白计一套 吸管为一厚壁毛细玻璃管，其上有10微升和20微升两个刻度，上端接一橡皮吸管。比色架内有标准色柱。测定管上有两种刻 度，从下往上，一侧有2—24的刻度，表示100m1血液中所含血红蛋白克数，以g/dl表示；另一侧有20—160的刻度，表示100ml血液中血红蛋白的百分数。国产的血红蛋白计是以每100ml血液含14.5g血红蛋白为100％而设制。    （2）0.1M盐酸 （3）75%酒精棉球、干棉球、采血针、蒸馏水 【步骤】 （1）将测定管和吸管依次用自来水、９５％酒精洗净，干燥备用。 （2）向测定管内加入0.1M盐酸5-6滴，约加到管下端刻度“2”为止。 （3）采血、比色：先消毒无名指尖，再用采血针在无名指尖处采血，用干棉球擦去第一滴血，待第二滴血自然流出一大滴时，用吸管取血液20ul。擦去吸管外血液后，轻轻加入测定管底部，并回吸数次以洗出吸管中的血液。轻轻振动比色管，使血液与盐酸充分混合。 （4）静置10min，待血液变成褐色后，缓缓滴加蒸馏水，每加1滴，用细玻璃棒搅动一次，直到颜色与标准色柱完全相同为止。液柱凹面所指的刻度数，即为每百毫升血液中血红蛋白的克数，用g/dl或g％表示。